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- 上海
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- 2025年07月08日
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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#28027;SQSTM1;A170DMRVFTDALS3
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：HA-p62人源基因质粒
别称: Plasmid#28027;SQSTM1;A170DMRVFTDALS3
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：Zeo
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Zeo
荧光蛋白：
质粒简介
HA-p62是一个人源基因哺乳细胞过表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6414 bp ds-DNA circular SYN 14-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6414
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
polyA_signal 270..391
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
CDS complement(521..895)
/codon_start=1
/gene="Sh ble from Streptoalloteichus hindustanus"
/product="antibiotic-binding protein"
/label=Zeo
/note="confers resistance to bleomycin, phleomycin, and
Zeocin(TM)"
/translation="MAKLTSAVPVLTARDVAGAVEFWTDRLGFSRDFVEDDFAGVVRDD
VTLFISAVQDQVVPDNTLAWVWVRGLDELYAEWSEVVSTNFRDASGPAMTEIGEQPWGR
EFALRDPAGNCVHFVAEEQD"
promoter complement(914..961)
/label=EM7 promoter
/note="synthetic bacterial promoter "
rep_origin 1023..1158
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
rep_origin complement(1352..1780)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
polyA_signal 1826..2050
/label=bGH poly(A) signal
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
CDS complement(2097..2123)
/codon_start=1
/product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
/label=HA
/translation="YPYDVPDYA"
misc_feature complement(2132..3452)
/label=p62
promoter complement(3660..3863)
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
enhancer 3864..4243
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 4509..4613
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
CDS 4614..5474
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 5645..6233
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 agcgcccaat acgcaaaccg cctctccccg cgcgttggcc gattcattaa tgcagctggc
61 acgacaggtt tcccgactgg aaagcgggca gtgagcgcaa cgcaattaat gtgagttagc
121 tcactcatta ggcaccccag gctttacact ttatgcttcc ggctcgtatg ttgtgtggaa
181 ttgtgagcgg ataacaattt cacacaggaa acagctatga ccatgattac gccaagctct
241 agctagaggt cgacggtata cagacatgat aagatacatt gatgagtttg gacaaaccac
301 aactagaatg cagtgaaaaa aatgctttat ttgtgaaatt tgtgatgcta ttgctttatt
361 tgtaaccatt ataagctgca ataaacaagt tggggtgggc gaagaactcc agcatgagat
421 ccccgcgctg gaggatcatc cagccggcgt cccggaaaac gattccgaag cccaaccttt
481 catagaaggc ggcggtggaa tcgaaatctc gtagcacgtg tcagtcctgc tcctcggcca
541 cgaagtgcac gcagttgccg gccgggtcgc gcagggcgaa ctcccgcccc cacggctgct
601 cgccgatctc ggtcatggcc ggcccggagg cgtcccggaa gttcgtggac acgacctccg
661 accactcggc gtacagctcg tccaggccgc gcacccacac ccaggccagg gtgttgtccg
721 gcaccacctg gtcctggacc gcgctgatga acagggtcac gtcgtcccgg accacaccgg
781 cgaagtcgtc ctccacgaag tcccgggaga acccgagccg gtcggtccag aactcgaccg
841 ctccggcgac gtcgcgcgcg gtgagcaccg gaacggcact ggtcaacttg gccatggttt
901 agttcctcac cttgtcgtat tatactatgc cgatatacta tgccgatgat taattgtcaa
961 cacgtgctga tcagatccga aaatggatat acaagctccc gggagctttt tgcaaaagcc
1021 taggcctcca aaaaagcctc ctcactactt ctggaatagc tcagaggcag aggcggcctc
1081 ggcctctgca taaataaaaa aaattagtca gccatggggc ggagaatggg cggaactggg
1141 cggagttagg ggcgggatgg gcggagttag gggcgggact atggttgctg actaattgag
1201 atgcatgctt tgcatacttc tgcctgctgg ggagcctggg gactttccac acctggttgc
1261 tgactaattg agatgcatgc tttgcatact tctgcctgct ggggagcctg gggactttcc
1321 acaccctaac tgacacacat tccacagaat taattcgcgt taaatttttg ttaaatcagc
1381 tcatttttta accaataggc cgaaatcggc aaaatccctt ataaatcaaa agaatagacc
1441 gagatagggt tgagtgttgt tccagtttgg aacaagagtc cactattaaa gaacgtggac
1501 tccaacgtca aagggcgaaa aaccgtctat cagggcgatg gcccactacg tgaaccatca
1561 ccctaatcaa gttttttggg gtcgaggtgc cgtaaagcac taaatcggaa ccctaaaggg
1621 agcccccgat ttagagcttg acggggaaag ccggcgaacg tggcgagaaa ggaagggaag
1681 aaagcgaaag gagcgggcgc tagggcgctg gcaagtgtag cggtcacgct gcgcgtaacc
1741 accacacccg ccgcgcttaa tgcgccgcta cagggcgcgt ggggataccc cctagagccc
1801 cagctggttc tttccgcctc agaagccata gagcccaccg catccccagc atgcctgcta
1861 ttgtcttccc aatcctcccc cttgctgtcc tgccccaccc caccccccag aatagaatga
1921 cacctactca gacaatgcga tgcaatttcc tcattttatt aggaaaggac agtgggagtg
1981 gcaccttcca gggtcaagga aggcacgggg gaggggcaaa caacagatgg ctggcaacta
2041 gaaggcacag tcgaggctga tcagcgggtt taaacgggcc ctctagactc gagtcaagcg
2101 taatctggaa catcgtatgg gtagcggccg cgcaacggcg ggggatgctt tgaatactgg
2161 atggtgtcca gagccgctcc gatgtcatag ttcttggtct gcaggagcct ggtgagccag
2221 ccgccttcat cagagaagcc catggacagc atctgggaga gggactcaat cagccgcggg
2281 tcagcctctg gcgggagatg tgggtacaag gcagcttcct tcagccctgt gggtccctcc
2341 tgggaggggt ccagagagct tggcccttcg gattctggca tctgtaggga ctggagttca
2401 cctgtagacg ggtccacttc ttttgaagac agatgggtcc agtcatcatc tcctcctgaa
2461 cagttatccg actccatctg ttcctcaggg cgcccctcgg actccaaggc gatctttctc
2521 atctgctccg ccagagactg cgtggcgccc tcaacattcc cacccggctt gctgggatca
2581 gagcagcagc tgcttggctg tgagctgctc ttctcctctg tgctggaact ctctggagag
2641 acgggggtca ggcggcttct tttccctccg tgctccacat cgatatcaac ttcaatgccc
2701 agagggctaa gggcagctgc cacactctcc ccaacgttct tcaggaaatt cacactcgga
2761 tcctccgatg gaccagaagc tgattctgcc gtggggccag ggcgggcctc ccctgcacga
2821 ggaggacgtg ggctccagtt tcctggtgga cccatttccc atcctggcca cccgaagtgt
2881 ccgtgtttca ccttccggag ccagcggctg tgcgagaagc cctcagacag gtgcccgaag
2941 gggctgggga atgcgagctt ggtgtgcccc cggtgcaagc cctttccctc gcagacgcta
3001 cacaagtcgt agtctgggca gacgctgcac ttgtagcggg ttcctaccac aggcccattg
3061 cagccatcgc agatcacatt ggggtgcacc atgttgcggg gcgcctcctg agcacacggt
3121 gggcggtggt cccgccggca ctcttttttc tctttaatgt agattcggaa gatgtcatcc
3181 ttcacgtagg acatggccat tgtcaattcc tcgtcactgg aaaaggcaac caagtccccg
3241 tcctcatcgc ggtagtgcgc ctggaagccg ccaggccgca gcgcggggaa cagggcggcc
3301 acccggctca gcagccgctc gcagggtccc ggacccgccg cagcctcggc ttccgcctca
3361 ggctcggggc tgcagcagaa gctgaagcgg cgaatctcgc gcgccgcgtc ctccttgccc
3421 agaaggtagg ccttcacggt gagcgacgcc atagaattcc accacactgg actagtggat
3481 ccgagctcgg taccaagctt aagtttaaac gctagagtcc ggaggctgga tcggtcccgg
3541 tgtcttctat ggaggtcaaa acagcgtgga tggcgtctcc aggcgatctg acggttcact
3601 aaacgagctc gtcgacgatc tctatcactg atagggagat ctctatcact gatagggaga
3661 gctctgctta tatagacctc ccaccgtaca cgcctaccgc ccatttgcgt caatggggcg
3721 gagttgttac gacattttgg aaagtcccgt tgattttggt gccaaaacaa actcccattg
3781 acgtcaatgg ggtggagact tggaaatccc cgtgagtcaa accgctatcc acgcccattg
3841 atgtactgcc aaaaccgcat caccatggta atagcgatga ctaatacgta gatgtactgc
3901 caagtaggaa agtcccataa ggtcatgtac tgggcataat gccaggcggg ccatttaccg
3961 tcattgacgt caataggggg cgtacttggc atatgataca cttgatgtac tgccaagtgg
4021 gcagtttacc gtaaatactc cacccattga cgtcaatgga aagtccctat tggcgttact
4081 atgggaacat acgtcattat tgacgtcaat gggcgggggt cgttgggcgg tcagccaggc
4141 gggccattta ccgtaagtta tgtaacgcgg aactccatat atgggctatg aactaatgac
4201 cccgtaattg attactatta ataactagtc aataatcaat gtcaacgcgt atatctggcc
4261 cgtacatcgc gaagcagcgc aaaacgccta accctaagca gattcttcat gcaattgtcg
4321 gtcaagcctt gccttgttgt agcttaaatt ttgctcgcgc actactcagc gacctccaac
4381 acacaagcag ggagcagata ctggcttaac tatgcggcat cagagcagat tgtactgaga
4441 gtgcaccata ggggatcggg agatctcccg atccgtcgac gtcaggtggc acttttcggg
4501 gaaatgtgcg cggaacccct atttgtttat ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc
4561 tcatgagaca ataaccctga taaatgcttc aataatattg aaaaaggaag agtatgagta
4621 ttcaacattt ccgtgtcgcc cttattccct tttttgcggc attttgcctt cctgtttttg
4681 ctcacccaga aacgctggtg aaagtaaaag atgctgaaga tcagttgggt gcacgagtgg
4741 gttacatcga actggatctc aacagcggta agatccttga gagttttcgc cccgaagaac
4801 gttttccaat gatgagcact tttaaagttc tgctatgtgg cgcggtatta tcccgtattg
4861 acgccgggca agagcaactc ggtcgccgca tacactattc tcagaatgac ttggttgagt
4921 actcaccagt cacagaaaag catcttacgg atggcatgac agtaagagaa ttatgcagtg
4981 ctgccataac catgagtgat aacactgcgg ccaacttact tctgacaacg atcggaggac
5041 cgaaggagct aaccgctttt ttgcacaaca tgggggatca tgtaactcgc cttgatcgtt
5101 gggaaccgga gctgaatgaa gccataccaa acgacgagcg tgacaccacg atgcctgtag
5161 caatggcaac aacgttgcgc aaactattaa ctggcgaact acttactcta gcttcccggc
5221 aacaattaat agactggatg gaggcggata aagttgcagg accacttctg cgctcggccc
5281 ttccggctgg ctggtttatt gctgataaat ctggagccgg tgagcgtggg tctcgcggta
5341 tcattgcagc actggggcca gatggtaagc cctcccgtat cgtagttatc tacacgacgg
5401 ggagtcaggc aactatggat gaacgaaata gacagatcgc tgagataggt gcctcactga
5461 ttaagcattg gtaactgtca gaccaagttt actcatatat actttagatt gatttaaaac
5521 ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa
5581 tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat
5641 cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc
5701 taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac tctttttccg aaggtaactg
5761 gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg ttcttctagt gtagccgtag ttaggccacc
5821 acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg
5881 ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg
5941 ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa
6001 cgacctacac cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg
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6181 gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca
6241 gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc
6301 ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga gctgataccg
6361 ctcgccgcag ccgaacgacc gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg gaag
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：HA-p62人源基因质粒
别称: Plasmid#28027;SQSTM1;A170DMRVFTDALS3
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：Zeo
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Zeo
荧光蛋白：
质粒简介
HA-p62是一个人源基因哺乳细胞过表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6414 bp ds-DNA circular SYN 14-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6414
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
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CDS complement(2097..2123)
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/product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
/label=HA
/translation="YPYDVPDYA"
misc_feature complement(2132..3452)
/label=p62
promoter complement(3660..3863)
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
enhancer 3864..4243
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 4509..4613
/gene="bla"
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CDS 4614..5474
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
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related antibiotics"
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LIKHW"
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replication"
ORIGIN
1 agcgcccaat acgcaaaccg cctctccccg cgcgttggcc gattcattaa tgcagctggc
61 acgacaggtt tcccgactgg aaagcgggca gtgagcgcaa cgcaattaat gtgagttagc
121 tcactcatta ggcaccccag gctttacact ttatgcttcc ggctcgtatg ttgtgtggaa
181 ttgtgagcgg ataacaattt cacacaggaa acagctatga ccatgattac gccaagctct
241 agctagaggt cgacggtata cagacatgat aagatacatt gatgagtttg gacaaaccac
301 aactagaatg cagtgaaaaa aatgctttat ttgtgaaatt tgtgatgcta ttgctttatt
361 tgtaaccatt ataagctgca ataaacaagt tggggtgggc gaagaactcc agcatgagat
421 ccccgcgctg gaggatcatc cagccggcgt cccggaaaac gattccgaag cccaaccttt
481 catagaaggc ggcggtggaa tcgaaatctc gtagcacgtg tcagtcctgc tcctcggcca
541 cgaagtgcac gcagttgccg gccgggtcgc gcagggcgaa ctcccgcccc cacggctgct
601 cgccgatctc ggtcatggcc ggcccggagg cgtcccggaa gttcgtggac acgacctccg
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721 gcaccacctg gtcctggacc gcgctgatga acagggtcac gtcgtcccgg accacaccgg
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1201 atgcatgctt tgcatacttc tgcctgctgg ggagcctggg gactttccac acctggttgc
1261 tgactaattg agatgcatgc tttgcatact tctgcctgct ggggagcctg gggactttcc
1321 acaccctaac tgacacacat tccacagaat taattcgcgt taaatttttg ttaaatcagc
1381 tcatttttta accaataggc cgaaatcggc aaaatccctt ataaatcaaa agaatagacc
1441 gagatagggt tgagtgttgt tccagtttgg aacaagagtc cactattaaa gaacgtggac
1501 tccaacgtca aagggcgaaa aaccgtctat cagggcgatg gcccactacg tgaaccatca
1561 ccctaatcaa gttttttggg gtcgaggtgc cgtaaagcac taaatcggaa ccctaaaggg
1621 agcccccgat ttagagcttg acggggaaag ccggcgaacg tggcgagaaa ggaagggaag
1681 aaagcgaaag gagcgggcgc tagggcgctg gcaagtgtag cggtcacgct gcgcgtaacc
1741 accacacccg ccgcgcttaa tgcgccgcta cagggcgcgt ggggataccc cctagagccc
1801 cagctggttc tttccgcctc agaagccata gagcccaccg catccccagc atgcctgcta
1861 ttgtcttccc aatcctcccc cttgctgtcc tgccccaccc caccccccag aatagaatga
1921 cacctactca gacaatgcga tgcaatttcc tcattttatt aggaaaggac agtgggagtg
1981 gcaccttcca gggtcaagga aggcacgggg gaggggcaaa caacagatgg ctggcaacta
2041 gaaggcacag tcgaggctga tcagcgggtt taaacgggcc ctctagactc gagtcaagcg
2101 taatctggaa catcgtatgg gtagcggccg cgcaacggcg ggggatgctt tgaatactgg
2161 atggtgtcca gagccgctcc gatgtcatag ttcttggtct gcaggagcct ggtgagccag
2221 ccgccttcat cagagaagcc catggacagc atctgggaga gggactcaat cagccgcggg
2281 tcagcctctg gcgggagatg tgggtacaag gcagcttcct tcagccctgt gggtccctcc
2341 tgggaggggt ccagagagct tggcccttcg gattctggca tctgtaggga ctggagttca
2401 cctgtagacg ggtccacttc ttttgaagac agatgggtcc agtcatcatc tcctcctgaa
2461 cagttatccg actccatctg ttcctcaggg cgcccctcgg actccaaggc gatctttctc
2521 atctgctccg ccagagactg cgtggcgccc tcaacattcc cacccggctt gctgggatca
2581 gagcagcagc tgcttggctg tgagctgctc ttctcctctg tgctggaact ctctggagag
2641 acgggggtca ggcggcttct tttccctccg tgctccacat cgatatcaac ttcaatgccc
2701 agagggctaa gggcagctgc cacactctcc ccaacgttct tcaggaaatt cacactcgga
2761 tcctccgatg gaccagaagc tgattctgcc gtggggccag ggcgggcctc ccctgcacga
2821 ggaggacgtg ggctccagtt tcctggtgga cccatttccc atcctggcca cccgaagtgt
2881 ccgtgtttca ccttccggag ccagcggctg tgcgagaagc cctcagacag gtgcccgaag
2941 gggctgggga atgcgagctt ggtgtgcccc cggtgcaagc cctttccctc gcagacgcta
3001 cacaagtcgt agtctgggca gacgctgcac ttgtagcggg ttcctaccac aggcccattg
3061 cagccatcgc agatcacatt ggggtgcacc atgttgcggg gcgcctcctg agcacacggt
3121 gggcggtggt cccgccggca ctcttttttc tctttaatgt agattcggaa gatgtcatcc
3181 ttcacgtagg acatggccat tgtcaattcc tcgtcactgg aaaaggcaac caagtccccg
3241 tcctcatcgc ggtagtgcgc ctggaagccg ccaggccgca gcgcggggaa cagggcggcc
3301 acccggctca gcagccgctc gcagggtccc ggacccgccg cagcctcggc ttccgcctca
3361 ggctcggggc tgcagcagaa gctgaagcgg cgaatctcgc gcgccgcgtc ctccttgccc
3421 agaaggtagg ccttcacggt gagcgacgcc atagaattcc accacactgg actagtggat
3481 ccgagctcgg taccaagctt aagtttaaac gctagagtcc ggaggctgga tcggtcccgg
3541 tgtcttctat ggaggtcaaa acagcgtgga tggcgtctcc aggcgatctg acggttcact
3601 aaacgagctc gtcgacgatc tctatcactg atagggagat ctctatcact gatagggaga
3661 gctctgctta tatagacctc ccaccgtaca cgcctaccgc ccatttgcgt caatggggcg
3721 gagttgttac gacattttgg aaagtcccgt tgattttggt gccaaaacaa actcccattg
3781 acgtcaatgg ggtggagact tggaaatccc cgtgagtcaa accgctatcc acgcccattg
3841 atgtactgcc aaaaccgcat caccatggta atagcgatga ctaatacgta gatgtactgc
3901 caagtaggaa agtcccataa ggtcatgtac tgggcataat gccaggcggg ccatttaccg
3961 tcattgacgt caataggggg cgtacttggc atatgataca cttgatgtac tgccaagtgg
4021 gcagtttacc gtaaatactc cacccattga cgtcaatgga aagtccctat tggcgttact
4081 atgggaacat acgtcattat tgacgtcaat gggcgggggt cgttgggcgg tcagccaggc
4141 gggccattta ccgtaagtta tgtaacgcgg aactccatat atgggctatg aactaatgac
4201 cccgtaattg attactatta ataactagtc aataatcaat gtcaacgcgt atatctggcc
4261 cgtacatcgc gaagcagcgc aaaacgccta accctaagca gattcttcat gcaattgtcg
4321 gtcaagcctt gccttgttgt agcttaaatt ttgctcgcgc actactcagc gacctccaac
4381 acacaagcag ggagcagata ctggcttaac tatgcggcat cagagcagat tgtactgaga
4441 gtgcaccata ggggatcggg agatctcccg atccgtcgac gtcaggtggc acttttcggg
4501 gaaatgtgcg cggaacccct atttgtttat ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc
4561 tcatgagaca ataaccctga taaatgcttc aataatattg aaaaaggaag agtatgagta
4621 ttcaacattt ccgtgtcgcc cttattccct tttttgcggc attttgcctt cctgtttttg
4681 ctcacccaga aacgctggtg aaagtaaaag atgctgaaga tcagttgggt gcacgagtgg
4741 gttacatcga actggatctc aacagcggta agatccttga gagttttcgc cccgaagaac
4801 gttttccaat gatgagcact tttaaagttc tgctatgtgg cgcggtatta tcccgtattg
4861 acgccgggca agagcaactc ggtcgccgca tacactattc tcagaatgac ttggttgagt
4921 actcaccagt cacagaaaag catcttacgg atggcatgac agtaagagaa ttatgcagtg
4981 ctgccataac catgagtgat aacactgcgg ccaacttact tctgacaacg atcggaggac
5041 cgaaggagct aaccgctttt ttgcacaaca tgggggatca tgtaactcgc cttgatcgtt
5101 gggaaccgga gctgaatgaa gccataccaa acgacgagcg tgacaccacg atgcctgtag
5161 caatggcaac aacgttgcgc aaactattaa ctggcgaact acttactcta gcttcccggc
5221 aacaattaat agactggatg gaggcggata aagttgcagg accacttctg cgctcggccc
5281 ttccggctgg ctggtttatt gctgataaat ctggagccgg tgagcgtggg tctcgcggta
5341 tcattgcagc actggggcca gatggtaagc cctcccgtat cgtagttatc tacacgacgg
5401 ggagtcaggc aactatggat gaacgaaata gacagatcgc tgagataggt gcctcactga
5461 ttaagcattg gtaactgtca gaccaagttt actcatatat actttagatt gatttaaaac
5521 ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa
5581 tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat
5641 cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc
5701 taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac tctttttccg aaggtaactg
5761 gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg ttcttctagt gtagccgtag ttaggccacc
5821 acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg
5881 ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg
5941 ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa
6001 cgacctacac cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg
6061 aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga
6121 gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct
6181 gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca
6241 gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc
6301 ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga gctgataccg
6361 ctcgccgcag ccgaacgacc gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg gaag
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4343/pECMV-3×FLAG-SLC43A1人源基因质粒 |
| P4344/pECMV-3×FLAG-GPM6A人源基因质粒 |
| P4345/pECMV-3×FLAG-STAT5A（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4346/pECMV-3×FLAG-LGALS3BP人源基因质粒 |
| P4347/pECMV-3×FLAG-CPT1A人源基因质粒 |
| P4348/pECMV-3×FLAG-CDH16（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4349/pECMV-3×FLAG-CDK5人源基因质粒 |
| P4350/pECMV-3×FLAG-CLPB人源基因质粒 |
| P4351/pECMV-3×FLAG-DECR2人源基因质粒 |
| P4352/pECMV-3×FLAG-DHRS1人源基因质粒 |
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