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- 上海
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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
AF118141.1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCMV-BKCA-FLAG人源基因质粒
别称: AF118141.1
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pCDNA3.0-HA-p53质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7098 bp ds-DNA circular SYN 21-JAN-2018
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7098
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 27..330
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 331..534
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
intron 672..768
/label=SV40 intron
/note="modified SV40 intron with splice donor and acceptor
sites"
regulatory 845..854
/regulatory_class="other"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
misc_feature 851..4189
/label=BKCA
CDS 4199..4222
/codon_start=1
/product="FLAG(R) epitope tag, followed by an enterokinase
cleavage site"
/label=FLAG
/translation="DYKDDDDK"
polyA_signal 4237..4371
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(4884..5472)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(5643..6503)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(6504..6608)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gagttcgagc ttgcatgcct gcaggtcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc
61 tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg
121 ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac tgcccacttg
181 gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa
241 tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac
301 atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta catcaatggg
361 cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga cgtcaatggg
421 agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa ctccgcccca
481 ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag agctcgttta
541 gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca tagaagacac
601 cgggaccgat ccagcctccg gactctagag gatccggtac tagaggaact gaaaaaccag
661 aaagttaact ggtaagttta gtctttttgt cttttatttc aggtcccgga tccggtggtg
721 gtgcaaatca aagaactgct cctcagtgga tgttgccttt acttctaggc ctgtacggaa
781 gtgttacttc tgctctaaaa gctgcggaat tgtacccgcg ggcccaggcc cgaattcggt
841 cgacgccacc atggatgcgc tcatcatccc ggtgaccatg gaggtgccgt gcgacagccg
901 gggccaacgc atgtggtggg ctttcctggc ctcctccatg gtgactttct tcgggggcct
961 cttcatcatc ttgctctggc ggacgctcaa gtacctgtgg accgtgtgct gccactgcgg
1021 gggcaagacg aaggaggccc agaagattaa caatggctca agccaggcgg atggcactct
1081 caaaccagtg gatgaaaaag aggaggcagt ggccgccgag gtcggctgga tgacctccgt
1141 gaaggactgg gcgggggtga tgatatccgc ccagacactg actggcagag tcctggttgt
1201 cttagtcttt gctctcagca tcggtgcact tgtaatatac ttcatagatt catcaaaccc
1261 aatagaatcc tgccagaatt tctacaaaga tttcacatta cagatcgaca tggctttcaa
1321 cgtgttcttc cttctctact ttggcttgcg gtttattgca gccaacgata aattgtggtt
1381 ctggctggaa gtgaactctg tagtggattt cttcacggtg ccccccgtgt ttgtgtctgt
1441 gtacttaaac agaagttggc ttggtttgag atttttaaga gctctgagac tgatacagtt
1501 ttcagaaatt ttgcagtttc tgaatattct taaaacaagt aattccatca agctggtgaa
1561 tctgctctcc atatttatca gcacgtggct gactgcagcc gggttcatcc atttggtgga
1621 gaattcaggg gacccatggg aaaatttcca aaacaaccag gctctcacct actgggaatg
1681 tgtctattta ctcatggtca caatgtccac cgttggttat ggggatgttt atgcaaaaac
1741 cacacttggg cgcctcttca tggtcttctt catcctcggg ggactggcca tgtttgccag
1801 ctacgtccct gaaatcatag agttaatagg aaaccgcaag aaatacgggg gctcctatag
1861 tgcggttagt ggaagaaagc acattgtggt ctgcggacac atcactctgg agagtgtttc
1921 caacttcctg aaggactttc tgcacaagga ccgggatgac gtcaatgtgg agatcgtttt
1981 tcttcacaac atctcccccg acctggagct tgaagctctg ttcaaacgac attttactca
2041 ggtggaattt tatcagggtt ccgtcctcaa tccacatgat cttgcaagag tcaagataga
2101 gtcagcagat gcatgcctga tccttgccaa caagtactgc gctgacccgg atgcggagga
2161 tgcctcgaat atcatgagag taatctccat aaagaactac catccgaaga taagaatcat
2221 cactcaaatg ctgcagtatc acaacaaggc ccatctgcta aacatcccga gctggaattg
2281 gaaagaaggt gatgacgcaa tctgcctcgc agagttgaag ttgggcttca tagcccagag
2341 ctgcctggct caaggcctct ccaccatgct tgccaacctc ttctccatga ggtcattcat
2401 aaagattgag gaagacacat ggcagaaata ctacttggaa ggagtctcaa atgaaatgta
2461 cacagaatat ctctccagtg ccttcgtggg tctgtccttc cctactgttt gtgagctgtg
2521 ttttgtgaag ctcaagctcc taatgatagc cattgagtac aagtctgcca accgagagag
2581 ccgtatatta attaatcctg gaaaccatct taagatccaa gaaggtactt taggattttt
2641 catcgcaagt gatgccaaag aagttaaaag ggcatttttt tactgcaagg cctgtcatga
2701 tgacatcaca gatcccaaaa gaataaaaaa atgtggctgc aaacggcttg aagatgagca
2761 gccgtcaaca ctatcaccaa aaaaaaagca acggaatgga ggcatgcgga actcacccaa
2821 cacctcgcct aagctgatga ggcatgaccc cttgttaatt cctggcaatg atcagattga
2881 caacatggac tccaatgtga agaagtacga ctctactggg atgtttcact ggtgtgcacc
2941 caaggagata gagaaagtca tcctgactcg aagtgaagct gccatgaccg tcctgagtgg
3001 ccatgtcgtg gtctgcatct ttggcgacgt cagctcagcc ctgatcggcc tccggaacct
3061 ggtgatgccg ctccgtgcca gcaactttca ttaccatgag ctcaagcaca ttgtgtttgt
3121 gggctctatt gagtacctca agcgggaatg ggagacgctt cataacttcc ccaaagtgtc
3181 catattgcct ggtacgccat taagtcgggc tgatttaagg gctgtcaaca tcaacctctg
3241 tgacatgtgc gttatcctgt cagccaatca gaataatatt gatgatactt cgctgcagga
3301 caaggaatgc atcttggcgt cactcaacat caaatctatg cagtttgatg acagcatcgg
3361 agtcttgcag gctaattccc aagggttcac acctccagga atggatagat cctctccaga
3421 taacagccca gtgcacggga tgttacgtca accatccatc acaactgggg tcaacatccc
3481 catcatcact gaactagtga acgatactaa tgttcagttt ttggaccaag acgatgatga
3541 tgaccctgat acagaactgt acctcacgca gccctttgcc tgtgggacag catttgccgt
3601 cagtgtcctg gactcactca tgagcgcgac gtacttcaat gacaatatcc tcaccctgat
3661 acggaccctg gtgaccggag gagccacgcc ggagctggag gctctgattg ctgaggaaaa
3721 cgcccttaga ggtggctaca gcaccccgca gacactggcc aatagggacc gctgccgcgt
3781 ggcccagtta gctctgctcg atgggccatt tgcggactta ggggatggtg gttgttatgg
3841 tgatctgttc tgcaaagctc tgaaaacata taatatgctt tgttttggaa tttaccggct
3901 gagagatgct cacctcagca cccccagtca gtgcgcaaag aggtatgtca tcaccaaccc
3961 gccctatgag tttgagctcg tgccgacgga cctgatcttc tgcttaatgc agtttgacca
4021 caatgccggc cagtcccggg ccagcctgtc ccattcctcc cactcgtcgc agtcctccag
4081 caagaagagc tcctctgttc actccatccc atccacagca aaccgacaga accggcccaa
4141 gtccagggag tcccgggaca aacagaagta cgtgcaggaa gagcggcttg gtaccggcga
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4261 gatgagtttg gacaaaccac aactagaatg cagtgaaaaa aatgctttat ttgtgaaatt
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4681 ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc
4741 gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa
4801 tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt
4861 aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa
4921 aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt
4981 ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg
5041 tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc
5101 agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc
5161 gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta
5221 tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct
5281 acagagttct tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaaggacagt atttggtatc
5341 tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa
5401 caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa
5461 aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa
5521 aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt
5581 ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac
5641 agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc
5701 atagttgcct gactccccgt cgtgtagata actacgatac gggagggctt accatctggc
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5821 aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc cgcctccatc
5881 cagtctatta attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc
5941 aacgttgttg ccattgctac aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca
6001 ttcagctccg gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa
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6181 tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt
6241 tgctcttgcc cggcgtcaat acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg
6301 ctcatcattg gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga
6361 tccagttcga tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt tactttcacc
6421 agcgtttctg ggtgagcaaa aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg
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6541 ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg
6601 gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca cctgacgtct aagaaaccat tattatcatg
6661 acattaacct ataaaaatag gcgtatcacg aggccctttc gtctcgcgcg tttcggtgat
6721 gacggtgaaa acctctgaca catgcagctc ccggagacgg tcacagcttg tctgtaagcg
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6961 cgcaactgtt gggaagggcg atcggtgcgg gcctcttcgc tattacgcca gctggcgaaa
7021 gggggatgtg ctgcaaggcg attaagttgg gtaacgccag ggttttccca gtcacgacgt
7081 tgtaaaacga cggccagt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCMV-BKCA-FLAG人源基因质粒
别称: AF118141.1
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pCDNA3.0-HA-p53质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7098 bp ds-DNA circular SYN 21-JAN-2018
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7098
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 27..330
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 331..534
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/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
intron 672..768
/label=SV40 intron
/note="modified SV40 intron with splice donor and acceptor
sites"
regulatory 845..854
/regulatory_class="other"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
misc_feature 851..4189
/label=BKCA
CDS 4199..4222
/codon_start=1
/product="FLAG(R) epitope tag, followed by an enterokinase
cleavage site"
/label=FLAG
/translation="DYKDDDDK"
polyA_signal 4237..4371
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(4884..5472)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(5643..6503)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(6504..6608)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gagttcgagc ttgcatgcct gcaggtcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc
61 tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg
121 ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac tgcccacttg
181 gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa
241 tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac
301 atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta catcaatggg
361 cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga cgtcaatggg
421 agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa ctccgcccca
481 ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag agctcgttta
541 gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca tagaagacac
601 cgggaccgat ccagcctccg gactctagag gatccggtac tagaggaact gaaaaaccag
661 aaagttaact ggtaagttta gtctttttgt cttttatttc aggtcccgga tccggtggtg
721 gtgcaaatca aagaactgct cctcagtgga tgttgccttt acttctaggc ctgtacggaa
781 gtgttacttc tgctctaaaa gctgcggaat tgtacccgcg ggcccaggcc cgaattcggt
841 cgacgccacc atggatgcgc tcatcatccc ggtgaccatg gaggtgccgt gcgacagccg
901 gggccaacgc atgtggtggg ctttcctggc ctcctccatg gtgactttct tcgggggcct
961 cttcatcatc ttgctctggc ggacgctcaa gtacctgtgg accgtgtgct gccactgcgg
1021 gggcaagacg aaggaggccc agaagattaa caatggctca agccaggcgg atggcactct
1081 caaaccagtg gatgaaaaag aggaggcagt ggccgccgag gtcggctgga tgacctccgt
1141 gaaggactgg gcgggggtga tgatatccgc ccagacactg actggcagag tcctggttgt
1201 cttagtcttt gctctcagca tcggtgcact tgtaatatac ttcatagatt catcaaaccc
1261 aatagaatcc tgccagaatt tctacaaaga tttcacatta cagatcgaca tggctttcaa
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1381 ctggctggaa gtgaactctg tagtggattt cttcacggtg ccccccgtgt ttgtgtctgt
1441 gtacttaaac agaagttggc ttggtttgag atttttaaga gctctgagac tgatacagtt
1501 ttcagaaatt ttgcagtttc tgaatattct taaaacaagt aattccatca agctggtgaa
1561 tctgctctcc atatttatca gcacgtggct gactgcagcc gggttcatcc atttggtgga
1621 gaattcaggg gacccatggg aaaatttcca aaacaaccag gctctcacct actgggaatg
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1741 cacacttggg cgcctcttca tggtcttctt catcctcggg ggactggcca tgtttgccag
1801 ctacgtccct gaaatcatag agttaatagg aaaccgcaag aaatacgggg gctcctatag
1861 tgcggttagt ggaagaaagc acattgtggt ctgcggacac atcactctgg agagtgtttc
1921 caacttcctg aaggactttc tgcacaagga ccgggatgac gtcaatgtgg agatcgtttt
1981 tcttcacaac atctcccccg acctggagct tgaagctctg ttcaaacgac attttactca
2041 ggtggaattt tatcagggtt ccgtcctcaa tccacatgat cttgcaagag tcaagataga
2101 gtcagcagat gcatgcctga tccttgccaa caagtactgc gctgacccgg atgcggagga
2161 tgcctcgaat atcatgagag taatctccat aaagaactac catccgaaga taagaatcat
2221 cactcaaatg ctgcagtatc acaacaaggc ccatctgcta aacatcccga gctggaattg
2281 gaaagaaggt gatgacgcaa tctgcctcgc agagttgaag ttgggcttca tagcccagag
2341 ctgcctggct caaggcctct ccaccatgct tgccaacctc ttctccatga ggtcattcat
2401 aaagattgag gaagacacat ggcagaaata ctacttggaa ggagtctcaa atgaaatgta
2461 cacagaatat ctctccagtg ccttcgtggg tctgtccttc cctactgttt gtgagctgtg
2521 ttttgtgaag ctcaagctcc taatgatagc cattgagtac aagtctgcca accgagagag
2581 ccgtatatta attaatcctg gaaaccatct taagatccaa gaaggtactt taggattttt
2641 catcgcaagt gatgccaaag aagttaaaag ggcatttttt tactgcaagg cctgtcatga
2701 tgacatcaca gatcccaaaa gaataaaaaa atgtggctgc aaacggcttg aagatgagca
2761 gccgtcaaca ctatcaccaa aaaaaaagca acggaatgga ggcatgcgga actcacccaa
2821 cacctcgcct aagctgatga ggcatgaccc cttgttaatt cctggcaatg atcagattga
2881 caacatggac tccaatgtga agaagtacga ctctactggg atgtttcact ggtgtgcacc
2941 caaggagata gagaaagtca tcctgactcg aagtgaagct gccatgaccg tcctgagtgg
3001 ccatgtcgtg gtctgcatct ttggcgacgt cagctcagcc ctgatcggcc tccggaacct
3061 ggtgatgccg ctccgtgcca gcaactttca ttaccatgag ctcaagcaca ttgtgtttgt
3121 gggctctatt gagtacctca agcgggaatg ggagacgctt cataacttcc ccaaagtgtc
3181 catattgcct ggtacgccat taagtcgggc tgatttaagg gctgtcaaca tcaacctctg
3241 tgacatgtgc gttatcctgt cagccaatca gaataatatt gatgatactt cgctgcagga
3301 caaggaatgc atcttggcgt cactcaacat caaatctatg cagtttgatg acagcatcgg
3361 agtcttgcag gctaattccc aagggttcac acctccagga atggatagat cctctccaga
3421 taacagccca gtgcacggga tgttacgtca accatccatc acaactgggg tcaacatccc
3481 catcatcact gaactagtga acgatactaa tgttcagttt ttggaccaag acgatgatga
3541 tgaccctgat acagaactgt acctcacgca gccctttgcc tgtgggacag catttgccgt
3601 cagtgtcctg gactcactca tgagcgcgac gtacttcaat gacaatatcc tcaccctgat
3661 acggaccctg gtgaccggag gagccacgcc ggagctggag gctctgattg ctgaggaaaa
3721 cgcccttaga ggtggctaca gcaccccgca gacactggcc aatagggacc gctgccgcgt
3781 ggcccagtta gctctgctcg atgggccatt tgcggactta ggggatggtg gttgttatgg
3841 tgatctgttc tgcaaagctc tgaaaacata taatatgctt tgttttggaa tttaccggct
3901 gagagatgct cacctcagca cccccagtca gtgcgcaaag aggtatgtca tcaccaaccc
3961 gccctatgag tttgagctcg tgccgacgga cctgatcttc tgcttaatgc agtttgacca
4021 caatgccggc cagtcccggg ccagcctgtc ccattcctcc cactcgtcgc agtcctccag
4081 caagaagagc tcctctgttc actccatccc atccacagca aaccgacaga accggcccaa
4141 gtccagggag tcccgggaca aacagaagta cgtgcaggaa gagcggcttg gtaccggcga
4201 ctacaaggac gacgatgaca agtaagcggc cgcggggatc cagacatgat aagatacatt
4261 gatgagtttg gacaaaccac aactagaatg cagtgaaaaa aatgctttat ttgtgaaatt
4321 tgtgatgcta ttgctttatt tgtaaccatt ataagctgca ataaacaagt taacaacaac
4381 aattgcattc attttatgtt tcaggttcag ggggaggtgt gggaggtttt ttcggatcct
4441 ctagagtcga tctgcaggca tgctagcttg gcgtaatcat ggtcatagct gtttcctgtg
4501 tgaaattgtt atccgctcac aattccacac aacatacgag ccggaagcat aaagtgtaaa
4561 gcctggggtg cctaatgagt gagctaactc acattaattg cgttgcgctc actgcccgct
4621 ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga
4681 ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc
4741 gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa
4801 tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt
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5101 agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc
5161 gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta
5221 tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct
5281 acagagttct tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaaggacagt atttggtatc
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6061 gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc agtgttatca
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6181 tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt
6241 tgctcttgcc cggcgtcaat acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg
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6361 tccagttcga tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt tactttcacc
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6541 ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg
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6661 acattaacct ataaaaatag gcgtatcacg aggccctttc gtctcgcgcg tttcggtgat
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3809/pCMV-SPORT6-NEUROG1人源基因质粒 |
| P3810/pCMV-SPORT6-ABHD11人源基因质粒 |
| P3811/pCMV-SPORT6-PRR11人源基因质粒 |
| P3812/pCMV-SPORT6-RNF146人源基因质粒 |
| P3813/pCMV-SPORT6-NMB人源基因质粒 |
| P3814/pCMV-SPORT6-CREG1人源基因质粒 |
| P3815/pCMV-SPORT6-HLA-DQA1人源基因质粒 |
| P3816/pCMV-SPORT6-ACY3人源基因质粒 |
| P3817/pCMV-SPORT6-GDAP1L1人源基因质粒 |
| P3818/pCMV-SPORT6-ARNTL2人源基因质粒 |
| P3821/pCMV-SPORT6-FAM184A人源基因质粒 |
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pCMV-BKCA-FLAG人源基因质粒
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