pECMV-3×FLAG-FBXW7人源基因质粒

基本信息
名称：pECMV-3×FLAG-FBXW7人源基因质粒
别称: NM_001013415.1;AGO;CDC4;FBW6;FBW7;hA
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：

质粒简介
 pECMV-3×FLAG-FBXW7(NM_001013415.1)是一个人源基因哺乳细胞过表达质粒，由武汉淼灵生物科技有限公司构建并共享至淼灵质粒平台。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                7243 bp ds-DNA     circular SYN 03-DEC-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..7243
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        235..614
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        615..818
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     promoter        863..881
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     regulatory      913..922
                     /regulatory_class="other"
                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 
                     of translation (Kozak, 1987)"
     CDS             922..987
                     /codon_start=1
                     /product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
                     enterokinase cleavage site"
                     /label=3xFLAG
                     /translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
     CDS             997..2766
                     /codon_start=1
                     /product="Homo sapiens F-box and WD repeat domain 
                     containing 7 (FBXW7), transcript variant 3, mRNA
                     
                     NCBI Reference Sequence: NM_001013415.1"
                     /label=FBXW7
                     /translation="MSKPGKPTLNHGLVPVDLKSAKEPLPHQTVMKIFSISIIAQGLPF
                     CRRRMKRKLDHGSEVRSFSLGKKPCKVSEYTSTTGLVPCSATPTTFGDLRAANGQGQQR
                     RRITSVQPPTGLQEWLKMFQSWSGPEKLLALDELIDSCEPTQVKHMMQVIEPQFQRDFI
                     SLLPKELALYVLSFLEPKDLLQAAQTCRYWRILAEDNLLWREKCKEEGIDEPLHIKRRK
                     VIKPGFIHSPWKSAYIRQHRIDTNWRRGELKSPKVLKGHDDHVITCLQFCGNRIVSGSD
                     DNTLKVWSAVTGKCLRTLVGHTGGVWSSQMRDNIIISGSTDRTLKVWNAETGECIHTLY
                     GHTSTVRCMHLHEKRVVSGSRDATLRVWDIETGQCLHVLMGHVAAVRCVQYDGRRVVSG
                     AYDFMVKVWDPETETCLHTLQGHTNRVYSLQFDGIHVVSGSLDTSIRVWDVETGNCIHT
                     LTGHQSLTSGMELKDNILVSGNADSTVKIWDIKTGQCLQTLQGPNKHQSAVTCLQFNKN
                     FVITSSDDGTVKLWDLKTGEFIRNLVTLESGGSGGVVWRIRASNTKLVCAVGSRNGTEE
                     TKLLVLDFDVDMK"
     polyA_signal    2843..3067
                     /label=bGH poly(A) signal
                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
     rep_origin      3113..3541
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        3555..3884
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      3735..3870
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             3951..4745
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /label=Neo
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    4919..5040
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(5491..6076)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(6247..7107)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(7108..7212)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
       61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
      121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
      181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
      241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
      301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
      361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
      421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
      481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
      541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
      601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
      661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
      721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
      781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
      841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
      901 gtttaaactt aagccaccat ggactacaaa gaccatgacg gtgattataa agatcatgac
      961 atcgactaca aggatgacga tgacaagctt ggtaccatgt caaaaccggg aaaacctact
     1021 ctaaaccatg gcttggttcc tgttgatctt aaaagtgcaa aagagcctct accacatcaa
     1081 actgtgatga agatatttag cattagcatc attgcccaag gcctcccttt ttgtcgaaga
     1141 cggatgaaaa gaaagttgga ccatggttct gaggtccgct ctttttcttt gggaaagaaa
     1201 ccatgcaaag tctcagaata tacaagtacc actgggcttg taccatgttc agcaacacca
     1261 acaacttttg gggacctcag agcagccaat ggccaagggc aacaacgacg ccgaattaca
     1321 tctgtccagc cacctacagg cctccaggaa tggctaaaaa tgtttcagag ctggagtgga
     1381 ccagagaaat tgcttgcttt agatgaactc attgatagtt gtgaaccaac acaagtaaaa
     1441 catatgatgc aagtgataga accccagttt caacgagact tcatttcatt gctccctaaa
     1501 gagttggcac tctatgtgct ttcattcctg gaacccaaag acctgctaca agcagctcag
     1561 acatgtcgct actggagaat tttggctgaa gacaaccttc tctggagaga gaaatgcaaa
     1621 gaagagggga ttgatgaacc attgcacatc aagagaagaa aagtaataaa accaggtttc
     1681 atacacagtc catggaaaag tgcatacatc agacagcaca gaattgatac taactggagg
     1741 cgaggagaac tcaaatctcc taaggtgctg aaaggacatg atgatcatgt gatcacatgc
     1801 ttacagtttt gtggtaaccg aatagttagt ggttctgatg acaacacttt aaaagtttgg
     1861 tcagcagtca caggcaaatg tctgagaaca ttagtgggac atacaggtgg agtatggtca
     1921 tcacaaatga gagacaacat catcattagt ggatctacag atcggacact caaagtgtgg
     1981 aatgcagaga ctggagaatg tatacacacc ttatatgggc atacttccac tgtgcgttgt
     2041 atgcatcttc atgaaaaaag agttgttagc ggttctcgag atgccactct tagggtttgg
     2101 gatattgaga caggccagtg tttacatgtt ttgatgggtc atgttgcagc agtccgctgt
     2161 gttcaatatg atggcaggag ggttgttagt ggagcatatg attttatggt aaaggtgtgg
     2221 gatccagaga ctgaaacctg tctacacacg ttgcaggggc atactaatag agtctattca
     2281 ttacagtttg atggtatcca tgtggtgagt ggatctcttg atacatcaat ccgtgtttgg
     2341 gatgtggaga cagggaattg cattcacacg ttaacagggc accagtcgtt aacaagtgga
     2401 atggaactca aagacaatat tcttgtctct gggaatgcag attctacagt taaaatctgg
     2461 gatatcaaaa caggacagtg tttacaaaca ttgcaaggtc ccaacaagca tcagagtgct
     2521 gtgacctgtt tacagttcaa caagaacttt gtaattacca gctcagatga tggaactgta
     2581 aaactatggg acttgaaaac gggtgaattt attcgaaacc tagtcacatt ggagagtggg
     2641 gggagtgggg gagttgtgtg gcggatcaga gcctcaaaca caaagctggt gtgtgcagtt
     2701 gggagtcgga atgggactga agaaaccaag ctgctggtgc tggactttga tgtggacatg
     2761 aagtgagaat tctgcagata tccagcacag tggcggccgc tcgagtctag agggcccgtt
     2821 taaacccgct gatcagcctc gactgtgcct tctagttgcc agccatctgt tgtttgcccc
     2881 tcccccgtgc cttccttgac cctggaaggt gccactccca ctgtcctttc ctaataaaat
     2941 gaggaaattg catcgcattg tctgagtagg tgtcattcta ttctgggggg tggggtgggg
     3001 caggacagca agggggagga ttgggaagac aatagcaggc atgctgggga tgcggtgggc
     3061 tctatggctt ctgaggcgga aagaaccagc tggggctcta gggggtatcc ccacgcgccc
     3121 tgtagcggcg cattaagcgc ggcgggtgtg gtggttacgc gcagcgtgac cgctacactt
     3181 gccagcgccc tagcgcccgc tcctttcgct ttcttccctt cctttctcgc cacgttcgcc
     3241 ggctttcccc gtcaagctct aaatcggggg ctccctttag ggttccgatt tagtgcttta
     3301 cggcacctcg accccaaaaa acttgattag ggtgatggtt cacgtagtgg gccatcgccc
     3361 tgatagacgg tttttcgccc tttgacgttg gagtccacgt tctttaatag tggactcttg
     3421 ttccaaactg gaacaacact caaccctatc tcggtctatt cttttgattt ataagggatt
     3481 ttgccgattt cggcctattg gttaaaaaat gagctgattt aacaaaaatt taacgcgaat
     3541 taattctgtg gaatgtgtgt cagttagggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca
     3601 gaagtatgca aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccag gtgtggaaag tccccaggct
     3661 ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc atagtcccgc
     3721 ccctaactcc gcccatcccg cccctaactc cgcccagttc cgcccattct ccgccccatg
     3781 gctgactaat tttttttatt tatgcagagg ccgaggccgc ctctgcctct gagctattcc
     3841 agaagtagtg aggaggcttt tttggaggcc taggcttttg caaaaagctc ccgggagctt
     3901 gtatatccat tttcggatct gatcaagaga caggatgagg atcgtttcgc atgattgaac
     3961 aagatggatt gcacgcaggt tctccggccg cttgggtgga gaggctattc ggctatgact
     4021 gggcacaaca gacaatcggc tgctctgatg ccgccgtgtt ccggctgtca gcgcaggggc
     4081 gcccggttct ttttgtcaag accgacctgt ccggtgccct gaatgaactg caggacgagg
     4141 cagcgcggct atcgtggctg gccacgacgg gcgttccttg cgcagctgtg ctcgacgttg
     4201 tcactgaagc gggaagggac tggctgctat tgggcgaagt gccggggcag gatctcctgt
     4261 catctcacct tgctcctgcc gagaaagtat ccatcatggc tgatgcaatg cggcggctgc
     4321 atacgcttga tccggctacc tgcccattcg accaccaagc gaaacatcgc atcgagcgag
     4381 cacgtactcg gatggaagcc ggtcttgtcg atcaggatga tctggacgaa gagcatcagg
     4441 ggctcgcgcc agccgaactg ttcgccaggc tcaaggcgcg catgcccgac ggcgaggatc
     4501 tcgtcgtgac ccatggcgat gcctgcttgc cgaatatcat ggtggaaaat ggccgctttt
     4561 ctggattcat cgactgtggc cggctgggtg tggcggaccg ctatcaggac atagcgttgg
     4621 ctacccgtga tattgctgaa gagcttggcg gcgaatgggc tgaccgcttc ctcgtgcttt
     4681 acggtatcgc cgctcccgat tcgcagcgca tcgccttcta tcgccttctt gacgagttct
     4741 tctgagcggg actctggggt tcgaaatgac cgaccaagcg acgcccaacc tgccatcacg
     4801 agatttcgat tccaccgccg ccttctatga aaggttgggc ttcggaatcg ttttccggga
     4861 cgccggctgg atgatcctcc agcgcgggga tctcatgctg gagttcttcg cccaccccaa
     4921 cttgtttatt gcagcttata atggttacaa ataaagcaat agcatcacaa atttcacaaa
     4981 taaagcattt ttttcactgc attctagttg tggtttgtcc aaactcatca atgtatctta
     5041 tcatgtctgt ataccgtcga cctctagcta gagcttggcg taatcatggt catagctgtt
     5101 tcctgtgtga aattgttatc cgctcacaat tccacacaac atacgagccg gaagcataaa
     5161 gtgtaaagcc tggggtgcct aatgagtgag ctaactcaca ttaattgcgt tgcgctcact
     5221 gcccgctttc cagtcgggaa acctgtcgtg ccagctgcat taatgaatcg gccaacgcgc
     5281 ggggagaggc ggtttgcgta ttgggcgctc ttccgcttcc tcgctcactg actcgctgcg
     5341 ctcggtcgtt cggctgcggc gagcggtatc agctcactca aaggcggtaa tacggttatc
     5401 cacagaatca ggggataacg caggaaagaa catgtgagca aaaggccagc aaaaggccag
     5461 gaaccgtaaa aaggccgcgt tgctggcgtt tttccatagg ctccgccccc ctgacgagca
     5521 tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat aaagatacca
     5581 ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc cgcttaccgg
     5641 atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct cacgctgtag
     5701 gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg aaccccccgt
     5761 tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt gagtccaacc cggtaagaca
     5821 cgacttatcg ccactggcag cagccactgg taacaggatt agcagagcga ggtatgtagg
     5881 cggtgctaca gagttcttga agtggtggcc taactacggc tacactagaa gaacagtatt
     5941 tggtatctgc gctctgctga agccagttac cttcggaaaa agagttggta gctcttgatc
     6001 cggcaaacaa accaccgctg gtagcggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag
     6061 aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa
     6121 cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat
     6181 ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc
     6241 tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc
     6301 atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg gcttaccatc
     6361 tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca ccggctccag atttatcagc
     6421 aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc
     6481 catccagtct attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt
     6541 gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc
     6601 ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa
     6661 aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt
     6721 atcactcatg gttatggcag cactgcataa ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg
     6781 cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc
     6841 gagttgctct tgcccggcgt caatacggga taataccgcg ccacatagca gaactttaaa
     6901 agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt
     6961 gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat cttttacttt
     7021 caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag
     7081 ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt caatattatt gaagcattta
     7141 tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat
     7201 aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgac gtc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4124/pECMV-3×FLAG-SCAMP5人源基因质粒

P4125/pECMV-3×FLAG-SCAMP4人源基因质粒

P4126/pECMV-3×FLAG-SLC26A1人源基因质粒

P4127/pECMV-3×FLAG-SOD2人源基因质粒

P4128/pECMV-3×FLAG-STX5人源基因质粒

P4129/pECMV-3×FLAG-FAM3A人源基因质粒

P4130/pECMV-3×FLAG-GLIPR1L1人源基因质粒

P4131/pECMV-3×FLAG-DDIT4人源基因质粒

P4132/pECMV-3×FLAG-ABHD4人源基因质粒

P4133/pECMV-3×FLAG-CD69人源基因质粒