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- Xybio
- 上海
- P1780
- 2025年07月12日
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- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
TP53;BCC7LFS1P53TRP53；pLenti6-V5-p53
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pLenti6/V5-p53_R175H人源基因质粒
别称: TP53;BCC7LFS1P53TRP53；pLenti6-V5-p53
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：Blast
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Blast
荧光蛋白：
质粒简介
pLenti6-V5-p53_R175H pLenti6/V5-p53_R175H是一个人源基因哺乳细胞过表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8142 bp ds-DNA circular SYN 25-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8142
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 236..462
/label=RSV promoter
/note="Rous sarcoma virus enhancer/promoter"
LTR 463..643
/label=5' LTR (truncated)
/note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
misc_feature 690..815
/label=HIV-1 Psi
/note="packaging signal of human immunodeficiency virus
type 1"
misc_feature 1308..1541
/label=RRE
/note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for
Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the
cytoplasm."
enhancer 2049..2352
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 2353..2556
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
misc_feature 2673..3884
/label=p53_R175H
CDS 3885..3926
/codon_start=1
/product="epitope tag from simian virus 5"
/label=V5 tag
/translation="GKPIPNPLLGLDST"
promoter 3968..4297
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 4148..4283
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
promoter 4345..4392
/label=EM7 promoter
/note="synthetic bacterial promoter "
CDS 4411..4809
/codon_start=1
/gene="Aspergillus terreus BSD"
/product="blasticidin S deaminase"
/label=Blast
/note="confers resistance to blasticidin"
/translation="MAKPLSQEESTLIERATATINSIPISEDYSVASAALSSDGRIFTG
VNVYHFTGGPCAELVVLGTAAAAAAGNLTCIVAIGNENRGILSPCGRCRQVLLDLHPGI
KAIVKDSDGQPTAVGIRELLPSGYVWEG"
LTR 4896..5129
/label=3' LTR (Delta-U3)
/note="self-inactivating 3' long terminal repeat (LTR) from
HIV-1"
polyA_signal 5201..5322
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin 5362..5497
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
rep_origin 5704..6159
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 6185..6289
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
CDS 6290..7150
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 7321..7909
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 cagctggcac gacaggtttc ccgactggaa agcgggcagt gagcgcaacg caattaatgt
61 gagttagctc actcattagg caccccaggc tttacacttt atgcttccgg ctcgtatgtt
121 gtgtggaatt gtgagcggat aacaatttca cacaggaaac agctatgacc atgattacgc
181 caagcgcgca attaaccctc actaaaggga acaaaagctg gagctgcaag cttaatgtag
241 tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca acatgcctta
301 caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta cgatcgtgcc
361 ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga attgccgcat
421 tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacataa acgggtctct ctggttagac
481 cagatctgag cctgggagct ctctggctaa ctagggaacc cactgcttaa gcctcaataa
541 agcttgcctt gagtgcttca agtagtgtgt gcccgtctgt tgtgtgactc tggtaactag
601 agatccctca gaccctttta gtcagtgtgg aaaatctcta gcagtggcgc ccgaacaggg
661 acttgaaagc gaaagggaaa ccagaggagc tctctcgacg caggactcgg cttgctgaag
721 cgcgcacggc aagaggcgag gggcggcgac tggtgagtac gccaaaaatt ttgactagcg
781 gaggctagaa ggagagagat gggtgcgaga gcgtcagtat taagcggggg agaattagat
841 cgcgatggga aaaaattcgg ttaaggccag ggggaaagaa aaaatataaa ttaaaacata
901 tagtatgggc aagcagggag ctagaacgat tcgcagttaa tcctggcctg ttagaaacat
961 cagaaggctg tagacaaata ctgggacagc tacaaccatc ccttcagaca ggatcagaag
1021 aacttagatc attatataat acagtagcaa ccctctattg tgtgcatcaa aggatagaga
1081 taaaagacac caaggaagct ttagacaaga tagaggaaga gcaaaacaaa agtaagacca
1141 ccgcacagca agcggccgct gatcttcaga cctggaggag gagatatgag ggacaattgg
1201 agaagtgaat tatataaata taaagtagta aaaattgaac cattaggagt agcacccacc
1261 aaggcaaaga gaagagtggt gcagagagaa aaaagagcag tgggaatagg agctttgttc
1321 cttgggttct tgggagcagc aggaagcact atgggcgcag cgtcaatgac gctgacggta
1381 caggccagac aattattgtc tggtatagtg cagcagcaga acaatttgct gagggctatt
1441 gaggcgcaac agcatctgtt gcaactcaca gtctggggca tcaagcagct ccaggcaaga
1501 atcctggctg tggaaagata cctaaaggat caacagctcc tggggatttg gggttgctct
1561 ggaaaactca tttgcaccac tgctgtgcct tggaatgcta gttggagtaa taaatctctg
1621 gaacagattt ggaatcacac gacctggatg gagtgggaca gagaaattaa caattacaca
1681 agcttaatac actccttaat tgaagaatcg caaaaccagc aagaaaagaa tgaacaagaa
1741 ttattggaat tagataaatg ggcaagtttg tggaattggt ttaacataac aaattggctg
1801 tggtatataa aattattcat aatgatagta ggaggcttgg taggtttaag aatagttttt
1861 gctgtacttt ctatagtgaa tagagttagg cagggatatt caccattatc gtttcagacc
1921 cacctcccaa ccccgagggg acccgacagg cccgaaggaa tagaagaaga aggtggagag
1981 agagacagag acagatccat tcgattagtg aacggatctc gacggtatcg ataagcttgg
2041 gagttccgcg ttacataact tacggtaaat ggcccgcctg gctgaccgcc caacgacccc
2101 cgcccattga cgtcaataat gacgtatgtt cccatagtaa cgccaatagg gactttccat
2161 tgacgtcaat gggtggagta tttacggtaa actgcccact tggcagtaca tcaagtgtat
2221 catatgccaa gtacgccccc tattgacgtc aatgacggta aatggcccgc ctggcattat
2281 gcccagtaca tgaccttatg ggactttcct acttggcagt acatctacgt attagtcatc
2341 gctattacca tggtgatgcg gttttggcag tacatcaatg ggcgtggata gcggtttgac
2401 tcacggggat ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg ggagtttgtt ttggcaccaa
2461 aatcaacggg actttccaaa atgtcgtaac aactccgccc cattgacgca aatgggcggt
2521 aggcgtgtac ggtgggaggt ctatataagc agagctcgtt tagtgaaccg tcagatcgcc
2581 tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgactcta gaggatccac
2641 tagtccagtg tggtggaatt gatcccttca ccatggagga gccgcagtca gatcctagcg
2701 tcgagccccc tctgagtcag gaaacatttt cagacctatg gaaactactt cctgaaaaca
2761 acgttctgtc ccccttgccg tcccaagcaa tggatgattt gatgctgtcc ccggacgata
2821 ttgaacaatg gttcactgaa gacccaggtc cagatgaagc tcccagaatg ccagaggctg
2881 ctccccgcgt ggcccctgca ccagcagctc ctacaccggc ggcccctgca ccagccccct
2941 cctggcccct gtcatcttct gtcccttccc agaaaaccta ccagggcagc tacggtttcc
3001 gtctgggctt cttgcattct gggacagcca agtctgtgac ttgcacgtac tcccctgccc
3061 tcaacaagat gttttgccaa ctggccaaga cctgccctgt gcagctgtgg gttgattcca
3121 cacccccgcc cggcacccgc gtccgcgcca tggccatcta caagcagtca cagcacatga
3181 cggaggttgt gaggcactgc ccccaccatg agcgctgctc agatagcgat ggtctggccc
3241 ctcctcagca tcttatccga gtggaaggaa atttgcgtgt ggagtatttg gatgacagaa
3301 acacttttcg acatagtgtg gtggtgccct atgagccgcc tgaggttggc tctgactgta
3361 ccaccatcca ctacaactac atgtgtaaca gttcctgcat gggcggcatg aaccggaggc
3421 ccatcctcac catcatcaca ctggaagact ccagtggtaa tctactggga cggaacagct
3481 ttgaggtgcg tgtttgtgcc tgtcctggga gagaccggcg cacagaggaa gagaatctcc
3541 gcaagaaagg ggagcctcac cacgagctgc ccccagggag cactaagcga gcactgccca
3601 acaacaccag ctcctctccc cagccaaaga agaaaccact ggatggagaa tatttcaccc
3661 ttcagatccg tgggcgtgag cgcttcgaga tgttccgaga gctgaatgag gccttggaac
3721 tcaaggatgc ccaggctggg aaggagccgg gggggagcag ggctcactcc agccacctga
3781 agtccaaaaa gggtcagtct acctcccgcc ataaaaaact catgttcaag acagaagggc
3841 ctgactcaga caagggctcg agtctagagg gcccgcggtt cgaaggtaag cctatcccta
3901 accctctcct cggtctcgat tctacgcgta ccggttagta atgagtttgg aattaattct
3961 gtggaatgtg tgtcagttag ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag gcagaagtat
4021 gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac caggtgtgga aagtccccag gctccccagc
4081 aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca accatagtcc cgcccctaac
4141 tccgcccatc ccgcccctaa ctccgcccag ttccgcccat tctccgcccc atggctgact
4201 aatttttttt atttatgcag aggccgaggc cgcctctgcc tctgagctat tccagaagta
4261 gtgaggaggc ttttttggag gcctaggctt ttgcaaaaag ctcccgggag cttgtatatc
4321 cattttcgga tctgatcagc acgtgttgac aattaatcat cggcatagta tatcggcata
4381 gtataatacg acaaggtgag gaactaaacc atggccaagc ctttgtctca agaagaatcc
4441 accctcattg aaagagcaac ggctacaatc aacagcatcc ccatctctga agactacagc
4501 gtcgccagcg cagctctctc tagcgacggc cgcatcttca ctggtgtcaa tgtatatcat
4561 tttactgggg gaccttgtgc agaactcgtg gtgctgggca ctgctgctgc tgcggcagct
4621 ggcaacctga cttgtatcgt cgcgatcgga aatgagaaca ggggcatctt gagcccctgc
4681 ggacggtgcc gacaggtgct tctcgatctg catcctggga tcaaagccat agtgaaggac
4741 agtgatggac agccgacggc agttgggatt cgtgaattgc tgccctctgg ttatgtgtgg
4801 gagggctaag cacaattcga gctcggtacc tttaagacca atgacttaca aggcagctgt
4861 agatcttagc cactttttaa aagaaaaggg gggactggaa gggctaattc actcccaacg
4921 aagacaagat ctgctttttg cttgtactgg gtctctctgg ttagaccaga tctgagcctg
4981 ggagctctct ggctaactag ggaacccact gcttaagcct caataaagct tgccttgagt
5041 gcttcaagta gtgtgtgccc gtctgttgtg tgactctggt aactagagat ccctcagacc
5101 cttttagtca gtgtggaaaa tctctagcag tagtagttca tgtcatctta ttattcagta
5161 tttataactt gcaaagaaat gaatatcaga gagtgagagg aacttgttta ttgcagctta
5221 taatggttac aaataaagca atagcatcac aaatttcaca aataaagcat ttttttcact
5281 gcattctagt tgtggtttgt ccaaactcat caatgtatct tatcatgtct ggctctagct
5341 atcccgcccc taactccgcc catcccgccc ctaactccgc ccagttccgc ccattctccg
5401 ccccatggct gactaatttt ttttatttat gcagaggccg aggccgcctc ggcctctgag
5461 ctattccaga agtagtgagg aggctttttt ggaggcctag ggacgtaccc aattcgccct
5521 atagtgagtc gtattacgcg cgctcactgg ccgtcgtttt acaacgtcgt gactgggaaa
5581 accctggcgt tacccaactt aatcgccttg cagcacatcc ccctttcgcc agctggcgta
5641 atagcgaaga ggcccgcacc gatcgccctt cccaacagtt gcgcagcctg aatggcgaat
5701 gggacgcgcc ctgtagcggc gcattaagcg cggcgggtgt ggtggttacg cgcagcgtga
5761 ccgctacact tgccagcgcc ctagcgcccg ctcctttcgc tttcttccct tcctttctcg
5821 ccacgttcgc cggctttccc cgtcaagctc taaatcgggg gctcccttta gggttccgat
5881 ttagtgcttt acggcacctc gaccccaaaa aacttgatta gggtgatggt tcacgtagtg
5941 ggccatcgcc ctgatagacg gtttttcgcc ctttgacgtt ggagtccacg ttctttaata
6001 gtggactctt gttccaaact ggaacaacac tcaaccctat ctcggtctat tcttttgatt
6061 tataagggat tttgccgatt tcggcctatt ggttaaaaaa tgagctgatt taacaaaaat
6121 ttaacgcgaa ttttaacaaa atattaacgc ttacaattta ggtggcactt ttcggggaaa
6181 tgtgcgcgga acccctattt gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat
6241 gagacaataa ccctgataaa tgcttcaata atattgaaaa aggaagagta tgagtattca
6301 acatttccgt gtcgccctta ttcccttttt tgcggcattt tgccttcctg tttttgctca
6361 cccagaaacg ctggtgaaag taaaagatgc tgaagatcag ttgggtgcac gagtgggtta
6421 catcgaactg gatctcaaca gcggtaagat ccttgagagt tttcgccccg aagaacgttt
6481 tccaatgatg agcactttta aagttctgct atgtggcgcg gtattatccc gtattgacgc
6541 cgggcaagag caactcggtc gccgcataca ctattctcag aatgacttgg ttgagtactc
6601 accagtcaca gaaaagcatc ttacggatgg catgacagta agagaattat gcagtgctgc
6661 cataaccatg agtgataaca ctgcggccaa cttacttctg acaacgatcg gaggaccgaa
6721 ggagctaacc gcttttttgc acaacatggg ggatcatgta actcgccttg atcgttggga
6781 accggagctg aatgaagcca taccaaacga cgagcgtgac accacgatgc ctgtagcaat
6841 ggcaacaacg ttgcgcaaac tattaactgg cgaactactt actctagctt cccggcaaca
6901 attaatagac tggatggagg cggataaagt tgcaggacca cttctgcgct cggcccttcc
6961 ggctggctgg tttattgctg ataaatctgg agccggtgag cgtgggtctc gcggtatcat
7021 tgcagcactg gggccagatg gtaagccctc ccgtatcgta gttatctaca cgacggggag
7081 tcaggcaact atggatgaac gaaatagaca gatcgctgag ataggtgcct cactgattaa
7141 gcattggtaa ctgtcagacc aagtttactc atatatactt tagattgatt taaaacttca
7201 tttttaattt aaaaggatct aggtgaagat cctttttgat aatctcatga ccaaaatccc
7261 ttaacgtgag ttttcgttcc actgagcgtc agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc
7321 ttgagatcct ttttttctgc gcgtaatctg ctgcttgcaa acaaaaaaac caccgctacc
7381 agcggtggtt tgtttgccgg atcaagagct accaactctt tttccgaagg taactggctt
7441 cagcagagcg cagataccaa atactgttct tctagtgtag ccgtagttag gccaccactt
7501 caagaactct gtagcaccgc ctacatacct cgctctgcta atcctgttac cagtggctgc
7561 tgccagtggc gataagtcgt gtcttaccgg gttggactca agacgatagt taccggataa
7621 ggcgcagcgg tcgggctgaa cggggggttc gtgcacacag cccagcttgg agcgaacgac
7681 ctacaccgaa ctgagatacc tacagcgtga gctatgagaa agcgccacgc ttcccgaagg
7741 gagaaaggcg gacaggtatc cggtaagcgg cagggtcgga acaggagagc gcacgaggga
7801 gcttccaggg ggaaacgcct ggtatcttta tagtcctgtc gggtttcgcc acctctgact
7861 tgagcgtcga tttttgtgat gctcgtcagg ggggcggagc ctatggaaaa acgccagcaa
7921 cgcggccttt ttacggttcc tggccttttg ctggcctttt gctcacatgt tctttcctgc
7981 gttatcccct gattctgtgg ataaccgtat taccgccttt gagtgagctg ataccgctcg
8041 ccgcagccga acgaccgagc gcagcgagtc agtgagcgag gaagcggaag agcgcccaat
8101 acgcaaaccg cctctccccg cgcgttggcc gattcattaa tg
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pLenti6/V5-p53_R175H人源基因质粒
别称: TP53;BCC7LFS1P53TRP53；pLenti6-V5-p53
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：Blast
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Blast
荧光蛋白：
质粒简介
pLenti6-V5-p53_R175H pLenti6/V5-p53_R175H是一个人源基因哺乳细胞过表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8142 bp ds-DNA circular SYN 25-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8142
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 236..462
/label=RSV promoter
/note="Rous sarcoma virus enhancer/promoter"
LTR 463..643
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/note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
misc_feature 690..815
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type 1"
misc_feature 1308..1541
/label=RRE
/note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for
Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the
cytoplasm."
enhancer 2049..2352
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 2353..2556
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/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
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CDS 3885..3926
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/product="epitope tag from simian virus 5"
/label=V5 tag
/translation="GKPIPNPLLGLDST"
promoter 3968..4297
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 4148..4283
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
promoter 4345..4392
/label=EM7 promoter
/note="synthetic bacterial promoter "
CDS 4411..4809
/codon_start=1
/gene="Aspergillus terreus BSD"
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/note="confers resistance to blasticidin"
/translation="MAKPLSQEESTLIERATATINSIPISEDYSVASAALSSDGRIFTG
VNVYHFTGGPCAELVVLGTAAAAAAGNLTCIVAIGNENRGILSPCGRCRQVLLDLHPGI
KAIVKDSDGQPTAVGIRELLPSGYVWEG"
LTR 4896..5129
/label=3' LTR (Delta-U3)
/note="self-inactivating 3' long terminal repeat (LTR) from
HIV-1"
polyA_signal 5201..5322
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/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin 5362..5497
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
rep_origin 5704..6159
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
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CDS 6290..7150
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/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
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LIKHW"
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/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 cagctggcac gacaggtttc ccgactggaa agcgggcagt gagcgcaacg caattaatgt
61 gagttagctc actcattagg caccccaggc tttacacttt atgcttccgg ctcgtatgtt
121 gtgtggaatt gtgagcggat aacaatttca cacaggaaac agctatgacc atgattacgc
181 caagcgcgca attaaccctc actaaaggga acaaaagctg gagctgcaag cttaatgtag
241 tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca acatgcctta
301 caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta cgatcgtgcc
361 ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga attgccgcat
421 tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacataa acgggtctct ctggttagac
481 cagatctgag cctgggagct ctctggctaa ctagggaacc cactgcttaa gcctcaataa
541 agcttgcctt gagtgcttca agtagtgtgt gcccgtctgt tgtgtgactc tggtaactag
601 agatccctca gaccctttta gtcagtgtgg aaaatctcta gcagtggcgc ccgaacaggg
661 acttgaaagc gaaagggaaa ccagaggagc tctctcgacg caggactcgg cttgctgaag
721 cgcgcacggc aagaggcgag gggcggcgac tggtgagtac gccaaaaatt ttgactagcg
781 gaggctagaa ggagagagat gggtgcgaga gcgtcagtat taagcggggg agaattagat
841 cgcgatggga aaaaattcgg ttaaggccag ggggaaagaa aaaatataaa ttaaaacata
901 tagtatgggc aagcagggag ctagaacgat tcgcagttaa tcctggcctg ttagaaacat
961 cagaaggctg tagacaaata ctgggacagc tacaaccatc ccttcagaca ggatcagaag
1021 aacttagatc attatataat acagtagcaa ccctctattg tgtgcatcaa aggatagaga
1081 taaaagacac caaggaagct ttagacaaga tagaggaaga gcaaaacaaa agtaagacca
1141 ccgcacagca agcggccgct gatcttcaga cctggaggag gagatatgag ggacaattgg
1201 agaagtgaat tatataaata taaagtagta aaaattgaac cattaggagt agcacccacc
1261 aaggcaaaga gaagagtggt gcagagagaa aaaagagcag tgggaatagg agctttgttc
1321 cttgggttct tgggagcagc aggaagcact atgggcgcag cgtcaatgac gctgacggta
1381 caggccagac aattattgtc tggtatagtg cagcagcaga acaatttgct gagggctatt
1441 gaggcgcaac agcatctgtt gcaactcaca gtctggggca tcaagcagct ccaggcaaga
1501 atcctggctg tggaaagata cctaaaggat caacagctcc tggggatttg gggttgctct
1561 ggaaaactca tttgcaccac tgctgtgcct tggaatgcta gttggagtaa taaatctctg
1621 gaacagattt ggaatcacac gacctggatg gagtgggaca gagaaattaa caattacaca
1681 agcttaatac actccttaat tgaagaatcg caaaaccagc aagaaaagaa tgaacaagaa
1741 ttattggaat tagataaatg ggcaagtttg tggaattggt ttaacataac aaattggctg
1801 tggtatataa aattattcat aatgatagta ggaggcttgg taggtttaag aatagttttt
1861 gctgtacttt ctatagtgaa tagagttagg cagggatatt caccattatc gtttcagacc
1921 cacctcccaa ccccgagggg acccgacagg cccgaaggaa tagaagaaga aggtggagag
1981 agagacagag acagatccat tcgattagtg aacggatctc gacggtatcg ataagcttgg
2041 gagttccgcg ttacataact tacggtaaat ggcccgcctg gctgaccgcc caacgacccc
2101 cgcccattga cgtcaataat gacgtatgtt cccatagtaa cgccaatagg gactttccat
2161 tgacgtcaat gggtggagta tttacggtaa actgcccact tggcagtaca tcaagtgtat
2221 catatgccaa gtacgccccc tattgacgtc aatgacggta aatggcccgc ctggcattat
2281 gcccagtaca tgaccttatg ggactttcct acttggcagt acatctacgt attagtcatc
2341 gctattacca tggtgatgcg gttttggcag tacatcaatg ggcgtggata gcggtttgac
2401 tcacggggat ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg ggagtttgtt ttggcaccaa
2461 aatcaacggg actttccaaa atgtcgtaac aactccgccc cattgacgca aatgggcggt
2521 aggcgtgtac ggtgggaggt ctatataagc agagctcgtt tagtgaaccg tcagatcgcc
2581 tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgactcta gaggatccac
2641 tagtccagtg tggtggaatt gatcccttca ccatggagga gccgcagtca gatcctagcg
2701 tcgagccccc tctgagtcag gaaacatttt cagacctatg gaaactactt cctgaaaaca
2761 acgttctgtc ccccttgccg tcccaagcaa tggatgattt gatgctgtcc ccggacgata
2821 ttgaacaatg gttcactgaa gacccaggtc cagatgaagc tcccagaatg ccagaggctg
2881 ctccccgcgt ggcccctgca ccagcagctc ctacaccggc ggcccctgca ccagccccct
2941 cctggcccct gtcatcttct gtcccttccc agaaaaccta ccagggcagc tacggtttcc
3001 gtctgggctt cttgcattct gggacagcca agtctgtgac ttgcacgtac tcccctgccc
3061 tcaacaagat gttttgccaa ctggccaaga cctgccctgt gcagctgtgg gttgattcca
3121 cacccccgcc cggcacccgc gtccgcgcca tggccatcta caagcagtca cagcacatga
3181 cggaggttgt gaggcactgc ccccaccatg agcgctgctc agatagcgat ggtctggccc
3241 ctcctcagca tcttatccga gtggaaggaa atttgcgtgt ggagtatttg gatgacagaa
3301 acacttttcg acatagtgtg gtggtgccct atgagccgcc tgaggttggc tctgactgta
3361 ccaccatcca ctacaactac atgtgtaaca gttcctgcat gggcggcatg aaccggaggc
3421 ccatcctcac catcatcaca ctggaagact ccagtggtaa tctactggga cggaacagct
3481 ttgaggtgcg tgtttgtgcc tgtcctggga gagaccggcg cacagaggaa gagaatctcc
3541 gcaagaaagg ggagcctcac cacgagctgc ccccagggag cactaagcga gcactgccca
3601 acaacaccag ctcctctccc cagccaaaga agaaaccact ggatggagaa tatttcaccc
3661 ttcagatccg tgggcgtgag cgcttcgaga tgttccgaga gctgaatgag gccttggaac
3721 tcaaggatgc ccaggctggg aaggagccgg gggggagcag ggctcactcc agccacctga
3781 agtccaaaaa gggtcagtct acctcccgcc ataaaaaact catgttcaag acagaagggc
3841 ctgactcaga caagggctcg agtctagagg gcccgcggtt cgaaggtaag cctatcccta
3901 accctctcct cggtctcgat tctacgcgta ccggttagta atgagtttgg aattaattct
3961 gtggaatgtg tgtcagttag ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag gcagaagtat
4021 gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac caggtgtgga aagtccccag gctccccagc
4081 aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca accatagtcc cgcccctaac
4141 tccgcccatc ccgcccctaa ctccgcccag ttccgcccat tctccgcccc atggctgact
4201 aatttttttt atttatgcag aggccgaggc cgcctctgcc tctgagctat tccagaagta
4261 gtgaggaggc ttttttggag gcctaggctt ttgcaaaaag ctcccgggag cttgtatatc
4321 cattttcgga tctgatcagc acgtgttgac aattaatcat cggcatagta tatcggcata
4381 gtataatacg acaaggtgag gaactaaacc atggccaagc ctttgtctca agaagaatcc
4441 accctcattg aaagagcaac ggctacaatc aacagcatcc ccatctctga agactacagc
4501 gtcgccagcg cagctctctc tagcgacggc cgcatcttca ctggtgtcaa tgtatatcat
4561 tttactgggg gaccttgtgc agaactcgtg gtgctgggca ctgctgctgc tgcggcagct
4621 ggcaacctga cttgtatcgt cgcgatcgga aatgagaaca ggggcatctt gagcccctgc
4681 ggacggtgcc gacaggtgct tctcgatctg catcctggga tcaaagccat agtgaaggac
4741 agtgatggac agccgacggc agttgggatt cgtgaattgc tgccctctgg ttatgtgtgg
4801 gagggctaag cacaattcga gctcggtacc tttaagacca atgacttaca aggcagctgt
4861 agatcttagc cactttttaa aagaaaaggg gggactggaa gggctaattc actcccaacg
4921 aagacaagat ctgctttttg cttgtactgg gtctctctgg ttagaccaga tctgagcctg
4981 ggagctctct ggctaactag ggaacccact gcttaagcct caataaagct tgccttgagt
5041 gcttcaagta gtgtgtgccc gtctgttgtg tgactctggt aactagagat ccctcagacc
5101 cttttagtca gtgtggaaaa tctctagcag tagtagttca tgtcatctta ttattcagta
5161 tttataactt gcaaagaaat gaatatcaga gagtgagagg aacttgttta ttgcagctta
5221 taatggttac aaataaagca atagcatcac aaatttcaca aataaagcat ttttttcact
5281 gcattctagt tgtggtttgt ccaaactcat caatgtatct tatcatgtct ggctctagct
5341 atcccgcccc taactccgcc catcccgccc ctaactccgc ccagttccgc ccattctccg
5401 ccccatggct gactaatttt ttttatttat gcagaggccg aggccgcctc ggcctctgag
5461 ctattccaga agtagtgagg aggctttttt ggaggcctag ggacgtaccc aattcgccct
5521 atagtgagtc gtattacgcg cgctcactgg ccgtcgtttt acaacgtcgt gactgggaaa
5581 accctggcgt tacccaactt aatcgccttg cagcacatcc ccctttcgcc agctggcgta
5641 atagcgaaga ggcccgcacc gatcgccctt cccaacagtt gcgcagcctg aatggcgaat
5701 gggacgcgcc ctgtagcggc gcattaagcg cggcgggtgt ggtggttacg cgcagcgtga
5761 ccgctacact tgccagcgcc ctagcgcccg ctcctttcgc tttcttccct tcctttctcg
5821 ccacgttcgc cggctttccc cgtcaagctc taaatcgggg gctcccttta gggttccgat
5881 ttagtgcttt acggcacctc gaccccaaaa aacttgatta gggtgatggt tcacgtagtg
5941 ggccatcgcc ctgatagacg gtttttcgcc ctttgacgtt ggagtccacg ttctttaata
6001 gtggactctt gttccaaact ggaacaacac tcaaccctat ctcggtctat tcttttgatt
6061 tataagggat tttgccgatt tcggcctatt ggttaaaaaa tgagctgatt taacaaaaat
6121 ttaacgcgaa ttttaacaaa atattaacgc ttacaattta ggtggcactt ttcggggaaa
6181 tgtgcgcgga acccctattt gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat
6241 gagacaataa ccctgataaa tgcttcaata atattgaaaa aggaagagta tgagtattca
6301 acatttccgt gtcgccctta ttcccttttt tgcggcattt tgccttcctg tttttgctca
6361 cccagaaacg ctggtgaaag taaaagatgc tgaagatcag ttgggtgcac gagtgggtta
6421 catcgaactg gatctcaaca gcggtaagat ccttgagagt tttcgccccg aagaacgttt
6481 tccaatgatg agcactttta aagttctgct atgtggcgcg gtattatccc gtattgacgc
6541 cgggcaagag caactcggtc gccgcataca ctattctcag aatgacttgg ttgagtactc
6601 accagtcaca gaaaagcatc ttacggatgg catgacagta agagaattat gcagtgctgc
6661 cataaccatg agtgataaca ctgcggccaa cttacttctg acaacgatcg gaggaccgaa
6721 ggagctaacc gcttttttgc acaacatggg ggatcatgta actcgccttg atcgttggga
6781 accggagctg aatgaagcca taccaaacga cgagcgtgac accacgatgc ctgtagcaat
6841 ggcaacaacg ttgcgcaaac tattaactgg cgaactactt actctagctt cccggcaaca
6901 attaatagac tggatggagg cggataaagt tgcaggacca cttctgcgct cggcccttcc
6961 ggctggctgg tttattgctg ataaatctgg agccggtgag cgtgggtctc gcggtatcat
7021 tgcagcactg gggccagatg gtaagccctc ccgtatcgta gttatctaca cgacggggag
7081 tcaggcaact atggatgaac gaaatagaca gatcgctgag ataggtgcct cactgattaa
7141 gcattggtaa ctgtcagacc aagtttactc atatatactt tagattgatt taaaacttca
7201 tttttaattt aaaaggatct aggtgaagat cctttttgat aatctcatga ccaaaatccc
7261 ttaacgtgag ttttcgttcc actgagcgtc agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc
7321 ttgagatcct ttttttctgc gcgtaatctg ctgcttgcaa acaaaaaaac caccgctacc
7381 agcggtggtt tgtttgccgg atcaagagct accaactctt tttccgaagg taactggctt
7441 cagcagagcg cagataccaa atactgttct tctagtgtag ccgtagttag gccaccactt
7501 caagaactct gtagcaccgc ctacatacct cgctctgcta atcctgttac cagtggctgc
7561 tgccagtggc gataagtcgt gtcttaccgg gttggactca agacgatagt taccggataa
7621 ggcgcagcgg tcgggctgaa cggggggttc gtgcacacag cccagcttgg agcgaacgac
7681 ctacaccgaa ctgagatacc tacagcgtga gctatgagaa agcgccacgc ttcccgaagg
7741 gagaaaggcg gacaggtatc cggtaagcgg cagggtcgga acaggagagc gcacgaggga
7801 gcttccaggg ggaaacgcct ggtatcttta tagtcctgtc gggtttcgcc acctctgact
7861 tgagcgtcga tttttgtgat gctcgtcagg ggggcggagc ctatggaaaa acgccagcaa
7921 cgcggccttt ttacggttcc tggccttttg ctggcctttt gctcacatgt tctttcctgc
7981 gttatcccct gattctgtgg ataaccgtat taccgccttt gagtgagctg ataccgctcg
8041 ccgcagccga acgaccgagc gcagcgagtc agtgagcgag gaagcggaag agcgcccaat
8101 acgcaaaccg cctctccccg cgcgttggcc gattcattaa tg
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4257/pCMV-SPORT6-SCAMP3人源基因质粒 |
| P4258/pCMV-SPORT6-CLU人源基因质粒 |
| P4259/pCMV-SPORT6-MED8（14-906bp）人源基因质粒 |
| P4261/pCMV-SPORT6-ZKSCAN7人源基因质粒 |
| P4262/pCMV-SPORT6-CST3人源基因质粒 |
| P4264/pCMV-SPORT6-C1QTNF6人源基因质粒 |
| P4265/pCMV-SPORT6-PYCR2人源基因质粒 |
| P4269/pCMV-SPORT6-TOR3A人源基因质粒 |
| P4272/pCMV-SPORT6-ACKR2人源基因质粒 |
| P4273/pCMV-SPORT6-NKAP（1点突变）人源基因质粒 |
| P4275/pCMV-SPORT6-RTKN人源基因质粒 |
| P4276/pCMV-SPORT6-SLC22A17人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
gene silencing. Cell 1 0 7 , 4 65 - 4 76 . 19. W esley, S. V ., H elliw ell, C. A ., S m ith , N. A ., W an g , M. B ., R o u se, D. T . , L iu , Q ., Gooding, P . S . ,S in gh , S. P . , A b b o tt, D ., S to u tjesd ijk
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pLenti6/V5-p53_R175H人源基因质粒
￥100 - 1000
