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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_001289823.1;FUR;PACE;PCSK3;SPC1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCDNA3.1-FURIN（1同义突变）人源基因质粒
别称: NM_001289823.1;FUR;PACE;PCSK3;SPC1
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pCDNA3.1-FURIN（1个同义突变）人源基因质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7833 bp ds-DNA circular SYN 11-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pCDNA3.1-FURIN
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7833)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7833
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 202..581
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 582..785
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 830..848
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
regulatory 902..911
/regulatory_class="other"
/note="Kozak"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
misc_feature 908..3289
/note="FURIN"
CDS 3305..3322
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
polyA_signal 3400..3624
/note="bGH poly(A) signal"
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 3670..4098
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 4112..4441
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 4292..4427
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 4508..5302
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="Neo"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 5476..5597
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(6048..6633)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6804..7664)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(7665..7769)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag ccagtatctg ctccctgctt
61 gtgtgttgga ggtcgctgag tagtgcgcga gcaaaattta agctacaaca aggcaaggct
121 tgaccgacaa ttgcatgaag aatctgctta gggttaggcg ttttgcgctg cttcgcgatg
181 tacgggccag atatacgcgt tgacattgat tattgactag ttattaatag taatcaatta
241 cggggtcatt agttcatagc ccatatatgg agttccgcgt tacataactt acggtaaatg
301 gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc
361 ccatagtaac gccaataggg actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat ttacggtaaa
421 ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc atatgccaag tacgccccct attgacgtca
481 atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg cccagtacat gaccttatgg gactttccta
541 cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt
601 acatcaatgg gcgtggatag cggtttgact cacggggatt tccaagtctc caccccattg
661 acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca
721 actccgcccc attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca
781 gagctctctg gctaactaga gaacccactg cttactggct tatcgaaatt aatacgactc
841 actataggga gacccaagct ggctagcgtt taaacttaag cttggtaccg agctcggatc
901 cgccaccatg gagctgaggc cctggttgct atgggtggta gcagcaacag gaaccttggt
961 cctgctagca gctgatgctc agggccagaa ggtcttcacc aacacgtggg ctgtgcgcat
1021 ccctggaggc ccagcggtgg ccaacagtgt ggcacggaag catgggttcc tcaacctggg
1081 ccagatcttc ggggactatt accacttctg gcatcgagga gtgacgaagc ggtccctgtc
1141 gcctcaccgc ccgcggcaca gccggctgca gagggagcct caagtacagt ggctggaaca
1201 gcaggtggca aagcgacgga ctaaacggga cgtgtaccag gagcccacag accccaagtt
1261 tcctcagcag tggtacctgt ctggtgtcac tcagcgggac ctgaatgtga aggcggcctg
1321 ggcgcagggc tacacagggc acggcattgt ggtctccatt ctggacgatg gcatcgagaa
1381 gaaccacccg gacttggcag gcaattatga tcctggggcc agttttgatg tcaatgacca
1441 ggaccctgac ccccagcctc ggtacacaca gatgaatgac aacaggcacg gcacacggtg
1501 tgcgggggaa gtggctgcgg tggccaacaa cggtgtctgt ggtgtaggtg tggcctacaa
1561 cgcccgcatt ggaggggtgc gcatgctgga tggcgaggtg acagatgcag tggaggcacg
1621 ctcgctgggc ctgaacccca accacatcca catctacagt gccagctggg gccccgagga
1681 tgacggcaag acagtggatg ggccagcccg cctcgccgag gaggccttct tccgtggggt
1741 tagccagggc cgaggggggc tgggctccat ctttgtctgg gcctcgggga acgggggccg
1801 ggaacatgac agctgcaact gcgacggcta caccaacagt atctacacgc tgtccatcag
1861 cagcgccacg cagtttggca acgtgccgtg gtacagcgag gcctgctcgt ccacactggc
1921 cacgacctac agcagtggca accagaatga gaagcagatc gtgacgactg acttgcggca
1981 gaagtgcacg gagtctcaca cgggcacctc agcctctgcc cccttagcag ccggcatcat
2041 tgctctcacc ctggaggcca ataagaacct cacatggcgg gacatgcaac acctggtggt
2101 acagacctcg aagccagccc acctcaatgc caacgactgg gccaccaatg gtgtgggccg
2161 gaaagtgagc cactcatatg gctacgggct tttggacgca ggcgccatgg tggccctggc
2221 ccagaattgg accacagtgg ccccccagcg gaagtgcatc atcgacatcc tcaccgagcc
2281 caaagacatc gggaaacggc tcgaggtgcg gaagaccgtg accgcgtgcc tgggcgagcc
2341 caaccacatc actcggctgg agcacgctca ggcgcggctc accctgtcct ataatcgccg
2401 tggcgacctg gccatccacc tggtcagccc catgggcacc cgctccaccc tgctggcagc
2461 caggccacat gactactccg cagatgggtt taatgactgg gccttcatga caactcattc
2521 ctgggatgag gatccctctg gcgagtgggt cctagagatt gaaaacacca gcgaagccaa
2581 caactatggg acgctgacca agttcaccct cgtactctat ggcaccgccc ctgaggggct
2641 gcccgtacct ccagaaagca gtggctgcaa gaccctcacg tccagtcagg cctgtgtggt
2701 gtgcgaggaa ggcttctccc tgcaccagaa gagctgtgtc cagcactgcc ctccagggtt
2761 cgccccccaa gtcctcgata cgcactatag caccgagaat gacgtggaga ccatccgggc
2821 cagcgtctgc gccccctgcc acgcctcatg tgccacatgc caggggccgg ccctgacaga
2881 ctgcctcagc tgccccagcc acgcctcctt ggaccctgtg gagcagactt gctcccggca
2941 aagccagagc agccgagagt ccccgccaca gcagcagcca cctcggctgc ccccggaggt
3001 ggaggcgggg caacggctgc gggcagggct gctgccctca cacctgcctg aggtggtggc
3061 cggcctcagc tgcgccttca tcgtgctggt cttcgtcact gtcttcctgg tcctgcagct
3121 gcgctctggc tttagttttc ggggggtgaa ggtgtacacc atggaccgtg gcctcatctc
3181 ctacaagggg ctgccccctg aagcctggca ggaggagtgc ccgtctgact cagaagagga
3241 cgagggccgg ggcgagagga ccgcctttat caaagaccag agcgccctcg gcggtggagg
3301 aagtcatcac catcaccatc actgaattct gcagatatcc agcacagtgg cggccgctcg
3361 agtctagagg gcccgtttaa acccgctgat cagcctcgac tgtgccttct agttgccagc
3421 catctgttgt ttgcccctcc cccgtgcctt ccttgaccct ggaaggtgcc actcccactg
3481 tcctttccta ataaaatgag gaaattgcat cgcattgtct gagtaggtgt cattctattc
3541 tggggggtgg ggtggggcag gacagcaagg gggaggattg ggaagacaat agcaggcatg
3601 ctggggatgc ggtgggctct atggcttctg aggcggaaag aaccagctgg ggctctaggg
3661 ggtatcccca cgcgccctgt agcggcgcat taagcgcggc gggtgtggtg gttacgcgca
3721 gcgtgaccgc tacacttgcc agcgccctag cgcccgctcc tttcgctttc ttcccttcct
3781 ttctcgccac gttcgccggc tttccccgtc aagctctaaa tcgggggctc cctttagggt
3841 tccgatttag tgctttacgg cacctcgacc ccaaaaaact tgattagggt gatggttcac
3901 gtagtgggcc atcgccctga tagacggttt ttcgcccttt gacgttggag tccacgttct
3961 ttaatagtgg actcttgttc caaactggaa caacactcaa ccctatctcg gtctattctt
4021 ttgatttata agggattttg ccgatttcgg cctattggtt aaaaaatgag ctgatttaac
4081 aaaaatttaa cgcgaattaa ttctgtggaa tgtgtgtcag ttagggtgtg gaaagtcccc
4141 aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag caaccaggtg
4201 tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc
4261 agcaaccata gtcccgcccc taactccgcc catcccgccc ctaactccgc ccagttccgc
4321 ccattctccg ccccatggct gactaatttt ttttatttat gcagaggccg aggccgcctc
4381 tgcctctgag ctattccaga agtagtgagg aggctttttt ggaggcctag gcttttgcaa
4441 aaagctcccg ggagcttgta tatccatttt cggatctgat caagagacag gatgaggatc
4501 gtttcgcatg attgaacaag atggattgca cgcaggttct ccggccgctt gggtggagag
4561 gctattcggc tatgactggg cacaacagac aatcggctgc tctgatgccg ccgtgttccg
4621 gctgtcagcg caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc gacctgtccg gtgccctgaa
4681 tgaactgcag gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc acgacgggcg ttccttgcgc
4741 agctgtgctc gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg ctgctattgg gcgaagtgcc
4801 ggggcaggat ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag aaagtatcca tcatggctga
4861 tgcaatgcgg cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc ccattcgacc accaagcgaa
4921 acatcgcatc gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt cttgtcgatc aggatgatct
4981 ggacgaagag catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc gccaggctca aggcgcgcat
5041 gcccgacggc gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc tgcttgccga atatcatggt
5101 ggaaaatggc cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg ctgggtgtgg cggaccgcta
5161 tcaggacata gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag cttggcggcg aatgggctga
5221 ccgcttcctc gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg cagcgcatcg ccttctatcg
5281 ccttcttgac gagttcttct gagcgggact ctggggttcg aaatgaccga ccaagcgacg
5341 cccaacctgc catcacgaga tttcgattcc accgccgcct tctatgaaag gttgggcttc
5401 ggaatcgttt tccgggacgc cggctggatg atcctccagc gcggggatct catgctggag
5461 ttcttcgccc accccaactt gtttattgca gcttataatg gttacaaata aagcaatagc
5521 atcacaaatt tcacaaataa agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg tttgtccaaa
5581 ctcatcaatg tatcttatca tgtctgtata ccgtcgacct ctagctagag cttggcgtaa
5641 tcatggtcat agctgtttcc tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata
5701 cgagccggaa gcataaagtg taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta actcacatta
5761 attgcgttgc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctgcattaa
5821 tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg
5881 ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag
5941 gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa
6001 ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc
6061 cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca
6121 ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg
6181 accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct
6241 catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt
6301 gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag
6361 tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc
6421 agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac
6481 actagaagaa cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga
6541 gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtttttt tgtttgcaag
6601 cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg
6661 tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa
6721 aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata
6781 tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg
6841 atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat aactacgata
6901 cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc acgctcaccg
6961 gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct
7021 gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag agtaagtagt
7081 tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgcta caggcatcgt ggtgtcacgc
7141 tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga
7201 tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt
7261 aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc tcttactgtc
7321 atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa
7381 tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa tacgggataa taccgcgcca
7441 catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca
7501 aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc caactgatct
7561 tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc
7621 gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt cctttttcaa
7681 tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt
7741 tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc acctgacgtc
7801 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCDNA3.1-FURIN（1同义突变）人源基因质粒
别称: NM_001289823.1;FUR;PACE;PCSK3;SPC1
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pCDNA3.1-FURIN（1个同义突变）人源基因质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7833 bp ds-DNA circular SYN 11-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pCDNA3.1-FURIN
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7833)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7833
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 202..581
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 582..785
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 830..848
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
regulatory 902..911
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of translation (Kozak, 1987)"
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/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 4112..4441
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
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/note="SV40 origin of replication"
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GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
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/note="SV40 polyadenylation signal"
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/note="AmpR"
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ORIGIN
1 gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag ccagtatctg ctccctgctt
61 gtgtgttgga ggtcgctgag tagtgcgcga gcaaaattta agctacaaca aggcaaggct
121 tgaccgacaa ttgcatgaag aatctgctta gggttaggcg ttttgcgctg cttcgcgatg
181 tacgggccag atatacgcgt tgacattgat tattgactag ttattaatag taatcaatta
241 cggggtcatt agttcatagc ccatatatgg agttccgcgt tacataactt acggtaaatg
301 gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc
361 ccatagtaac gccaataggg actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat ttacggtaaa
421 ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc atatgccaag tacgccccct attgacgtca
481 atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg cccagtacat gaccttatgg gactttccta
541 cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt
601 acatcaatgg gcgtggatag cggtttgact cacggggatt tccaagtctc caccccattg
661 acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca
721 actccgcccc attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca
781 gagctctctg gctaactaga gaacccactg cttactggct tatcgaaatt aatacgactc
841 actataggga gacccaagct ggctagcgtt taaacttaag cttggtaccg agctcggatc
901 cgccaccatg gagctgaggc cctggttgct atgggtggta gcagcaacag gaaccttggt
961 cctgctagca gctgatgctc agggccagaa ggtcttcacc aacacgtggg ctgtgcgcat
1021 ccctggaggc ccagcggtgg ccaacagtgt ggcacggaag catgggttcc tcaacctggg
1081 ccagatcttc ggggactatt accacttctg gcatcgagga gtgacgaagc ggtccctgtc
1141 gcctcaccgc ccgcggcaca gccggctgca gagggagcct caagtacagt ggctggaaca
1201 gcaggtggca aagcgacgga ctaaacggga cgtgtaccag gagcccacag accccaagtt
1261 tcctcagcag tggtacctgt ctggtgtcac tcagcgggac ctgaatgtga aggcggcctg
1321 ggcgcagggc tacacagggc acggcattgt ggtctccatt ctggacgatg gcatcgagaa
1381 gaaccacccg gacttggcag gcaattatga tcctggggcc agttttgatg tcaatgacca
1441 ggaccctgac ccccagcctc ggtacacaca gatgaatgac aacaggcacg gcacacggtg
1501 tgcgggggaa gtggctgcgg tggccaacaa cggtgtctgt ggtgtaggtg tggcctacaa
1561 cgcccgcatt ggaggggtgc gcatgctgga tggcgaggtg acagatgcag tggaggcacg
1621 ctcgctgggc ctgaacccca accacatcca catctacagt gccagctggg gccccgagga
1681 tgacggcaag acagtggatg ggccagcccg cctcgccgag gaggccttct tccgtggggt
1741 tagccagggc cgaggggggc tgggctccat ctttgtctgg gcctcgggga acgggggccg
1801 ggaacatgac agctgcaact gcgacggcta caccaacagt atctacacgc tgtccatcag
1861 cagcgccacg cagtttggca acgtgccgtg gtacagcgag gcctgctcgt ccacactggc
1921 cacgacctac agcagtggca accagaatga gaagcagatc gtgacgactg acttgcggca
1981 gaagtgcacg gagtctcaca cgggcacctc agcctctgcc cccttagcag ccggcatcat
2041 tgctctcacc ctggaggcca ataagaacct cacatggcgg gacatgcaac acctggtggt
2101 acagacctcg aagccagccc acctcaatgc caacgactgg gccaccaatg gtgtgggccg
2161 gaaagtgagc cactcatatg gctacgggct tttggacgca ggcgccatgg tggccctggc
2221 ccagaattgg accacagtgg ccccccagcg gaagtgcatc atcgacatcc tcaccgagcc
2281 caaagacatc gggaaacggc tcgaggtgcg gaagaccgtg accgcgtgcc tgggcgagcc
2341 caaccacatc actcggctgg agcacgctca ggcgcggctc accctgtcct ataatcgccg
2401 tggcgacctg gccatccacc tggtcagccc catgggcacc cgctccaccc tgctggcagc
2461 caggccacat gactactccg cagatgggtt taatgactgg gccttcatga caactcattc
2521 ctgggatgag gatccctctg gcgagtgggt cctagagatt gaaaacacca gcgaagccaa
2581 caactatggg acgctgacca agttcaccct cgtactctat ggcaccgccc ctgaggggct
2641 gcccgtacct ccagaaagca gtggctgcaa gaccctcacg tccagtcagg cctgtgtggt
2701 gtgcgaggaa ggcttctccc tgcaccagaa gagctgtgtc cagcactgcc ctccagggtt
2761 cgccccccaa gtcctcgata cgcactatag caccgagaat gacgtggaga ccatccgggc
2821 cagcgtctgc gccccctgcc acgcctcatg tgccacatgc caggggccgg ccctgacaga
2881 ctgcctcagc tgccccagcc acgcctcctt ggaccctgtg gagcagactt gctcccggca
2941 aagccagagc agccgagagt ccccgccaca gcagcagcca cctcggctgc ccccggaggt
3001 ggaggcgggg caacggctgc gggcagggct gctgccctca cacctgcctg aggtggtggc
3061 cggcctcagc tgcgccttca tcgtgctggt cttcgtcact gtcttcctgg tcctgcagct
3121 gcgctctggc tttagttttc ggggggtgaa ggtgtacacc atggaccgtg gcctcatctc
3181 ctacaagggg ctgccccctg aagcctggca ggaggagtgc ccgtctgact cagaagagga
3241 cgagggccgg ggcgagagga ccgcctttat caaagaccag agcgccctcg gcggtggagg
3301 aagtcatcac catcaccatc actgaattct gcagatatcc agcacagtgg cggccgctcg
3361 agtctagagg gcccgtttaa acccgctgat cagcctcgac tgtgccttct agttgccagc
3421 catctgttgt ttgcccctcc cccgtgcctt ccttgaccct ggaaggtgcc actcccactg
3481 tcctttccta ataaaatgag gaaattgcat cgcattgtct gagtaggtgt cattctattc
3541 tggggggtgg ggtggggcag gacagcaagg gggaggattg ggaagacaat agcaggcatg
3601 ctggggatgc ggtgggctct atggcttctg aggcggaaag aaccagctgg ggctctaggg
3661 ggtatcccca cgcgccctgt agcggcgcat taagcgcggc gggtgtggtg gttacgcgca
3721 gcgtgaccgc tacacttgcc agcgccctag cgcccgctcc tttcgctttc ttcccttcct
3781 ttctcgccac gttcgccggc tttccccgtc aagctctaaa tcgggggctc cctttagggt
3841 tccgatttag tgctttacgg cacctcgacc ccaaaaaact tgattagggt gatggttcac
3901 gtagtgggcc atcgccctga tagacggttt ttcgcccttt gacgttggag tccacgttct
3961 ttaatagtgg actcttgttc caaactggaa caacactcaa ccctatctcg gtctattctt
4021 ttgatttata agggattttg ccgatttcgg cctattggtt aaaaaatgag ctgatttaac
4081 aaaaatttaa cgcgaattaa ttctgtggaa tgtgtgtcag ttagggtgtg gaaagtcccc
4141 aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag caaccaggtg
4201 tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc
4261 agcaaccata gtcccgcccc taactccgcc catcccgccc ctaactccgc ccagttccgc
4321 ccattctccg ccccatggct gactaatttt ttttatttat gcagaggccg aggccgcctc
4381 tgcctctgag ctattccaga agtagtgagg aggctttttt ggaggcctag gcttttgcaa
4441 aaagctcccg ggagcttgta tatccatttt cggatctgat caagagacag gatgaggatc
4501 gtttcgcatg attgaacaag atggattgca cgcaggttct ccggccgctt gggtggagag
4561 gctattcggc tatgactggg cacaacagac aatcggctgc tctgatgccg ccgtgttccg
4621 gctgtcagcg caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc gacctgtccg gtgccctgaa
4681 tgaactgcag gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc acgacgggcg ttccttgcgc
4741 agctgtgctc gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg ctgctattgg gcgaagtgcc
4801 ggggcaggat ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag aaagtatcca tcatggctga
4861 tgcaatgcgg cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc ccattcgacc accaagcgaa
4921 acatcgcatc gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt cttgtcgatc aggatgatct
4981 ggacgaagag catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc gccaggctca aggcgcgcat
5041 gcccgacggc gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc tgcttgccga atatcatggt
5101 ggaaaatggc cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg ctgggtgtgg cggaccgcta
5161 tcaggacata gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag cttggcggcg aatgggctga
5221 ccgcttcctc gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg cagcgcatcg ccttctatcg
5281 ccttcttgac gagttcttct gagcgggact ctggggttcg aaatgaccga ccaagcgacg
5341 cccaacctgc catcacgaga tttcgattcc accgccgcct tctatgaaag gttgggcttc
5401 ggaatcgttt tccgggacgc cggctggatg atcctccagc gcggggatct catgctggag
5461 ttcttcgccc accccaactt gtttattgca gcttataatg gttacaaata aagcaatagc
5521 atcacaaatt tcacaaataa agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg tttgtccaaa
5581 ctcatcaatg tatcttatca tgtctgtata ccgtcgacct ctagctagag cttggcgtaa
5641 tcatggtcat agctgtttcc tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata
5701 cgagccggaa gcataaagtg taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta actcacatta
5761 attgcgttgc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctgcattaa
5821 tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg
5881 ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag
5941 gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa
6001 ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc
6061 cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca
6121 ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg
6181 accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct
6241 catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt
6301 gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag
6361 tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc
6421 agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac
6481 actagaagaa cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga
6541 gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtttttt tgtttgcaag
6601 cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg
6661 tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa
6721 aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata
6781 tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg
6841 atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat aactacgata
6901 cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc acgctcaccg
6961 gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct
7021 gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag agtaagtagt
7081 tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgcta caggcatcgt ggtgtcacgc
7141 tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga
7201 tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt
7261 aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc tcttactgtc
7321 atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa
7381 tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa tacgggataa taccgcgcca
7441 catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca
7501 aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc caactgatct
7561 tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc
7621 gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt cctttttcaa
7681 tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt
7741 tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc acctgacgtc
7801 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggt
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1204/NGFR人源基因质粒 |
| P1212/pEF-hSEMA4C-Fc人源基因质粒 |
| P1213/pLVX-PARK7-EGFP-IRES-Puro人源基因质粒 |
| P1310/pCDNA3.1-LPAR2人源基因质粒 |
| P1224/pCDNA3.1-FLAG-LPAR2人源基因质粒 |
| P4101/pCDNA3.1-3×HA-TBK1人源基因质粒 |
| P4102/pCDNA3.1-3×HA-TRAF3人源基因质粒 |
| P4103/pCDNA3.1-3×HA-MAVS人源基因质粒 |
| P4104/pCDNA3.1-3×HA-MDA5人源基因质粒 |
| P4263/pCDNA3.1-HA-STAT1-Myc人源基因质粒 |
| P4105/pCDNA3.1-HA-STAT2-Myc人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
表达载体的构建方法及步骤 一、载体的选择及如何阅读质粒图谱 目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素： （1）复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而 真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。 （2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如 Amp+ ,Kan+ （3）多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段 （4） P/E 启动子/增强
非病毒载体介导的基因治疗有许多优点，但就目前大多数表达体系而言普遍存在外源基因表达水平低而短暂等问题为了使外源基因稳定持续表达，必须对质粒DNA 进行改造。附着体质粒载体(episomal vector)可以使外源基因以附着体形式复制，分离到子代细胞，从而使基因高效持续表达，是种新型的非病毒表达载体 。 我们构建了以EB病毒(Epstein Barr virus，EBV)复制子(EBV replicon，EBVR)为基础的附着体质粒载体，并将报告基因增强型绿色
【求助】逆转录病毒、慢病毒载体与其他真核表达载体在稳定筛选时的区别？
roy_liu823 逆转录病毒和慢病毒载体经包装后可以得到携带外源基因的病毒，将病毒感染细胞后，外源基因可以整合到细胞基因组中，经过稳定的筛选后，就可以得到稳定表达外源基因的细胞。 而一些真核表达载体如pcDNA3.1经脂质体转染进细胞后，也可以整合到细胞基因组中，并经过G418的筛选后，也可以得到稳定表达外源基因的细胞。我就很困惑：这两者有什么区别？用逆转录病毒或慢病毒载体的优势在哪？如果我想得到能稳定表达某一基因的骨髓基质干细胞，是不是用pcDNA3
pCDNA3.1-FURIN（1同义突变）人源基因质粒
￥100 - 1000
