pTriEx-mCherry-PA-Rac1-T17N人源基

基本信息
名称：pTriEx-mCherry-PA-Rac1-T17N人源基因质粒
别称: Plasmid#22029;MIG5MRD48Rac-1TC-25p21
复制子: pUC
质粒分类:  基因文库质粒；人源基因质粒；人源真核质粒
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
 pTriEx-mCherry-PA-Rac1-T17N是一个人源基因哺乳表达质粒。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                6747 bp ds-DNA     circular SYN 21-DEC-2018
DEFINITION  synthetic circular DNA
KEYWORDS    pTriEx-mCherry-PA-Rac1-T17N
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 6747)
  TITLE     Direct Submission
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..6747
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     misc_recomb     1..706
                     /note="baculovirus recombination region (ORF1629)"
                     /note="contains part of ORF1629"
     3'UTR           246..618
                     /note="polyhedrin 3' UTR"
                     /note="3' UTR from the Autographa californica 
                     nucleopolyhedrovirus polyhedrin gene (Suzuki et al., 2006)"
     terminator      719..766
                     /note="T7 terminator"
                     /note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA 
                     polymerase"
     polyA_site      854..909
                     /note="beta-globin poly(A) signal"
                     /note="rabbit beta-globin polyadenylation signal"
     misc_feature    complement(1163..2161)
                     /note="PA-Rac1-T17N"
     CDS             complement(2168..2872)
                     /codon_start=1
                     /product="monomeric derivative of DsRed fluorescent protein
                     (Shaner et al., 2004)"
                     /note="mCherry"
                     /note="mammalian codon-optimized"
                     /translation="VSKGEEDNMAIIKEFMRFKVHMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEGT
                     QTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNFE
                     DGGVVTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEASSERMYPEDGALKG
                     EIKQRLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNVNIKLDITSHNEDYTIVEQYERAE
                     GRHSTGGMDELYK"
     CDS             complement(2879..2896)
                     /codon_start=1
                     /product="6xHis affinity tag"
                     /note="6xHis"
                     /translation="HHHHHH"
     promoter        complement(2917..3026)
                     /note="p10 promoter"
                     /note="baculovirus promoter for expression in insect cells"
     protein_bind    3042..3066
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="lac operator"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     promoter        complement(3067..3085)
                     /note="T7 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     promoter        complement(3436..3635)
                     /note="CMV promoter"
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     enhancer        3637..3940
                     /note="CMV enhancer"
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     misc_recomb     4008..4835
                     /note="baculovirus recombination region (lef2/ORF603)"
                     /note="contains ORF603 and part of lef2"
     CDS             complement(4711..4835)
                     /codon_start=3
                     /product="baculovirus late expression factor 2"
                     /note="lef2"
                     /translation="HLLIKSQDVYKPPNCQKMKTVDKLCPFAGNCKGLNPICNY"
     CDS             5078..5938
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      5951..6538
                     /direction=RIGHT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     protein_bind    complement(6706..6739)
                     /bound_moiety="Cre recombinase"
                     /note="loxP"
                     /note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core 
                     sequence (GCATACAT)."
ORIGIN
        1 aattccaaaa agctcaacta caaatttgat cgcggacgtg ttagccgaca caattaatag
       61 gcgtcgtgtg gctatggcaa aatcgtcttc ggaagcaact tctaacgacg agggttggga
      121 cgacgacgat aatcggccta ataaagctaa cacgcccgat gttaaatatg tccaagctct
      181 atttaacgtg tttacgtcga gtcaattgta cactaacgac agtgatgaaa gaaatacaaa
      241 agcgcataat attttgaacg acgtcgaacc tttattacaa aacaaaacac aaacgaatat
      301 cgacaaagct agattgctgc tacaagattt ggcaagtttt gtggcgttga gcgaaaatcc
      361 attagatagt ccagccatcg gttcggaaaa acaacccttg tttgaaacta atcgaaacct
      421 attttacaaa tctattgagg atttaatatt taaattcaga tataaagacg ctgaaaatca
      481 tttgattttc gctctaacat accaccctaa agattataaa tttaatgaat tattaaaata
      541 cgtacaacaa ttgtctgtaa atcaacaacg cacagaatct agcgcttaat aaatgtacta
      601 ataacaatgt atcgtgtttt aatacgccgg accagtgaac agaggtgcgt ctggtgcaaa
      661 ctcctttact ttgaacacca gggaaacttc aaggagaatt tcctccgcat gctttcagca
      721 aaaaacccct caagacccgt ttagaggccc caaggggtta tgctagttac atatgggcat
      781 atgttgccaa actctaaacc aaatactcat tctgatgttt taaatgattt gccctcccat
      841 atgtccttcc gagtgagaga cacaaaaaat tccaacacac tattgcaatg aaaataaatt
      901 tcctttatta gccagaagtc agatgctcaa ggggcttcat gatgtcccca taatttttgg
      961 cagagggaaa aagatcgatc tcagtggtat ttgtgagcca gggcattggc cacaccagcc
     1021 accaccttct gataggcagc ctgcacctga ggttaatcac ttagtgatgg tgatggtgat
     1081 ggtggtgctc gagatcctcg gggtcttccg gggcgagttc tggctggctt gcacgtgtat
     1141 acagctgtgc ggccgcaagc ttttacaaca gcaggcattt tctcttcctc ttcttcacgg
     1201 gaggcgggca gaggactgct cggatcgctt cgtcaaacac tgtcttgagg cctcgctgtg
     1261 tgagcgccga gcactccagg tattttacag caccaatctc cttagccatg gctagaccct
     1321 gcggataggt gatgggagtc agcttcttct ccttcagttt ctcgatcgtg tctttatcat
     1381 ccctaagatc aagtttagtt cccactagga tgatgggagt gttgggacag tggtgccgca
     1441 cctcaggata ccactttgca cggacgtggt ggaatgatgc aggactcaca agggaaaagc
     1501 aaattaagaa cacatctgtt tgcggatagg atagggggcg taatctgtca taatcttcta
     1561 gtccagctgt atcccataag cccagattca ccggttttcc atctaccata acattggcag
     1621 aataattgtc aaagacagta gggatatatt ctccaggaaa tgcattggtt gtgtaactga
     1681 tcagtaggca atttttacct acagctccgt ctcccaccac cacacacttg ataagttctt
     1741 ttgccgcctc atcaatattt tctgcagttt tcttaatcag catgactccc tctctctcgg
     1801 cagcatctcg gacatgctca gttccatcca actgaacccc aataaagtac tggacatctc
     1861 ccttctgatc tcgcataggc tgcaagtgaa agaggttcca gaacttttta ccactctttg
     1921 tataattaat cagctgaaca gtgacctctg tttggttatc tatggcatct ctaatttttc
     1981 tcactgtcgc gcgatcagtt tcaggacctt gtagaaacct gcagtttctt cccaaaattt
     2041 cttcacggct atattctgtc aactgcaaga aactatcgga cgcgaatata atgggattat
     2101 ctggcaatct tgggtcagta atgacaaagt tcttctcaat acgttcaagt gtagtagcca
     2161 aggatccctt gtacagctcg tccatgccgc cggtggagtg gcggccctcg gcgcgttcgt
     2221 actgttccac gatggtgtag tcctcgttgt gggaggtgat gtccaacttg atgttgacgt
     2281 tgtaggcgcc gggcagctgc acgggcttct tggccttgta ggtggtcttg acctcagcgt
     2341 cgtagtggcc gccgtccttc agcttcagcc tctgcttgat ctcgcccttc agggcgccgt
     2401 cctcggggta catccgctcg gaggaggcct cccagcccat ggtcttcttc tgcattacgg
     2461 ggccgtcgga ggggaagttg gtgccgcgca gcttcacctt gtagatgaac tcgccgtcct
     2521 gcagggagga gtcctgggtc acggtcacca cgccgccgtc ctcgaagttc atcacgcgct
     2581 cccacttgaa gccctcgggg aaggacagct tcaagtagtc ggggatgtcg gcggggtgct
     2641 tcacgtaggc cttggagccg tacatgaact gaggggacag gatgtcccag gcgaagggca
     2701 gggggccacc cttggtcacc ttcagcttgg cggtctgggt gccctcgtag gggcggccct
     2761 cgccctcgcc ctcgatctcg aactcgtggc cgttcacgga gccctccatg tgcaccttga
     2821 agcgcatgaa ctccttgatg atggccatgt tatcctcctc gcccttgctc acagatccgt
     2881 gatggtggtg atggtgtgcc atggtatatc tcctttgatt gtaaataaaa tgtaatttac
     2941 agtatagtat tttaattaat atacaaatga tttgataata attcttattt aactataata
     3001 tattgtgttg ggttgaatta aaggtcccgg attaactccg gggaattgtt atccgctcac
     3061 aattccccta tagtgagtcg tattaatttc ggtccgatcc aattctttgc caaaatgatg
     3121 agacagcaca ataaccagca cgttgcccag gagctgtagg aaaaagaaga aggcatgaac
     3181 atggttagca gaggctctag agccgccggt cacacgccag aagccgaacc ccgccctgcc
     3241 ccgtcccccc cgaaggcagc cgtccccccg cggacagccc cgagccgctc cccccgcaca
     3301 aagggcccga tacttacctg cccagtgcct cacgaccaac ttctgcacgt taagttcgag
     3361 actggcgtta gcaatttaac tgtgataaac taccgcaata aagcatctag tgatctgacg
     3421 gttcactaaa cgacgtctgc ttatatagac ctcccaccgt acacgcctac cgcccatttg
     3481 cgtcaacggg gcggggttat tacgacattt tggaaagtcc cgttgatttt ggtgccaaaa
     3541 caaactccca ttgacgtcaa tggggtggag acttggaaat ccccgtgagt caaaccgcta
     3601 tccacgccca ttggtgtact gccaaaaccg catcagcatg gtaatagcga tgactaatac
     3661 gtagatgtac tgccaagtag gaaagtcccg taaggtcatg tactgggcat aatgccaggc
     3721 gggccattta ccgtcattga cgtcaatagg gggcggactt ggcatatgat acacttgatg
     3781 tactgccaag tgggcagttt accgtaaata ctccacccat tgacgtcaat ggaaagtccc
     3841 tattggcgtt actatgggaa catacgtcat tattgacgtc aatgggcggg ggtcgttggg
     3901 cggtcagcca ggcgggccat ttaccgtaag ttatgtaacg cggaactcca tatatgggct
     3961 atgaactaat gaccccgtaa ttgattacta ttaataggcc ggccatcagc aactatatat
     4021 tgatagacat ttccagtttg tgatattagt ttgtgcgtct cattacaatg gctgttattt
     4081 ttaacaacaa acaactgctc gcagacaata gtatagaaaa gggaggtgaa ctgtttttgt
     4141 ttaacggttc gtacaacatt ttggaaagtt atgttaatcc ggtgctgcta aaaaatggtg
     4201 taattgaact agaagaagct gcgtactatg ccggcaacat attgtacaaa accgacgatc
     4261 ccaaattcat tgattatata aatttaataa ttaaagcaac acactccgaa gaactaccag
     4321 aaaatagcac tgttgtaaat tacagaaaaa ctatgcgcag cggtactata caccccatta
     4381 aaaaagacat atatatttat gacaacaaaa aatttactct atacgataga tacatatatg
     4441 gatacgataa taactatgtt aatttttatg aagagaaaaa tgaaaaagag aaggaatacg
     4501 aagaagaaga cgacaaggcg tctagtttat gtgaaaataa aattatattg tcgcaaatta
     4561 actgtgaatc atttgaaaat gattttaaat attacctcag cgattataac tacgcgtttt
     4621 caattataga taatactaca aatgttcttg ttgcgtttgg tttgtatcgt taataaaaaa
     4681 caaatttgac atttataatt gttttattat tcaataatta caaataggat tgagaccctt
     4741 gcagttgcca gcaaacggac agagcttgtc gacagttttc attttttggc agtttggtgg
     4801 tttatacaca tcttgggatt tgattaaaag atgcatgact tcacccacac acttggagtc
     4861 gtggttgtag aaatgcgtca gagccttgat taaacatcgg ttttcacact tggcacacga
     4921 aaccacgttt gcaatgtaac agtttagtat aaacctcttc ctgtacatac cggcgcgttt
     4981 atacacatct tgggatttga ttaaaagatg caggaaacgc gcggacatga gacaataacc
     5041 ctgataaatg cttcaataat attgaaaaag gaagagtatg agtattcaac atttccgtgt
     5101 cgcccttatt cccttttttg cggcattttg ccttcctgtt tttgctcacc cagaaacgct
     5161 ggtgaaagta aaagatgctg aagatcagtt gggtgcacga gtgggttaca tcgaactgga
     5221 tctcaacagc ggtaagatcc ttgagagttt tcgccccgaa gaacgttttc caatgatgag
     5281 cacttttaaa gttctgctat gtggcgcggt attatcccgt attgacgccg ggcaagagca
     5341 actcggtcgc cgcatacact attctcagaa tgacttggtt gagtactcac cagtcacaga
     5401 aaagcatctt acggatggca tgacagtaag agaattatgc agtgctgcca taaccatgag
     5461 tgataacact gcggccaact tacttctgac aacgatcgga ggaccgaagg agctaaccgc
     5521 ttttttgcac aacatggggg atcatgtaac tcgccttgat cgttgggaac cggagctgaa
     5581 tgaagccata ccaaacgacg agcgtgacac cacgatgcct gtagcaatgg caacaacgtt
     5641 gcgcaaacta ttaactggcg aactacttac tctagcttcc cggcaacaat taatagactg
     5701 gatggaggcg gataaagttg caggaccact tctgcgctcg gcccttccgg ctggctggtt
     5761 tattgctgat aaatctggag ccggtgagcg tgggtctcgc ggtatcattg cagcactggg
     5821 gccagatggt aagccctccc gtatcgtagt tatctacacg acggggagtc aggcaactat
     5881 ggatgaacga aatagacaga tcgctgagat aggtgcctca ctgattaagc attggtaaca
     5941 aaggatcttc ttgagatcct ttttttctgc gcgtaatctg ctgcttgcaa acaaaaaaac
     6001 caccgctacc agcggtggtt tgtttgccgg atcaagagct accaactctt tttccgaagg
     6061 taactggctt cagcagagcg cagataccaa atactgttct tctagtgtag ccgtagttag
     6121 gccaccactt caagaactct gtagcaccgc ctacatacct cgctctgcta atcctgttac
     6181 cagtggctgc tgccagtggc gataagtcgt gtcttaccgg gttggactca agacgatagt
     6241 taccggataa ggcgcagcgg tcgggctgaa cggggggttc gtgcacacag cccagcttgg
     6301 agcgaacgac ctacaccgaa ctgagatacc tacagcgtga gctatgagaa agcgccacgc
     6361 ttcccgaagg gagaaaggcg gacaggtatc cggtaagcgg cagggtcgga acaggagagc
     6421 gcacgaggga gcttccaggg ggaaacgcct ggtatcttta tagtcctgtc gggtttcgcc
     6481 acctctgact tgagcgtcga tttttgtgat gctcgtcagg gggcggagcc tatggaaaaa
     6541 cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt
     6601 ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga
     6661 taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgttccg agcttataac ttcgtataat
     6721 gtatgctata cgaagttatg cgatcgc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3715/pCMV-SPORT6-AMOTL2（730-2340）人源基因质粒

P3716/pCMV-SPORT6-AGT人源基因质粒

P3717/pCMV-SPORT6-C11orf54人源基因质粒

P3718/pCMV-SPORT6-C14orf104人源基因质粒

P3719/pCMV-SPORT6-TIMD4-T719C人源基因质粒

P4952/pCMV-SPORT6-EIF1AX人源基因质粒

P4953/pCMV-SPORT6-SFTA2（1同义突变）人源基因质粒

P4959/pCMV-SPORT6-UBE3B人源基因质粒

P3720/pCMV-SPORT6-SLC25A4人源基因质粒

P3721/pCMV-SPORT6-GLOD4人源基因质粒

P3722/pCMV-SPORT6-SSBP1人源基因质粒