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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20
- 保质期:
2年
- 英文名:
Plasmid#28047;RAB7;PRO2706
- 库存:
100
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格:
干粉/液体
名称:EGFP-Rab7A人源基因质粒
别称: Plasmid#28047;RAB7;PRO2706
启动子:CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记:G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主:哺乳细胞
载体用途:蛋白表达
基因种属:人
基因类型:ORF
原核抗性:Amp
真核抗性:Neo/G418
荧光蛋白:绿色
质粒简介:详询
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6780 bp ds-DNA circular SYN 27-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6780)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 27, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6780
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
polyA_signal 270..391
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
CDS complement(565..1359)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=Neo
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
promoter complement(1426..1755)
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 1440..1575
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
rep_origin complement(1769..2197)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
polyA_signal 2243..2467
/label=bGH poly(A) signal
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
promoter 2493..2511
/label=SP6 promoter
/note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
misc_feature complement(2546..3163)
/label=Rab7A
CDS complement(3170..3196)
/codon_start=1
/product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
/label=HA
/translation="YPYDVPDYA"
CDS complement(3197..3223)
/codon_start=1
/product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
/label=HA
/translation="YPYDVPDYA"
CDS complement(3233..3949)
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/label=EGFP
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
promoter complement(3963..3981)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
promoter complement(4026..4229)
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
enhancer 4230..4609
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 4875..4979
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
CDS 4980..5840
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 6011..6599
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 agcgcccaat acgcaaaccg cctctccccg cgcgttggcc gattcattaa tgcagctggc
61 acgacaggtt tcccgactgg aaagcgggca gtgagcgcaa cgcaattaat gtgagttagc
121 tcactcatta ggcaccccag gctttacact ttatgcttcc ggctcgtatg ttgtgtggaa
181 ttgtgagcgg ataacaattt cacacaggaa acagctatga ccatgattac gccaagctct
241 agctagaggt cgacggtata cagacatgat aagatacatt gatgagtttg gacaaaccac
301 aactagaatg cagtgaaaaa aatgctttat ttgtgaaatt tgtgatgcta ttgctttatt
361 tgtaaccatt ataagctgca ataaacaagt tggggtgggc gaagaactcc agcatgagat
421 ccccgcgctg gaggatcatc cagccggcgt cccggaaaac gattccgaag cccaaccttt
481 catagaaggc ggcggtggaa tcgaaatctc gtgatggcag gttgggcgtc gcttggtcgg
541 tcatttcgaa ccccagagtc ccgctcagaa gaactcgtca agaaggcgat agaaggcgat
601 gcgctgcgaa tcgggagcgg cgataccgta aagcacgagg aagcggtcag cccattcgcc
661 gccaagctct tcagcaatat cacgggtagc caacgctatg tcctgatagc ggtccgccac
721 acccagccgg ccacagtcga tgaatccaga aaagcggcca ttttccacca tgatattcgg
781 caagcaggca tcgccatggg tcacgacgag atcctcgccg tcgggcatgc gcgccttgag
841 cctggcgaac agttcggctg gcgcgagccc ctgatgctct tcgtccagat catcctgatc
901 gacaagaccg gcttccatcc gagtacgtgc tcgctcgatg cgatgtttcg cttggtggtc
961 gaatgggcag gtagccggat caagcgtatg cagccgccgc attgcatcag ccatgatgga
1021 tactttctcg gcaggagcaa ggtgagatga caggagatcc tgccccggca cttcgcccaa
1081 tagcagccag tcccttcccg cttcagtgac aacgtcgagc acagctgcgc aaggaacgcc
1141 cgtcgtggcc agccacgata gccgcgctgc ctcgtcctgc agttcattca gggcaccgga
1201 caggtcggtc ttgacaaaaa gaaccgggcg cccctgcgct gacagccgga acacggcggc
1261 atcagagcag ccgattgtct gttgtgccca gtcatagccg aatagcctct ccacccaagc
1321 ggccggagaa cctgcgtgca atccatcttg ttcaatcatg cgaaacgatc ctcatcctgt
1381 ctcttgatca gatccgaaaa tggatataca agctcccggg agctttttgc aaaagcctag
1441 gcctccaaaa aagcctcctc actacttctg gaatagctca gaggcagagg cggcctcggc
1501 ctctgcataa ataaaaaaaa ttagtcagcc atggggcgga gaatgggcgg aactgggcgg
1561 agttaggggc gggatgggcg gagttagggg cgggactatg gttgctgact aattgagatg
1621 catgctttgc atacttctgc ctgctgggga gcctggggac tttccacacc tggttgctga
1681 ctaattgaga tgcatgcttt gcatacttct gcctgctggg gagcctgggg actttccaca
1741 ccctaactga cacacattcc acagaattaa ttcgcgttaa atttttgtta aatcagctca
1801 ttttttaacc aataggccga aatcggcaaa atcccttata aatcaaaaga atagaccgag
1861 atagggttga gtgttgttcc agtttggaac aagagtccac tattaaagaa cgtggactcc
1921 aacgtcaaag ggcgaaaaac cgtctatcag ggcgatggcc cactacgtga accatcaccc
1981 taatcaagtt ttttggggtc gaggtgccgt aaagcactaa atcggaaccc taaagggagc
2041 ccccgattta gagcttgacg gggaaagccg gcgaacgtgg cgagaaagga agggaagaaa
2101 gcgaaaggag cgggcgctag ggcgctggca agtgtagcgg tcacgctgcg cgtaaccacc
2161 acacccgccg cgcttaatgc gccgctacag ggcgcgtggg gataccccct agagccccag
2221 ctggttcttt ccgcctcaga agccatagag cccaccgcat ccccagcatg cctgctattg
2281 tcttcccaat cctccccctt gctgtcctgc cccaccccac cccccagaat agaatgacac
2341 ctactcagac aatgcgatgc aatttcctca ttttattagg aaaggacagt gggagtggca
2401 ccttccaggg tcaaggaagg cacgggggag gggcaaacaa cagatggctg gcaactagaa
2461 ggcacagtcg aggctgatca gcgagctcta gcatttaggt gacactatag aatagggccc
2521 tctagatgca tgctcgagcg gccgcttagc aactgcagct ttctgccgag gccttggccc
2581 ggtcattctt gtccagtttg ataggttcag gaaattcgtt gtacagctcc acctccgttt
2641 cctgcttaag tgcattccgt gcaatcgtct ggaacgcctg ctccacgttg atggcctcct
2701 tggcactggt ctcaaagtag ggaatgttgt ttttgctgta gcaccaggcc tgtgcccgct
2761 ttgtggccac ttgtctgttt tcgaggtcaa tcttgtttcc caacacaaca aatgggaagt
2821 tttcaggatc tcggggactg gcctggatga gaaactcatc tctccagcta tctagggttt
2881 tgaatgtgtt gggggcagtc acatcaaata ccagaacgca gcagtctgca cctctgtaga
2941 aggccacacc gagagactgg aaccgttcct gtcctgctgt gtcccatatc tgcattgtga
3001 ctagcctgtc atccaccatc acctccttgg tcagaaagtc agctcctatt gtggctttgt
3061 actgattgct gaatttctta ttcacatact ggttcatgag tgatgtcttc ccgactccag
3121 aatctcccag gatgataacc ttcagcaaca ctttcttcct agaggtacca gcgtaatccg
3181 gaacatcgta tgggtaagcg taatccggaa catcgtatgg gtacatggat cccttgtaca
3241 gctcgtccat gccgagagtg atcccggcgg cggtcacgaa ctccagcagg accatgtgat
3301 cgcgcttctc gttggggtct ttgctcaggg cggactgggt gctcaggtag tggttgtcgg
3361 gcagcagcac ggggccgtcg ccgatggggg tgttctgctg gtagtggtcg gcgagctgca
3421 cgctgccgtc ctcgatgttg tggcggatct tgaagttcac cttgatgccg ttcttctgct
3481 tgtcggccat gatatagacg ttgtggctgt tgtagttgta ctccagcttg tgccccagga
3541 tgttgccgtc ctccttgaag tcgatgccct tcagctcgat gcggttcacc agggtgtcgc
3601 cctcgaactt cacctcggcg cgggtcttgt agttgccgtc gtccttgaag aagatggtgc
3661 gctcctggac gtagccttcg ggcatggcgg acttgaagaa gtcgtgctgc ttcatgtggt
3721 cggggtagcg gctgaagcac tgcacgccgt aggtcagggt ggtcacgagg gtgggccagg
3781 gcacgggcag cttgccggtg gtgcagatga acttcagggt cagcttgccg taggtggcat
3841 cgccctcgcc ctcgccggac acgctgaact tgtggccgtt tacgtcgccg tccagctcga
3901 ccaggatggg caccaccccg gtgaacagct cctcgccctt gctcaccata agcttgggtc
3961 tccctatagt gagtcgtatt aatttcgata agccagtaag cagtgggttc tctagttagc
4021 cagagagctc tgcttatata gacctcccac cgtacacgcc taccgcccat ttgcgtcaat
4081 ggggcggagt tgttacgaca ttttggaaag tcccgttgat tttggtgcca aaacaaactc
4141 ccattgacgt caatggggtg gagacttgga aatccccgtg agtcaaaccg ctatccacgc
4201 ccattgatgt actgccaaaa ccgcatcacc atggtaatag cgatgactaa tacgtagatg
4261 tactgccaag taggaaagtc ccataaggtc atgtactggg cataatgcca ggcgggccat
4321 ttaccgtcat tgacgtcaat agggggcgta cttggcatat gatacacttg atgtactgcc
4381 aagtgggcag tttaccgtaa atactccacc cattgacgtc aatggaaagt ccctattggc
4441 gttactatgg gaacatacgt cattattgac gtcaatgggc gggggtcgtt gggcggtcag
4501 ccaggcgggc catttaccgt aagttatgta acgcggaact ccatatatgg gctatgaact
4561 aatgaccccg taattgatta ctattaataa ctagtcaata atcaatgtca acgcgtatat
4621 ctggcccgta catcgcgaag cagcgcaaaa cgcctaaccc taagcagatt cttcatgcaa
4681 ttgtcggtca agccttgcct tgttgtagct taaattttgc tcgcgcacta ctcagcgacc
4741 tccaacacac aagcagggag cagatactgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta
4801 ctgagagtgc accatagggg atcgggagat ctcccgatcc gtcgacgtca ggtggcactt
4861 ttcggggaaa tgtgcgcgga acccctattt gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt
4921 atccgctcat gagacaataa ccctgataaa tgcttcaata atattgaaaa aggaagagta
4981 tgagtattca acatttccgt gtcgccctta ttcccttttt tgcggcattt tgccttcctg
5041 tttttgctca cccagaaacg ctggtgaaag taaaagatgc tgaagatcag ttgggtgcac
5101 gagtgggtta catcgaactg gatctcaaca gcggtaagat ccttgagagt tttcgccccg
5161 aagaacgttt tccaatgatg agcactttta aagttctgct atgtggcgcg gtattatccc
5221 gtattgacgc cgggcaagag caactcggtc gccgcataca ctattctcag aatgacttgg
5281 ttgagtactc accagtcaca gaaaagcatc ttacggatgg catgacagta agagaattat
5341 gcagtgctgc cataaccatg agtgataaca ctgcggccaa cttacttctg acaacgatcg
5401 gaggaccgaa ggagctaacc gcttttttgc acaacatggg ggatcatgta actcgccttg
5461 atcgttggga accggagctg aatgaagcca taccaaacga cgagcgtgac accacgatgc
5521 ctgtagcaat ggcaacaacg ttgcgcaaac tattaactgg cgaactactt actctagctt
5581 cccggcaaca attaatagac tggatggagg cggataaagt tgcaggacca cttctgcgct
5641 cggcccttcc ggctggctgg tttattgctg ataaatctgg agccggtgag cgtgggtctc
5701 gcggtatcat tgcagcactg gggccagatg gtaagccctc ccgtatcgta gttatctaca
5761 cgacggggag tcaggcaact atggatgaac gaaatagaca gatcgctgag ataggtgcct
5821 cactgattaa gcattggtaa ctgtcagacc aagtttactc atatatactt tagattgatt
5881 taaaacttca tttttaattt aaaaggatct aggtgaagat cctttttgat aatctcatga
5941 ccaaaatccc ttaacgtgag ttttcgttcc actgagcgtc agaccccgta gaaaagatca
6001 aaggatcttc ttgagatcct ttttttctgc gcgtaatctg ctgcttgcaa acaaaaaaac
6061 caccgctacc agcggtggtt tgtttgccgg atcaagagct accaactctt tttccgaagg
6121 taactggctt cagcagagcg cagataccaa atactgttct tctagtgtag ccgtagttag
6181 gccaccactt caagaactct gtagcaccgc ctacatacct cgctctgcta atcctgttac
6241 cagtggctgc tgccagtggc gataagtcgt gtcttaccgg gttggactca agacgatagt
6301 taccggataa ggcgcagcgg tcgggctgaa cggggggttc gtgcacacag cccagcttgg
6361 agcgaacgac ctacaccgaa ctgagatacc tacagcgtga gctatgagaa agcgccacgc
6421 ttcccgaagg gagaaaggcg gacaggtatc cggtaagcgg cagggtcgga acaggagagc
6481 gcacgaggga gcttccaggg ggaaacgcct ggtatcttta tagtcctgtc gggtttcgcc
6541 acctctgact tgagcgtcga tttttgtgat gctcgtcagg ggggcggagc ctatggaaaa
6601 acgccagcaa cgcggccttt ttacggttcc tggccttttg ctggcctttt gctcacatgt
6661 tctttcctgc gttatcccct gattctgtgg ataaccgtat taccgccttt gagtgagctg
6721 ataccgctcg ccgcagccga acgaccgagc gcagcgagtc agtgagcgag gaagcggaag
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
| P3060/pCDNA3.1-SLC28A1-FLAG(2同义突变)人源基因质粒 |
| P0566/pECMV-Tet2-Myc-FLAG人源基因质粒 |
| P0567/pEGFP-DHX36人源基因质粒 |
| P0570/pCDNA3.1-FLAG-UEV1A人源基因质粒 |
| P0583/pEGFP-Rab11a-WT人源基因质粒 |
| P0505/pEGFP-Rab11a-S25N人源基因质粒 |
| P0572/pEGFP-Rab11b-WT人源基因质粒 |
| P0571/pEGFP-Rab11b-S25N人源基因质粒 |
| P0573/pCDNA3.1-BMP4人源基因质粒 |
| P0574/pCDNA3.1-FLAG-Ubc13人源基因质粒 |
| P0575/pCS2-EGFP-EB3人源基因质粒 |
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文献和实验【求助】【求助】积分换质粒,急求pIRES2-EGFP,pBudCE4.1
lwjssry 【求助】积分换质粒,急求pIRES2-EGFP,pBudCE4.1 求pIRES2-EGFP,pBudCE4.1,积分交换,详见 http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=133&id=11398213&sty=1&tpg=1&age=0 kaige88 支持把,获得pIRES2-EGFP可要通知我哦!也想用到此质粒,呵呵。。。 lwjssry
Map of pLP-EGFP-C1 Vector. Unique restriction sites are shown in bold. Note: The vector sequence file has been compiled from information in the sequence database, published literature
在基因功能研究过程中,常常使用的一种方法就是将目的基因转到靶细胞内进行瞬时表达(transient expression),以流式细胞仪检测细胞周期的变化,观察转基因对细胞增殖的影响。由于各种转基因方法的不同,转基因的效率也不同,往往是仅有一部分细胞可以表达目的基因,没有转基因的细胞将影响检测的结果。如何将已经转基因的细胞同未转基因的细胞区分开来进行检测,是一个技术上的难点。常用的一种方法就是将表达绿色荧光蛋白的质粒和目的基因共转染;在共转染时,加入目的基因表达质粒的量远高于表达GFP质粒










