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- Xybio
- 上海
- P1036
- 2025年07月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pre--Hsa-Let-7a-1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pLL3.7-Hsa-Let-7a-1miRNA人源基因调控质粒
别称: pre--Hsa-Let-7a-1
启动子：CMV
复制子: pUC
终止子: WPRE
质粒分类: RNA文库质粒；RNA人源质粒；miRNA人源质粒
质粒大小：8994bp
质粒标签：N-HA
原核抗性: Amp
筛选标记：Puro
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37度
| 表达宿主: | 293T等哺乳细胞 |
|---|---|
| 培养条件: | 37℃，5%CO2 |
| 诱导方式: | 无需诱导 |
| 5'测序引物: | mU6-F（CAGCACAAAAGGAAACTCACC） |
| 3'测序引物: | SV40-R（GGACTTTCCACACCTGGTTG） |
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞,慢病毒
载体用途：信号报告
基因种属：人
基因类型：miRNA
原核抗性：Amp
真核抗性：Puro
荧光蛋白：
质粒简介
pLL3.7-Hsa-Let-7a-1miRNA质粒是在pLL3.7载体上克隆了一段非编码核苷酸序列得到的一个哺乳细胞慢病毒miRNA(MicroRNA)表达质粒。mU6启动Hsa-Let-7a-1miRNA的转录。该质粒可作为普通过表达质粒直接转染哺乳细胞，其是第三代慢病毒载体，所以也可包装成慢病毒侵染细胞。质粒本身同时带有EGFP荧光标签和Puro抗性标记，可利用EGFP来检测转染效率，或可用流式细胞仪和嘌呤霉素筛选转染后的细胞得到阳性克隆。
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4006/pCMV-SPORT6-LCMT2人源基因质粒 |
| P4007/pCMV-SPORT6-LRRC40人源基因质粒 |
| P4008/pCMV-SPORT6-RPSA人源基因质粒 |
| P4009/pCMV-SPORT6-MKRN2（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4010/pCMV-SPORT6-UCN2人源基因质粒 |
| P4011/pCMV-SPORT6-MOB3A人源基因质粒 |
| P4012/pCMV-SPORT6-MAP7D1（827-2523bp）人源基因质粒 |
| P4013/pCMV-SPORT6-H3F3B人源基因质粒 |
| P4014/pCMV-SPORT6-C14orf80人源基因质粒 |
| P4015/pCMV-SPORT6-NABP1人源基因质粒 |
| P4016/pCMV-SPORT6-SLC16A5（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4017/pCMV-SPORT6-SLBP人源基因质粒 |
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文献和实验freedegree hsa-miR-625 和hsa-miR-625* hsa-mir-532-5p 和hsa-miR-532-3p hsa-mir-34a 和 hsa-mir-34b （同源？？） hsa-let-7a-2 和 hsa-let-7a-1 （分布不同？？） 晕了，赐教啊 zhujoker hsa-miR-625 和hsa-miR-625* 这2个第一个
freedegree release 14和release 13整个数据全变了，同一条miRNA，基因组中的位置变了，是什么原因？是基因组数据还是miRNA数据的变了？ 举一个例子： ID Chromosome Start End Strand release hsa-let-7a-1 9 95978060 95978139 + 13.0 hsa-let-7a-1 9 96938239 96938318 + 14
【求助】全新菜鸟多次摸索碰壁后求高手指导，到底miRNA靶基因预测具体要怎么操作啊！
进行靶基因预测，已知其序列为TGAGGTAGTAGGTTGTATAGTT，在mirbase上直接用序列搜索（这样对吗？），得到多个结果，ID分别为 cel-let-7,hsa-let-7a等等（这些ID都代表什么呢？）,点击进cel-let-7，里面说Predicted targets为DIANA-MICROT:cel-let-7 ；MICRORNA.ORG:cel-let-7 ；TARGETSCAN-WORM:cel-let-7 （这三个结果是代表什么呢？如何进一步查询这3个结果的相关
