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- 上海
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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_004963.3;DIAR6;GC-C;GUC2C;MECIL;M
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pECMV-3×FLAG-GUCY2C人源基因质粒
别称: NM_004963.3;DIAR6;GC-C;GUC2C;MECIL;M
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pECMV-3×FLAG-GUCY2C人源基因质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8674 bp ds-DNA circular SYN 05-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pECMV-3×FLAG-GUCY2C
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8674)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8674
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 235..614
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 615..818
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 863..881
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
regulatory 913..922
/regulatory_class="other"
/note="Kozak sequence"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
CDS 922..987
/codon_start=1
/product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
enterokinase cleavage site"
/note="3xFLAG"
/translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
CDS 1009..4230
/codon_start=1
/note="GUCY2C"
/translation="MKTLLLDLALWSLLFQPGWLSFSSQVSQNCHNGSYEISVLMMGNS
AFAEPLKNLEDAVNEGLEIVRGRLQNAGLNVTVNATFMYSDGLIHNSGDCRSSTCEGLD
LLRKISNAQRMGCVLIGPSCTYSTFQMYLDTELSYPMISAGSFGLSCDYKETLTRLMSP
ARKLMYFLVNFWKTNDLPFKTYSWSTSYVYKNGTETEDCFWYLNALEASVSYFSHELGF
KVVLRQDKEFQDILMDHNRKSNVIIMCGGPEFLYKLKGDRAVAEDIVIILVDLFNDQYF
EDNVTAPDYMKNVLVLTLSPGNSLLNSSFSRNLSPTKRDFALAYLNGILLFGHMLKIFL
ENGENITTPKFAHAFRNLTFEGYDGPVTLDDWGDVDSTMVLLYTSVDTKKYKVLLTYDT
HVNKTYPVDMSPTFTWKNSKLPNDITGRGPQILMIAVFTLTGAVVLLLLVALLMLRKYR
KDYELRQKKWSHIPPENIFPLETNETNHVSLKIDDDKRRDTIQRLRQCKYDKKRVILKD
LKHNDGNFTEKQKIELNKLLQIDYYNLTKFYGTVKLDTMIFGVIEYCERGSLREVLNDT
ISYPDGTFMDWEFKISVLYDIAKGMSYLHSSKTEVHGRLKSTNCVVDSRMVVKITDFGC
NSILPPKKDLWTAPEHLRQANISQKGDVYSYGIIAQEIILRKETFYTLSCRDRNEKIFR
VENSNGMKPFRPDLFLETAEEKELEVYLLVKNCWEEDPEKRPDFKKIETTLAKIFGLFH
DQKNESYMDTLIRRLQLYSRNLEHLVEERTQLYKAERDRADRLNFMLLPRLVVKSLKEK
GFVEPELYEEVTIYFSDIVGFTTICKYS-TPMEVVDMLNDIYKSFDHIVDHHDVYKVETI
GDAYMVASGLPKRNGNRHAIDIAKMALEILSFMGTFELEHLPGLPIWIRIGVHSGPCAA
GVVGIKMPRYCLFGDTVNTASRMESTGLPLRIHVSGSTIAILKRTECQFLYEVRGETYL
KGRGNETTYWLTGMKDQKFNLPTPPTVENQQRLQAEFSDMIANSLQKRQAAGIRSQKPR
RVASYKKGTLEYLQLNTTDKESTYF"
polyA_signal 4274..4498
/note="bGH poly(A) signal"
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 4544..4972
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 4986..5315
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 5166..5301
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 5382..6176
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="Neo"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 6350..6471
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(6922..7507)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(7678..8538)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(8539..8643)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
901 gtttaaactt aagccaccat ggactacaaa gaccatgacg gtgattataa agatcatgac
961 atcgactaca aggatgacga tgacaagctt ggtaccgagc tcggatccat gaagacgttg
1021 ctgttggact tggctttgtg gtcactgctc ttccagcccg ggtggctgtc ctttagttcc
1081 caggtgagtc agaactgcca caatggcagc tatgaaatca gcgtcctgat gatgggcaac
1141 tcagcctttg cagagcccct gaaaaacttg gaagatgcgg tgaatgaggg gctggaaata
1201 gtgagaggac gtctgcaaaa tgctggccta aatgtgactg tgaacgctac tttcatgtat
1261 tcggatggtc tgattcataa ctcaggcgac tgccggagta gcacctgtga aggcctcgac
1321 ctactcagga aaatttcaaa tgcacaacgg atgggctgtg tcctcatagg gccctcatgt
1381 acatactcca ccttccagat gtaccttgac acagaattga gctaccccat gatctcagct
1441 ggaagttttg gattgtcatg tgactataaa gaaaccttaa ccaggctgat gtctccagct
1501 agaaagttga tgtacttctt ggttaacttt tggaaaacca acgatctgcc cttcaaaact
1561 tattcctgga gcacttcgta tgtttacaag aatggtacag aaactgagga ctgtttctgg
1621 taccttaatg ctctggaggc tagcgtttcc tatttctccc acgaactcgg ctttaaggtg
1681 gtgttaagac aagataagga gtttcaggat atcttaatgg accacaacag gaaaagcaat
1741 gtgattatta tgtgtggtgg tccagagttc ctctacaagc tgaagggtga ccgagcagtg
1801 gctgaagaca ttgtcattat tctagtggat cttttcaatg accagtactt tgaggacaat
1861 gtcacagccc ctgactatat gaaaaatgtc cttgttctga cgctgtctcc tgggaattcc
1921 cttctaaata gctctttctc caggaatcta tcaccaacaa aacgagactt tgctcttgcc
1981 tatttgaatg gaatcctgct ctttggacat atgctgaaga tatttcttga aaatggagaa
2041 aatattacca cccccaaatt tgctcatgct ttcaggaatc tcacttttga agggtatgac
2101 ggtccagtga ccttggatga ctggggggat gttgacagta ccatggtgct tctgtatacc
2161 tctgtggaca ccaagaaata caaggttctt ttgacctatg atacccacgt aaataagacc
2221 tatcctgtgg atatgagccc cacattcact tggaagaact ctaaacttcc taatgatatt
2281 acaggccggg gccctcagat cctgatgatt gcagtcttca ccctcactgg agctgtggtg
2341 ctgctcctgc tcgtcgctct cctgatgctc agaaaatata gaaaagatta tgaacttcgt
2401 cagaaaaaat ggtcccacat tcctcctgaa aatatctttc ctctggagac caatgagacc
2461 aatcatgtta gcctcaagat cgatgatgac aaaagacgag atacaatcca gagactacga
2521 cagtgcaaat acgacaaaaa gcgagtgatt ctcaaagatc tcaagcacaa tgatggtaat
2581 ttcactgaaa aacagaagat agaattgaac aagttgcttc agattgacta ttacaacctg
2641 accaagttct acggcacagt gaaacttgat accatgatct tcggggtgat agaatactgt
2701 gagagaggat ccctccggga agttttaaat gacacaattt cctaccctga tggcacattc
2761 atggattggg agtttaagat ctctgtcttg tatgacattg ctaagggaat gtcatatctg
2821 cactccagta agacagaagt ccatggtcgt ctgaaatcta ccaactgcgt agtggacagt
2881 agaatggtgg tgaagatcac tgattttggc tgcaattcca ttttacctcc aaaaaaggac
2941 ctgtggacag ctccagagca cctccgccaa gccaacatct ctcagaaagg agatgtgtac
3001 agctatggga tcatcgcaca ggagatcatc ctgcggaaag aaaccttcta cactttgagc
3061 tgtcgggacc ggaatgagaa gattttcaga gtggaaaatt ccaatggaat gaaacccttc
3121 cgcccagatt tattcttgga aacagcagag gaaaaagagc tagaagtgta cctacttgta
3181 aaaaactgtt gggaggaaga tccagaaaag agaccagatt tcaaaaaaat tgagactaca
3241 cttgccaaga tatttggact ttttcatgac caaaaaaatg aaagctatat ggataccttg
3301 atccgacgtc tacagctata ttctcgaaac ctggaacatc tggtagagga aaggacacag
3361 ctgtacaagg cagagaggga cagggctgac agacttaact ttatgttgct tccaaggcta
3421 gtggtaaagt ctctgaagga gaaaggcttt gtggagccgg aactatatga ggaagttaca
3481 atctacttca gtgacattgt aggtttcact actatctgca aatacagcac ccccatggaa
3541 gtggtggaca tgcttaatga catctataag agttttgacc acattgttga tcatcatgat
3601 gtctacaagg tggaaaccat cggtgatgcg tacatggtgg ctagtggttt gcctaagaga
3661 aatggcaatc ggcatgcaat agacattgcc aagatggcct tggaaatcct cagcttcatg
3721 gggacctttg agctggagca tcttcctggc ctcccaatat ggattcgcat tggagttcac
3781 tctggtccct gtgctgctgg agttgtggga atcaagatgc ctcgttattg tctatttgga
3841 gatacggtca acacagcctc taggatggaa tccactggcc tccctttgag aattcacgtg
3901 agtggctcca ccatagccat cctgaagaga actgagtgcc agttccttta tgaagtgaga
3961 ggagaaacat acttaaaggg aagaggaaat gagactacct actggctgac tgggatgaag
4021 gaccagaaat tcaacctgcc aacccctcct actgtggaga atcaacagcg tttgcaagca
4081 gaattttcag acatgattgc caactcttta cagaaaagac aggcagcagg gataagaagc
4141 caaaaaccca gacgggtagc cagctataaa aaaggcactc tggaatactt gcagctgaat
4201 accacagaca aggagagcac ctatttttaa ctcgagtcta gagggcccgt ttaaacccgc
4261 tgatcagcct cgactgtgcc ttctagttgc cagccatctg ttgtttgccc ctcccccgtg
4321 ccttccttga ccctggaagg tgccactccc actgtccttt cctaataaaa tgaggaaatt
4381 gcatcgcatt gtctgagtag gtgtcattct attctggggg gtggggtggg gcaggacagc
4441 aagggggagg attgggaaga caatagcagg catgctgggg atgcggtggg ctctatggct
4501 tctgaggcgg aaagaaccag ctggggctct agggggtatc cccacgcgcc ctgtagcggc
4561 gcattaagcg cggcgggtgt ggtggttacg cgcagcgtga ccgctacact tgccagcgcc
4621 ctagcgcccg ctcctttcgc tttcttccct tcctttctcg ccacgttcgc cggctttccc
4681 cgtcaagctc taaatcgggg gctcccttta gggttccgat ttagtgcttt acggcacctc
4741 gaccccaaaa aacttgatta gggtgatggt tcacgtagtg ggccatcgcc ctgatagacg
4801 gtttttcgcc ctttgacgtt ggagtccacg ttctttaata gtggactctt gttccaaact
4861 ggaacaacac tcaaccctat ctcggtctat tcttttgatt tataagggat tttgccgatt
4921 tcggcctatt ggttaaaaaa tgagctgatt taacaaaaat ttaacgcgaa ttaattctgt
4981 ggaatgtgtg tcagttaggg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc
5041 aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag
5101 gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac catagtcccg cccctaactc
5161 cgcccatccc gcccctaact ccgcccagtt ccgcccattc tccgccccat ggctgactaa
5221 ttttttttat ttatgcagag gccgaggccg cctctgcctc tgagctattc cagaagtagt
5281 gaggaggctt ttttggaggc ctaggctttt gcaaaaagct cccgggagct tgtatatcca
5341 ttttcggatc tgatcaagag acaggatgag gatcgtttcg catgattgaa caagatggat
5401 tgcacgcagg ttctccggcc gcttgggtgg agaggctatt cggctatgac tgggcacaac
5461 agacaatcgg ctgctctgat gccgccgtgt tccggctgtc agcgcagggg cgcccggttc
5521 tttttgtcaa gaccgacctg tccggtgccc tgaatgaact gcaggacgag gcagcgcggc
5581 tatcgtggct ggccacgacg ggcgttcctt gcgcagctgt gctcgacgtt gtcactgaag
5641 cgggaaggga ctggctgcta ttgggcgaag tgccggggca ggatctcctg tcatctcacc
5701 ttgctcctgc cgagaaagta tccatcatgg ctgatgcaat gcggcggctg catacgcttg
5761 atccggctac ctgcccattc gaccaccaag cgaaacatcg catcgagcga gcacgtactc
5821 ggatggaagc cggtcttgtc gatcaggatg atctggacga agagcatcag gggctcgcgc
5881 cagccgaact gttcgccagg ctcaaggcgc gcatgcccga cggcgaggat ctcgtcgtga
5941 cccatggcga tgcctgcttg ccgaatatca tggtggaaaa tggccgcttt tctggattca
6001 tcgactgtgg ccggctgggt gtggcggacc gctatcagga catagcgttg gctacccgtg
6061 atattgctga agagcttggc ggcgaatggg ctgaccgctt cctcgtgctt tacggtatcg
6121 ccgctcccga ttcgcagcgc atcgccttct atcgccttct tgacgagttc ttctgagcgg
6181 gactctgggg ttcgaaatga ccgaccaagc gacgcccaac ctgccatcac gagatttcga
6241 ttccaccgcc gccttctatg aaaggttggg cttcggaatc gttttccggg acgccggctg
6301 gatgatcctc cagcgcgggg atctcatgct ggagttcttc gcccacccca acttgtttat
6361 tgcagcttat aatggttaca aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa ataaagcatt
6421 tttttcactg cattctagtt gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt atcatgtctg
6481 tataccgtcg acctctagct agagcttggc gtaatcatgg tcatagctgt ttcctgtgtg
6541 aaattgttat ccgctcacaa ttccacacaa catacgagcc ggaagcataa agtgtaaagc
6601 ctggggtgcc taatgagtga gctaactcac attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt
6661 ccagtcggga aacctgtcgt gccagctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg
6721 cggtttgcgt attgggcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt
6781 tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc
6841 aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa
6901 aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa
6961 tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc
7021 ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc
7081 cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag
7141 ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga
7201 ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc
7261 gccactggca gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac
7321 agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga agaacagtat ttggtatctg
7381 cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca
7441 aaccaccgct ggtagcggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg
7501 atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc
7561 acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa
7621 ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta
7681 ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt
7741 tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag
7801 tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca
7861 gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc
7921 tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt
7981 tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag
8041 ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt
8101 tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat
8161 ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt
8221 gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc
8281 ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat
8341 cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag
8401 ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt
8461 ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg
8521 gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta
8581 ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc
8641 gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga cgtc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pECMV-3×FLAG-GUCY2C人源基因质粒
别称: NM_004963.3;DIAR6;GC-C;GUC2C;MECIL;M
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pECMV-3×FLAG-GUCY2C人源基因质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8674 bp ds-DNA circular SYN 05-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pECMV-3×FLAG-GUCY2C
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8674)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8674
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 235..614
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 615..818
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 863..881
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
regulatory 913..922
/regulatory_class="other"
/note="Kozak sequence"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
CDS 922..987
/codon_start=1
/product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
enterokinase cleavage site"
/note="3xFLAG"
/translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
CDS 1009..4230
/codon_start=1
/note="GUCY2C"
/translation="MKTLLLDLALWSLLFQPGWLSFSSQVSQNCHNGSYEISVLMMGNS
AFAEPLKNLEDAVNEGLEIVRGRLQNAGLNVTVNATFMYSDGLIHNSGDCRSSTCEGLD
LLRKISNAQRMGCVLIGPSCTYSTFQMYLDTELSYPMISAGSFGLSCDYKETLTRLMSP
ARKLMYFLVNFWKTNDLPFKTYSWSTSYVYKNGTETEDCFWYLNALEASVSYFSHELGF
KVVLRQDKEFQDILMDHNRKSNVIIMCGGPEFLYKLKGDRAVAEDIVIILVDLFNDQYF
EDNVTAPDYMKNVLVLTLSPGNSLLNSSFSRNLSPTKRDFALAYLNGILLFGHMLKIFL
ENGENITTPKFAHAFRNLTFEGYDGPVTLDDWGDVDSTMVLLYTSVDTKKYKVLLTYDT
HVNKTYPVDMSPTFTWKNSKLPNDITGRGPQILMIAVFTLTGAVVLLLLVALLMLRKYR
KDYELRQKKWSHIPPENIFPLETNETNHVSLKIDDDKRRDTIQRLRQCKYDKKRVILKD
LKHNDGNFTEKQKIELNKLLQIDYYNLTKFYGTVKLDTMIFGVIEYCERGSLREVLNDT
ISYPDGTFMDWEFKISVLYDIAKGMSYLHSSKTEVHGRLKSTNCVVDSRMVVKITDFGC
NSILPPKKDLWTAPEHLRQANISQKGDVYSYGIIAQEIILRKETFYTLSCRDRNEKIFR
VENSNGMKPFRPDLFLETAEEKELEVYLLVKNCWEEDPEKRPDFKKIETTLAKIFGLFH
DQKNESYMDTLIRRLQLYSRNLEHLVEERTQLYKAERDRADRLNFMLLPRLVVKSLKEK
GFVEPELYEEVTIYFSDIVGFTTICKYS-TPMEVVDMLNDIYKSFDHIVDHHDVYKVETI
GDAYMVASGLPKRNGNRHAIDIAKMALEILSFMGTFELEHLPGLPIWIRIGVHSGPCAA
GVVGIKMPRYCLFGDTVNTASRMESTGLPLRIHVSGSTIAILKRTECQFLYEVRGETYL
KGRGNETTYWLTGMKDQKFNLPTPPTVENQQRLQAEFSDMIANSLQKRQAAGIRSQKPR
RVASYKKGTLEYLQLNTTDKESTYF"
polyA_signal 4274..4498
/note="bGH poly(A) signal"
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 4544..4972
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 4986..5315
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 5166..5301
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 5382..6176
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="Neo"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 6350..6471
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(6922..7507)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(7678..8538)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(8539..8643)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
901 gtttaaactt aagccaccat ggactacaaa gaccatgacg gtgattataa agatcatgac
961 atcgactaca aggatgacga tgacaagctt ggtaccgagc tcggatccat gaagacgttg
1021 ctgttggact tggctttgtg gtcactgctc ttccagcccg ggtggctgtc ctttagttcc
1081 caggtgagtc agaactgcca caatggcagc tatgaaatca gcgtcctgat gatgggcaac
1141 tcagcctttg cagagcccct gaaaaacttg gaagatgcgg tgaatgaggg gctggaaata
1201 gtgagaggac gtctgcaaaa tgctggccta aatgtgactg tgaacgctac tttcatgtat
1261 tcggatggtc tgattcataa ctcaggcgac tgccggagta gcacctgtga aggcctcgac
1321 ctactcagga aaatttcaaa tgcacaacgg atgggctgtg tcctcatagg gccctcatgt
1381 acatactcca ccttccagat gtaccttgac acagaattga gctaccccat gatctcagct
1441 ggaagttttg gattgtcatg tgactataaa gaaaccttaa ccaggctgat gtctccagct
1501 agaaagttga tgtacttctt ggttaacttt tggaaaacca acgatctgcc cttcaaaact
1561 tattcctgga gcacttcgta tgtttacaag aatggtacag aaactgagga ctgtttctgg
1621 taccttaatg ctctggaggc tagcgtttcc tatttctccc acgaactcgg ctttaaggtg
1681 gtgttaagac aagataagga gtttcaggat atcttaatgg accacaacag gaaaagcaat
1741 gtgattatta tgtgtggtgg tccagagttc ctctacaagc tgaagggtga ccgagcagtg
1801 gctgaagaca ttgtcattat tctagtggat cttttcaatg accagtactt tgaggacaat
1861 gtcacagccc ctgactatat gaaaaatgtc cttgttctga cgctgtctcc tgggaattcc
1921 cttctaaata gctctttctc caggaatcta tcaccaacaa aacgagactt tgctcttgcc
1981 tatttgaatg gaatcctgct ctttggacat atgctgaaga tatttcttga aaatggagaa
2041 aatattacca cccccaaatt tgctcatgct ttcaggaatc tcacttttga agggtatgac
2101 ggtccagtga ccttggatga ctggggggat gttgacagta ccatggtgct tctgtatacc
2161 tctgtggaca ccaagaaata caaggttctt ttgacctatg atacccacgt aaataagacc
2221 tatcctgtgg atatgagccc cacattcact tggaagaact ctaaacttcc taatgatatt
2281 acaggccggg gccctcagat cctgatgatt gcagtcttca ccctcactgg agctgtggtg
2341 ctgctcctgc tcgtcgctct cctgatgctc agaaaatata gaaaagatta tgaacttcgt
2401 cagaaaaaat ggtcccacat tcctcctgaa aatatctttc ctctggagac caatgagacc
2461 aatcatgtta gcctcaagat cgatgatgac aaaagacgag atacaatcca gagactacga
2521 cagtgcaaat acgacaaaaa gcgagtgatt ctcaaagatc tcaagcacaa tgatggtaat
2581 ttcactgaaa aacagaagat agaattgaac aagttgcttc agattgacta ttacaacctg
2641 accaagttct acggcacagt gaaacttgat accatgatct tcggggtgat agaatactgt
2701 gagagaggat ccctccggga agttttaaat gacacaattt cctaccctga tggcacattc
2761 atggattggg agtttaagat ctctgtcttg tatgacattg ctaagggaat gtcatatctg
2821 cactccagta agacagaagt ccatggtcgt ctgaaatcta ccaactgcgt agtggacagt
2881 agaatggtgg tgaagatcac tgattttggc tgcaattcca ttttacctcc aaaaaaggac
2941 ctgtggacag ctccagagca cctccgccaa gccaacatct ctcagaaagg agatgtgtac
3001 agctatggga tcatcgcaca ggagatcatc ctgcggaaag aaaccttcta cactttgagc
3061 tgtcgggacc ggaatgagaa gattttcaga gtggaaaatt ccaatggaat gaaacccttc
3121 cgcccagatt tattcttgga aacagcagag gaaaaagagc tagaagtgta cctacttgta
3181 aaaaactgtt gggaggaaga tccagaaaag agaccagatt tcaaaaaaat tgagactaca
3241 cttgccaaga tatttggact ttttcatgac caaaaaaatg aaagctatat ggataccttg
3301 atccgacgtc tacagctata ttctcgaaac ctggaacatc tggtagagga aaggacacag
3361 ctgtacaagg cagagaggga cagggctgac agacttaact ttatgttgct tccaaggcta
3421 gtggtaaagt ctctgaagga gaaaggcttt gtggagccgg aactatatga ggaagttaca
3481 atctacttca gtgacattgt aggtttcact actatctgca aatacagcac ccccatggaa
3541 gtggtggaca tgcttaatga catctataag agttttgacc acattgttga tcatcatgat
3601 gtctacaagg tggaaaccat cggtgatgcg tacatggtgg ctagtggttt gcctaagaga
3661 aatggcaatc ggcatgcaat agacattgcc aagatggcct tggaaatcct cagcttcatg
3721 gggacctttg agctggagca tcttcctggc ctcccaatat ggattcgcat tggagttcac
3781 tctggtccct gtgctgctgg agttgtggga atcaagatgc ctcgttattg tctatttgga
3841 gatacggtca acacagcctc taggatggaa tccactggcc tccctttgag aattcacgtg
3901 agtggctcca ccatagccat cctgaagaga actgagtgcc agttccttta tgaagtgaga
3961 ggagaaacat acttaaaggg aagaggaaat gagactacct actggctgac tgggatgaag
4021 gaccagaaat tcaacctgcc aacccctcct actgtggaga atcaacagcg tttgcaagca
4081 gaattttcag acatgattgc caactcttta cagaaaagac aggcagcagg gataagaagc
4141 caaaaaccca gacgggtagc cagctataaa aaaggcactc tggaatactt gcagctgaat
4201 accacagaca aggagagcac ctatttttaa ctcgagtcta gagggcccgt ttaaacccgc
4261 tgatcagcct cgactgtgcc ttctagttgc cagccatctg ttgtttgccc ctcccccgtg
4321 ccttccttga ccctggaagg tgccactccc actgtccttt cctaataaaa tgaggaaatt
4381 gcatcgcatt gtctgagtag gtgtcattct attctggggg gtggggtggg gcaggacagc
4441 aagggggagg attgggaaga caatagcagg catgctgggg atgcggtggg ctctatggct
4501 tctgaggcgg aaagaaccag ctggggctct agggggtatc cccacgcgcc ctgtagcggc
4561 gcattaagcg cggcgggtgt ggtggttacg cgcagcgtga ccgctacact tgccagcgcc
4621 ctagcgcccg ctcctttcgc tttcttccct tcctttctcg ccacgttcgc cggctttccc
4681 cgtcaagctc taaatcgggg gctcccttta gggttccgat ttagtgcttt acggcacctc
4741 gaccccaaaa aacttgatta gggtgatggt tcacgtagtg ggccatcgcc ctgatagacg
4801 gtttttcgcc ctttgacgtt ggagtccacg ttctttaata gtggactctt gttccaaact
4861 ggaacaacac tcaaccctat ctcggtctat tcttttgatt tataagggat tttgccgatt
4921 tcggcctatt ggttaaaaaa tgagctgatt taacaaaaat ttaacgcgaa ttaattctgt
4981 ggaatgtgtg tcagttaggg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc
5041 aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag
5101 gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac catagtcccg cccctaactc
5161 cgcccatccc gcccctaact ccgcccagtt ccgcccattc tccgccccat ggctgactaa
5221 ttttttttat ttatgcagag gccgaggccg cctctgcctc tgagctattc cagaagtagt
5281 gaggaggctt ttttggaggc ctaggctttt gcaaaaagct cccgggagct tgtatatcca
5341 ttttcggatc tgatcaagag acaggatgag gatcgtttcg catgattgaa caagatggat
5401 tgcacgcagg ttctccggcc gcttgggtgg agaggctatt cggctatgac tgggcacaac
5461 agacaatcgg ctgctctgat gccgccgtgt tccggctgtc agcgcagggg cgcccggttc
5521 tttttgtcaa gaccgacctg tccggtgccc tgaatgaact gcaggacgag gcagcgcggc
5581 tatcgtggct ggccacgacg ggcgttcctt gcgcagctgt gctcgacgtt gtcactgaag
5641 cgggaaggga ctggctgcta ttgggcgaag tgccggggca ggatctcctg tcatctcacc
5701 ttgctcctgc cgagaaagta tccatcatgg ctgatgcaat gcggcggctg catacgcttg
5761 atccggctac ctgcccattc gaccaccaag cgaaacatcg catcgagcga gcacgtactc
5821 ggatggaagc cggtcttgtc gatcaggatg atctggacga agagcatcag gggctcgcgc
5881 cagccgaact gttcgccagg ctcaaggcgc gcatgcccga cggcgaggat ctcgtcgtga
5941 cccatggcga tgcctgcttg ccgaatatca tggtggaaaa tggccgcttt tctggattca
6001 tcgactgtgg ccggctgggt gtggcggacc gctatcagga catagcgttg gctacccgtg
6061 atattgctga agagcttggc ggcgaatggg ctgaccgctt cctcgtgctt tacggtatcg
6121 ccgctcccga ttcgcagcgc atcgccttct atcgccttct tgacgagttc ttctgagcgg
6181 gactctgggg ttcgaaatga ccgaccaagc gacgcccaac ctgccatcac gagatttcga
6241 ttccaccgcc gccttctatg aaaggttggg cttcggaatc gttttccggg acgccggctg
6301 gatgatcctc cagcgcgggg atctcatgct ggagttcttc gcccacccca acttgtttat
6361 tgcagcttat aatggttaca aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa ataaagcatt
6421 tttttcactg cattctagtt gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt atcatgtctg
6481 tataccgtcg acctctagct agagcttggc gtaatcatgg tcatagctgt ttcctgtgtg
6541 aaattgttat ccgctcacaa ttccacacaa catacgagcc ggaagcataa agtgtaaagc
6601 ctggggtgcc taatgagtga gctaactcac attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt
6661 ccagtcggga aacctgtcgt gccagctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg
6721 cggtttgcgt attgggcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt
6781 tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc
6841 aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa
6901 aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa
6961 tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc
7021 ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc
7081 cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag
7141 ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga
7201 ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc
7261 gccactggca gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac
7321 agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga agaacagtat ttggtatctg
7381 cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca
7441 aaccaccgct ggtagcggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg
7501 atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc
7561 acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa
7621 ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta
7681 ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt
7741 tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag
7801 tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca
7861 gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc
7921 tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt
7981 tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag
8041 ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt
8101 tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat
8161 ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt
8221 gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc
8281 ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat
8341 cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag
8401 ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt
8461 ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg
8521 gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta
8581 ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc
8641 gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga cgtc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3710/pCMV-SPORT6-PCID2人源基因质粒 |
| P3711/pCMV-SPORT6-LRRC14（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3712/pCMV-SPORT6-GBA2人源基因质粒 |
| P3713/pCMV-SPORT6-RGR（3同义突变）人源基因质粒 |
| P3714/pCMV-SPORT6-VIPR2人源基因质粒 |
| P3715/pCMV-SPORT6-AMOTL2（730-2340）人源基因质粒 |
| P3716/pCMV-SPORT6-AGT人源基因质粒 |
| P3717/pCMV-SPORT6-C11orf54人源基因质粒 |
| P3718/pCMV-SPORT6-C14orf104人源基因质粒 |
| P3719/pCMV-SPORT6-TIMD4-T719C人源基因质粒 |
| P4952/pCMV-SPORT6-EIF1AX人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
入 DMSO 或 2-巯基乙醇，混合后加入 L 连接反应液 (含重组质粒)，温和混匀，置冰上 30 min；2. 42 ℃ 水浴 45 秒，然后迅速放回冰中 1～2 min；3. 加入 2 mL LB 培养液，37 ℃ 轻摇荡培养 1 h；4. 4,000×g 离心 10 秒钟，弃上清，用 LB 培养液重悬菌体；5. 将菌液铺于含有适当抗生素的 LB 琼脂培养板上，涂匀，室温放置 20～30 min，倒置于 37 ℃ 孵箱中培养 12～16 h。（三）转化细胞的筛选【实验原理】1、 蓝白筛选:以 TA
毒载体。 2.慢病毒包装与纯化 慢病毒包装采用三质粒或四质粒系统进行包装，收集细胞培养上清，通过超速离心浓缩纯化和收集病毒。 3.慢病毒滴度检测 检测方法：定量PCR检测干扰后细胞基因组中外源DNA拷贝数 实验原理：慢病毒介导外源基因以逆转录方式整合进目的细胞基因组 4.慢病毒载体优势 ① 表达时间长：慢病毒可将外源基因整合到宿主细胞基因组上，实现基因长时间稳定的表达，不随细胞分裂传代而丢失，是细胞实验的首选，常用于构建稳转株 ② 安全性高：未发现致病性，慢病毒载体改造T细胞用于CAR-T
良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。 慢病毒转染优点：1.外源基因表达水平较高、表达稳定；2.转染效率高，可感染分裂和不分裂的细胞，几乎可以感染所有类型的细胞，特别适合质粒载体转染效率低的细胞；3.慢病毒基因容易操作，易于制备大量病毒且滴度高；4.病毒基因组可整合到细胞基因组，易于构建稳定细胞株。 慢病毒包装技术：慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。将外源基因克隆进入表达载体，同时与包装质粒（表达病毒包装所需辅助蛋白）一起转染
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