pBSFI-myr-akt-T308A/S473A小鼠基因质

基本信息
名称：pBSFI-myr-akt-T308A/S473A小鼠基因质粒
别称: Plasmid#49191
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：小鼠
基因类型：cDNA
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
 pBSFI-myr-akt-T308A/S473A质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                4474 bp ds-DNA     circular SYN 30-SEP-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 4474)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4474
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     misc_feature    63..95
                     /label=myristolation signal
     misc_feature    96..1535
                     /label=akt-T308A/S473A
     CDS             1536..1562
                     /codon_start=1
                     /product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
                     /label=HA
                     /translation="YPYDVPDYA"
     promoter        complement(1632..1650)
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     primer_bind     complement(1657..1673)
                     /label=M13 fwd
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     rep_origin      complement(1814..2269)
                     /direction=LEFT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        2296..2400
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     CDS             2401..3261
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      3432..4020
                     /direction=RIGHT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     primer_bind     4406..4422
                     /label=M13 rev
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     promoter        4443..4461
                     /label=T3 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
ORIGIN
        1 agctggccat tacggccgcg gccgcctcta gaggatctgg taccacgcgt atcgataagc
       61 ttatggggag cagcaagagc aagcccaagt ctagaatgaa cgacgtagcc attgtgaagg
      121 agggctggct gcacaaacga ggggaatata ttaaaacctg gcggccacgc tacttcctcc
      181 tcaagaacga tggcaccttt attggctaca aggaacggcc tcaggatgtg gatcagcgag
      241 agtccccact caacaacttc tcagtggcac aatgccagct gatgaagaca gagcggccaa
      301 ggcccaacac ctttatcatc cgctgcctgc agtggaccac agtcattgag cgcaccttcc
      361 atgtggaaac gcctgaggag cgggaagaat gggccaccgc cattcagact gtggccgatg
      421 gactcaagag gcaggaagaa gagacgatgg acttccgatc aggctcaccc agtgacaact
      481 caggggctga agagatggag gtgtccctgg ccaagcccaa gcaccgtgtg accatgaacg
      541 agtttgagta cctgaaacta ctgggcaagg gcacctttgg gaaagtgatt ctggtgaaag
      601 agaaggccac aggccgctac tatgccatga agatcctcaa gaaggaggtc atcgtcgcca
      661 aggatgaggt tgcccacacg cttactgaga accgtgtcct gcagaactct aggcatccct
      721 tccttacggc cctcaagtac tcattccaga cccacgaccg cctctgcttt gtcatggagt
      781 atgccaacgg gggcgagctc ttcttccacc tgtctcgaga gcgcgtgttc tccgaggacc
      841 gggcccgctt ctatggtgcg gagattgtgt ctgccctgga ctacttgcac tccgagaaga
      901 acgtggtgta ccgggacctg aagctggaga acctcatgct ggacaaggac gggcacatca
      961 agataacgga cttcgggctg tgcaaggagg ggatcaagga tggtgccact atgaaggcat
     1021 tctgcggaac gccggagtac ctggcccctg aggtgctgga ggacaacgac tacggccgtg
     1081 cagtggactg gtgggggctg ggcgtggtca tgtatgagat gatgtgtggc cgcctgccct
     1141 tctacaacca ggaccacgag aagctgttcg agctgatcct catggaggag atccgcttcc
     1201 cgcgcacact cggccctgag gccaagtccc tgctctccgg gctgctcaag aaggacccta
     1261 cacagaggct cggtgggggc tctgaggatg ccaaggagat catgcagcac cggttctttg
     1321 ccaacatcgt gtggcaggat gtgtatgaga agaagctgag cccacctttc aagccccagg
     1381 tcacctctga gactgacacc aggtatttcg atgaggagtt cacagctcag atgatcacca
     1441 tcacgccgcc tgatcaagat gacagcatgg agtgtgtgga cagtgagcgg aggccgcact
     1501 tcccccagtt cgcctactca gccagtggca cagcctaccc atacgatgtt ccagattacg
     1561 cttctagatg aattcacgcg taagcttatc gatgtcgacg ggcccggccg cctcggccgt
     1621 acccaattcg ccctatagtg agtcgtatta caattcactg gccgtcgttt tacaacgtcg
     1681 tgactgggaa aaccctggcg ttacccaact taatcgcctt gcagcacatc cccctttcgc
     1741 cagctggcgt aatagcgaag aggcccgcac cgatcgccct tcccaacagt tgcgcagcct
     1801 gaatggcgaa tggaaattgt aagcgttaat attttgttaa aattcgcgtt aaatttttgt
     1861 taaatcagct cattttttaa ccaataggcc gaaatcggca aaatccctta taaatcaaaa
     1921 gaatagaccg agatagggtt gagtgttgtt ccagtttgga acaagagtcc actattaaag
     1981 aacgtggact ccaacgtcaa agggcgaaaa accgtctatc agggcgatgg cccactacgt
     2041 gaaccatcac cctaatcaag ttttttgggg tcgaggtgcc gtaaagcact aaatcggaac
     2101 cctaaaggga gcccccgatt tagagcttga cggggaaagc cggcgaacgt ggcgagaaag
     2161 gaagggaaga aagcgaaagg agcgggcgct agggcgctgg caagtgtagc ggtcacgctg
     2221 cgcgtaacca ccacacccgc cgcgcttaat gcgccgctac agggcgcgtc aggtggcact
     2281 tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt tctaaataca ttcaaatatg
     2341 tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat aatattgaaa aaggaagagt
     2401 atgagtattc aacatttccg tgtcgccctt attccctttt ttgcggcatt ttgccttcct
     2461 gtttttgctc acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg ctgaagatca gttgggtgca
     2521 cgagtgggtt acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga tccttgagag ttttcgcccc
     2581 gaagaacgtt ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc tatgtggcgc ggtattatcc
     2641 cgtattgacg ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac actattctca gaatgacttg
     2701 gttgagtact caccagtcac agaaaagcat cttacggatg gcatgacagt aagagaatta
     2761 tgcagtgctg ccataaccat gagtgataac actgcggcca acttacttct gacaacgatc
     2821 ggaggaccga aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg gggatcatgt aactcgcctt
     2881 gatcgttggg aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg acgagcgtga caccacgatg
     2941 cctgtagcaa tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg gcgaactact tactctagct
     3001 tcccggcaac aattaataga ctggatggag gcggataaag ttgcaggacc acttctgcgc
     3061 tcggcccttc cggctggctg gtttattgct gataaatctg gagccggtga gcgtgggtct
     3121 cgcggtatca ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct cccgtatcgt agttatctac
     3181 acgacgggga gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac agatcgctga gataggtgcc
     3241 tcactgatta agcattggta actgtcagac caagtttact catatatact ttagattgat
     3301 ttaaaacttc atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga tcctttttga taatctcatg
     3361 accaaaatcc cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt cagaccccgt agaaaagatc
     3421 aaaggatctt cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct gctgcttgca aacaaaaaaa
     3481 ccaccgctac cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc taccaactct ttttccgaag
     3541 gtaactggct tcagcagagc gcagatacca aatactgtcc ttctagtgta gccgtagtta
     3601 ggccaccact tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc tcgctctgct aatcctgtta
     3661 ccagtggctg ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg ggttggactc aagacgatag
     3721 ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt cgtgcacaca gcccagcttg
     3781 gagcgaacga cctacaccga actgagatac ctacagcgtg agctatgaga aagcgccacg
     3841 cttcccgaag ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg gcagggtcgg aacaggagag
     3901 cgcacgaggg agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt atagtcctgt cgggtttcgc
     3961 cacctctgac ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag gggggcggag cctatggaaa
     4021 aacgccagca acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt gctggccttt tgctcacatg
     4081 ttctttcctg cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta ttaccgcctt tgagtgagct
     4141 gataccgctc gccgcagccg aacgaccgag cgcagcgagt cagtgagcga ggaagcggaa
     4201 gagcgcccaa tacgcaaacc gcctctcccc gcgcgttggc cgattcatta atgcagctgg
     4261 cacgacaggt ttcccgactg gaaagcgggc agtgagcgca acgcaattaa tgtgagttag
     4321 ctcactcatt aggcacccca ggctttacac tttatgcttc cggctcgtat gttgtgtgga
     4381 attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagctatg accatgatta cgccaagctc
     4441 gaaattaacc ctcactaaag ggaacaaaag ctgg
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3908/pCMV-SPORT6-CHST8人源基因质粒

P3909/pCMV-SPORT6-ATP5IF1（2点突变）人源基因质粒

P3910/pCMV-SPORT6-LYRM4（1点突变）人源基因质粒

P3911/pCMV-SPORT6-ADIPOR1人源基因质粒

P3912/pCMV-SPORT6-WSB2人源基因质粒

P3913/pCMV-SPORT6-FEZ1人源基因质粒

P3914/pCMV-SPORT6-SLC50A1人源基因质粒

P3915/pCMV-SPORT6-GOPC人源基因质粒

P3916/pCMV-SPORT6-TBRG4人源基因质粒

P3917/pCMV-SPORT6-TRIM21人源基因质粒

P3918/pCMV-SPORT6-PBLD（1同义突变）人源基因质粒