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- 详细信息
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- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#22029;MIG5MRD48Rac-1TC-25p21
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pTriEx-mCherry-PA-Rac1-T17N人源基因质粒
别称: Plasmid#22029;MIG5MRD48Rac-1TC-25p21
复制子: pUC
质粒分类: 基因文库质粒；人源基因质粒；人源真核质粒
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pTriEx-mCherry-PA-Rac1-T17N是一个人源基因哺乳表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6747 bp ds-DNA circular SYN 21-DEC-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pTriEx-mCherry-PA-Rac1-T17N
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6747)
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6747
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_recomb 1..706
/note="baculovirus recombination region (ORF1629)"
/note="contains part of ORF1629"
3'UTR 246..618
/note="polyhedrin 3' UTR"
/note="3' UTR from the Autographa californica
nucleopolyhedrovirus polyhedrin gene (Suzuki et al., 2006)"
terminator 719..766
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
polyA_site 854..909
/note="beta-globin poly(A) signal"
/note="rabbit beta-globin polyadenylation signal"
misc_feature complement(1163..2161)
/note="PA-Rac1-T17N"
CDS complement(2168..2872)
/codon_start=1
/product="monomeric derivative of DsRed fluorescent protein
(Shaner et al., 2004)"
/note="mCherry"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="VSKGEEDNMAIIKEFMRFKVHMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEGT
QTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNFE
DGGVVTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEASSERMYPEDGALKG
EIKQRLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNVNIKLDITSHNEDYTIVEQYERAE
GRHSTGGMDELYK"
CDS complement(2879..2896)
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
promoter complement(2917..3026)
/note="p10 promoter"
/note="baculovirus promoter for expression in insect cells"
protein_bind 3042..3066
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(3067..3085)
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
promoter complement(3436..3635)
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
enhancer 3637..3940
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
misc_recomb 4008..4835
/note="baculovirus recombination region (lef2/ORF603)"
/note="contains ORF603 and part of lef2"
CDS complement(4711..4835)
/codon_start=3
/product="baculovirus late expression factor 2"
/note="lef2"
/translation="HLLIKSQDVYKPPNCQKMKTVDKLCPFAGNCKGLNPICNY"
CDS 5078..5938
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 5951..6538
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
protein_bind complement(6706..6739)
/bound_moiety="Cre recombinase"
/note="loxP"
/note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core
sequence (GCATACAT)."
ORIGIN
1 aattccaaaa agctcaacta caaatttgat cgcggacgtg ttagccgaca caattaatag
61 gcgtcgtgtg gctatggcaa aatcgtcttc ggaagcaact tctaacgacg agggttggga
121 cgacgacgat aatcggccta ataaagctaa cacgcccgat gttaaatatg tccaagctct
181 atttaacgtg tttacgtcga gtcaattgta cactaacgac agtgatgaaa gaaatacaaa
241 agcgcataat attttgaacg acgtcgaacc tttattacaa aacaaaacac aaacgaatat
301 cgacaaagct agattgctgc tacaagattt ggcaagtttt gtggcgttga gcgaaaatcc
361 attagatagt ccagccatcg gttcggaaaa acaacccttg tttgaaacta atcgaaacct
421 attttacaaa tctattgagg atttaatatt taaattcaga tataaagacg ctgaaaatca
481 tttgattttc gctctaacat accaccctaa agattataaa tttaatgaat tattaaaata
541 cgtacaacaa ttgtctgtaa atcaacaacg cacagaatct agcgcttaat aaatgtacta
601 ataacaatgt atcgtgtttt aatacgccgg accagtgaac agaggtgcgt ctggtgcaaa
661 ctcctttact ttgaacacca gggaaacttc aaggagaatt tcctccgcat gctttcagca
721 aaaaacccct caagacccgt ttagaggccc caaggggtta tgctagttac atatgggcat
781 atgttgccaa actctaaacc aaatactcat tctgatgttt taaatgattt gccctcccat
841 atgtccttcc gagtgagaga cacaaaaaat tccaacacac tattgcaatg aaaataaatt
901 tcctttatta gccagaagtc agatgctcaa ggggcttcat gatgtcccca taatttttgg
961 cagagggaaa aagatcgatc tcagtggtat ttgtgagcca gggcattggc cacaccagcc
1021 accaccttct gataggcagc ctgcacctga ggttaatcac ttagtgatgg tgatggtgat
1081 ggtggtgctc gagatcctcg gggtcttccg gggcgagttc tggctggctt gcacgtgtat
1141 acagctgtgc ggccgcaagc ttttacaaca gcaggcattt tctcttcctc ttcttcacgg
1201 gaggcgggca gaggactgct cggatcgctt cgtcaaacac tgtcttgagg cctcgctgtg
1261 tgagcgccga gcactccagg tattttacag caccaatctc cttagccatg gctagaccct
1321 gcggataggt gatgggagtc agcttcttct ccttcagttt ctcgatcgtg tctttatcat
1381 ccctaagatc aagtttagtt cccactagga tgatgggagt gttgggacag tggtgccgca
1441 cctcaggata ccactttgca cggacgtggt ggaatgatgc aggactcaca agggaaaagc
1501 aaattaagaa cacatctgtt tgcggatagg atagggggcg taatctgtca taatcttcta
1561 gtccagctgt atcccataag cccagattca ccggttttcc atctaccata acattggcag
1621 aataattgtc aaagacagta gggatatatt ctccaggaaa tgcattggtt gtgtaactga
1681 tcagtaggca atttttacct acagctccgt ctcccaccac cacacacttg ataagttctt
1741 ttgccgcctc atcaatattt tctgcagttt tcttaatcag catgactccc tctctctcgg
1801 cagcatctcg gacatgctca gttccatcca actgaacccc aataaagtac tggacatctc
1861 ccttctgatc tcgcataggc tgcaagtgaa agaggttcca gaacttttta ccactctttg
1921 tataattaat cagctgaaca gtgacctctg tttggttatc tatggcatct ctaatttttc
1981 tcactgtcgc gcgatcagtt tcaggacctt gtagaaacct gcagtttctt cccaaaattt
2041 cttcacggct atattctgtc aactgcaaga aactatcgga cgcgaatata atgggattat
2101 ctggcaatct tgggtcagta atgacaaagt tcttctcaat acgttcaagt gtagtagcca
2161 aggatccctt gtacagctcg tccatgccgc cggtggagtg gcggccctcg gcgcgttcgt
2221 actgttccac gatggtgtag tcctcgttgt gggaggtgat gtccaacttg atgttgacgt
2281 tgtaggcgcc gggcagctgc acgggcttct tggccttgta ggtggtcttg acctcagcgt
2341 cgtagtggcc gccgtccttc agcttcagcc tctgcttgat ctcgcccttc agggcgccgt
2401 cctcggggta catccgctcg gaggaggcct cccagcccat ggtcttcttc tgcattacgg
2461 ggccgtcgga ggggaagttg gtgccgcgca gcttcacctt gtagatgaac tcgccgtcct
2521 gcagggagga gtcctgggtc acggtcacca cgccgccgtc ctcgaagttc atcacgcgct
2581 cccacttgaa gccctcgggg aaggacagct tcaagtagtc ggggatgtcg gcggggtgct
2641 tcacgtaggc cttggagccg tacatgaact gaggggacag gatgtcccag gcgaagggca
2701 gggggccacc cttggtcacc ttcagcttgg cggtctgggt gccctcgtag gggcggccct
2761 cgccctcgcc ctcgatctcg aactcgtggc cgttcacgga gccctccatg tgcaccttga
2821 agcgcatgaa ctccttgatg atggccatgt tatcctcctc gcccttgctc acagatccgt
2881 gatggtggtg atggtgtgcc atggtatatc tcctttgatt gtaaataaaa tgtaatttac
2941 agtatagtat tttaattaat atacaaatga tttgataata attcttattt aactataata
3001 tattgtgttg ggttgaatta aaggtcccgg attaactccg gggaattgtt atccgctcac
3061 aattccccta tagtgagtcg tattaatttc ggtccgatcc aattctttgc caaaatgatg
3121 agacagcaca ataaccagca cgttgcccag gagctgtagg aaaaagaaga aggcatgaac
3181 atggttagca gaggctctag agccgccggt cacacgccag aagccgaacc ccgccctgcc
3241 ccgtcccccc cgaaggcagc cgtccccccg cggacagccc cgagccgctc cccccgcaca
3301 aagggcccga tacttacctg cccagtgcct cacgaccaac ttctgcacgt taagttcgag
3361 actggcgtta gcaatttaac tgtgataaac taccgcaata aagcatctag tgatctgacg
3421 gttcactaaa cgacgtctgc ttatatagac ctcccaccgt acacgcctac cgcccatttg
3481 cgtcaacggg gcggggttat tacgacattt tggaaagtcc cgttgatttt ggtgccaaaa
3541 caaactccca ttgacgtcaa tggggtggag acttggaaat ccccgtgagt caaaccgcta
3601 tccacgccca ttggtgtact gccaaaaccg catcagcatg gtaatagcga tgactaatac
3661 gtagatgtac tgccaagtag gaaagtcccg taaggtcatg tactgggcat aatgccaggc
3721 gggccattta ccgtcattga cgtcaatagg gggcggactt ggcatatgat acacttgatg
3781 tactgccaag tgggcagttt accgtaaata ctccacccat tgacgtcaat ggaaagtccc
3841 tattggcgtt actatgggaa catacgtcat tattgacgtc aatgggcggg ggtcgttggg
3901 cggtcagcca ggcgggccat ttaccgtaag ttatgtaacg cggaactcca tatatgggct
3961 atgaactaat gaccccgtaa ttgattacta ttaataggcc ggccatcagc aactatatat
4021 tgatagacat ttccagtttg tgatattagt ttgtgcgtct cattacaatg gctgttattt
4081 ttaacaacaa acaactgctc gcagacaata gtatagaaaa gggaggtgaa ctgtttttgt
4141 ttaacggttc gtacaacatt ttggaaagtt atgttaatcc ggtgctgcta aaaaatggtg
4201 taattgaact agaagaagct gcgtactatg ccggcaacat attgtacaaa accgacgatc
4261 ccaaattcat tgattatata aatttaataa ttaaagcaac acactccgaa gaactaccag
4321 aaaatagcac tgttgtaaat tacagaaaaa ctatgcgcag cggtactata caccccatta
4381 aaaaagacat atatatttat gacaacaaaa aatttactct atacgataga tacatatatg
4441 gatacgataa taactatgtt aatttttatg aagagaaaaa tgaaaaagag aaggaatacg
4501 aagaagaaga cgacaaggcg tctagtttat gtgaaaataa aattatattg tcgcaaatta
4561 actgtgaatc atttgaaaat gattttaaat attacctcag cgattataac tacgcgtttt
4621 caattataga taatactaca aatgttcttg ttgcgtttgg tttgtatcgt taataaaaaa
4681 caaatttgac atttataatt gttttattat tcaataatta caaataggat tgagaccctt
4741 gcagttgcca gcaaacggac agagcttgtc gacagttttc attttttggc agtttggtgg
4801 tttatacaca tcttgggatt tgattaaaag atgcatgact tcacccacac acttggagtc
4861 gtggttgtag aaatgcgtca gagccttgat taaacatcgg ttttcacact tggcacacga
4921 aaccacgttt gcaatgtaac agtttagtat aaacctcttc ctgtacatac cggcgcgttt
4981 atacacatct tgggatttga ttaaaagatg caggaaacgc gcggacatga gacaataacc
5041 ctgataaatg cttcaataat attgaaaaag gaagagtatg agtattcaac atttccgtgt
5101 cgcccttatt cccttttttg cggcattttg ccttcctgtt tttgctcacc cagaaacgct
5161 ggtgaaagta aaagatgctg aagatcagtt gggtgcacga gtgggttaca tcgaactgga
5221 tctcaacagc ggtaagatcc ttgagagttt tcgccccgaa gaacgttttc caatgatgag
5281 cacttttaaa gttctgctat gtggcgcggt attatcccgt attgacgccg ggcaagagca
5341 actcggtcgc cgcatacact attctcagaa tgacttggtt gagtactcac cagtcacaga
5401 aaagcatctt acggatggca tgacagtaag agaattatgc agtgctgcca taaccatgag
5461 tgataacact gcggccaact tacttctgac aacgatcgga ggaccgaagg agctaaccgc
5521 ttttttgcac aacatggggg atcatgtaac tcgccttgat cgttgggaac cggagctgaa
5581 tgaagccata ccaaacgacg agcgtgacac cacgatgcct gtagcaatgg caacaacgtt
5641 gcgcaaacta ttaactggcg aactacttac tctagcttcc cggcaacaat taatagactg
5701 gatggaggcg gataaagttg caggaccact tctgcgctcg gcccttccgg ctggctggtt
5761 tattgctgat aaatctggag ccggtgagcg tgggtctcgc ggtatcattg cagcactggg
5821 gccagatggt aagccctccc gtatcgtagt tatctacacg acggggagtc aggcaactat
5881 ggatgaacga aatagacaga tcgctgagat aggtgcctca ctgattaagc attggtaaca
5941 aaggatcttc ttgagatcct ttttttctgc gcgtaatctg ctgcttgcaa acaaaaaaac
6001 caccgctacc agcggtggtt tgtttgccgg atcaagagct accaactctt tttccgaagg
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6301 agcgaacgac ctacaccgaa ctgagatacc tacagcgtga gctatgagaa agcgccacgc
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6421 gcacgaggga gcttccaggg ggaaacgcct ggtatcttta tagtcctgtc gggtttcgcc
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6541 cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt
6601 ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga
6661 taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgttccg agcttataac ttcgtataat
6721 gtatgctata cgaagttatg cgatcgc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pTriEx-mCherry-PA-Rac1-T17N人源基因质粒
别称: Plasmid#22029;MIG5MRD48Rac-1TC-25p21
复制子: pUC
质粒分类: 基因文库质粒；人源基因质粒；人源真核质粒
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pTriEx-mCherry-PA-Rac1-T17N是一个人源基因哺乳表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6747 bp ds-DNA circular SYN 21-DEC-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pTriEx-mCherry-PA-Rac1-T17N
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6747)
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6747
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/mol_type="other DNA"
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CDS complement(2168..2872)
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/product="monomeric derivative of DsRed fluorescent protein
(Shaner et al., 2004)"
/note="mCherry"
/note="mammalian codon-optimized"
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/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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promoter complement(3436..3635)
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/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
enhancer 3637..3940
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CDS 5078..5938
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related antibiotics"
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LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 5951..6538
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/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
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/note="loxP"
/note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core
sequence (GCATACAT)."
ORIGIN
1 aattccaaaa agctcaacta caaatttgat cgcggacgtg ttagccgaca caattaatag
61 gcgtcgtgtg gctatggcaa aatcgtcttc ggaagcaact tctaacgacg agggttggga
121 cgacgacgat aatcggccta ataaagctaa cacgcccgat gttaaatatg tccaagctct
181 atttaacgtg tttacgtcga gtcaattgta cactaacgac agtgatgaaa gaaatacaaa
241 agcgcataat attttgaacg acgtcgaacc tttattacaa aacaaaacac aaacgaatat
301 cgacaaagct agattgctgc tacaagattt ggcaagtttt gtggcgttga gcgaaaatcc
361 attagatagt ccagccatcg gttcggaaaa acaacccttg tttgaaacta atcgaaacct
421 attttacaaa tctattgagg atttaatatt taaattcaga tataaagacg ctgaaaatca
481 tttgattttc gctctaacat accaccctaa agattataaa tttaatgaat tattaaaata
541 cgtacaacaa ttgtctgtaa atcaacaacg cacagaatct agcgcttaat aaatgtacta
601 ataacaatgt atcgtgtttt aatacgccgg accagtgaac agaggtgcgt ctggtgcaaa
661 ctcctttact ttgaacacca gggaaacttc aaggagaatt tcctccgcat gctttcagca
721 aaaaacccct caagacccgt ttagaggccc caaggggtta tgctagttac atatgggcat
781 atgttgccaa actctaaacc aaatactcat tctgatgttt taaatgattt gccctcccat
841 atgtccttcc gagtgagaga cacaaaaaat tccaacacac tattgcaatg aaaataaatt
901 tcctttatta gccagaagtc agatgctcaa ggggcttcat gatgtcccca taatttttgg
961 cagagggaaa aagatcgatc tcagtggtat ttgtgagcca gggcattggc cacaccagcc
1021 accaccttct gataggcagc ctgcacctga ggttaatcac ttagtgatgg tgatggtgat
1081 ggtggtgctc gagatcctcg gggtcttccg gggcgagttc tggctggctt gcacgtgtat
1141 acagctgtgc ggccgcaagc ttttacaaca gcaggcattt tctcttcctc ttcttcacgg
1201 gaggcgggca gaggactgct cggatcgctt cgtcaaacac tgtcttgagg cctcgctgtg
1261 tgagcgccga gcactccagg tattttacag caccaatctc cttagccatg gctagaccct
1321 gcggataggt gatgggagtc agcttcttct ccttcagttt ctcgatcgtg tctttatcat
1381 ccctaagatc aagtttagtt cccactagga tgatgggagt gttgggacag tggtgccgca
1441 cctcaggata ccactttgca cggacgtggt ggaatgatgc aggactcaca agggaaaagc
1501 aaattaagaa cacatctgtt tgcggatagg atagggggcg taatctgtca taatcttcta
1561 gtccagctgt atcccataag cccagattca ccggttttcc atctaccata acattggcag
1621 aataattgtc aaagacagta gggatatatt ctccaggaaa tgcattggtt gtgtaactga
1681 tcagtaggca atttttacct acagctccgt ctcccaccac cacacacttg ataagttctt
1741 ttgccgcctc atcaatattt tctgcagttt tcttaatcag catgactccc tctctctcgg
1801 cagcatctcg gacatgctca gttccatcca actgaacccc aataaagtac tggacatctc
1861 ccttctgatc tcgcataggc tgcaagtgaa agaggttcca gaacttttta ccactctttg
1921 tataattaat cagctgaaca gtgacctctg tttggttatc tatggcatct ctaatttttc
1981 tcactgtcgc gcgatcagtt tcaggacctt gtagaaacct gcagtttctt cccaaaattt
2041 cttcacggct atattctgtc aactgcaaga aactatcgga cgcgaatata atgggattat
2101 ctggcaatct tgggtcagta atgacaaagt tcttctcaat acgttcaagt gtagtagcca
2161 aggatccctt gtacagctcg tccatgccgc cggtggagtg gcggccctcg gcgcgttcgt
2221 actgttccac gatggtgtag tcctcgttgt gggaggtgat gtccaacttg atgttgacgt
2281 tgtaggcgcc gggcagctgc acgggcttct tggccttgta ggtggtcttg acctcagcgt
2341 cgtagtggcc gccgtccttc agcttcagcc tctgcttgat ctcgcccttc agggcgccgt
2401 cctcggggta catccgctcg gaggaggcct cccagcccat ggtcttcttc tgcattacgg
2461 ggccgtcgga ggggaagttg gtgccgcgca gcttcacctt gtagatgaac tcgccgtcct
2521 gcagggagga gtcctgggtc acggtcacca cgccgccgtc ctcgaagttc atcacgcgct
2581 cccacttgaa gccctcgggg aaggacagct tcaagtagtc ggggatgtcg gcggggtgct
2641 tcacgtaggc cttggagccg tacatgaact gaggggacag gatgtcccag gcgaagggca
2701 gggggccacc cttggtcacc ttcagcttgg cggtctgggt gccctcgtag gggcggccct
2761 cgccctcgcc ctcgatctcg aactcgtggc cgttcacgga gccctccatg tgcaccttga
2821 agcgcatgaa ctccttgatg atggccatgt tatcctcctc gcccttgctc acagatccgt
2881 gatggtggtg atggtgtgcc atggtatatc tcctttgatt gtaaataaaa tgtaatttac
2941 agtatagtat tttaattaat atacaaatga tttgataata attcttattt aactataata
3001 tattgtgttg ggttgaatta aaggtcccgg attaactccg gggaattgtt atccgctcac
3061 aattccccta tagtgagtcg tattaatttc ggtccgatcc aattctttgc caaaatgatg
3121 agacagcaca ataaccagca cgttgcccag gagctgtagg aaaaagaaga aggcatgaac
3181 atggttagca gaggctctag agccgccggt cacacgccag aagccgaacc ccgccctgcc
3241 ccgtcccccc cgaaggcagc cgtccccccg cggacagccc cgagccgctc cccccgcaca
3301 aagggcccga tacttacctg cccagtgcct cacgaccaac ttctgcacgt taagttcgag
3361 actggcgtta gcaatttaac tgtgataaac taccgcaata aagcatctag tgatctgacg
3421 gttcactaaa cgacgtctgc ttatatagac ctcccaccgt acacgcctac cgcccatttg
3481 cgtcaacggg gcggggttat tacgacattt tggaaagtcc cgttgatttt ggtgccaaaa
3541 caaactccca ttgacgtcaa tggggtggag acttggaaat ccccgtgagt caaaccgcta
3601 tccacgccca ttggtgtact gccaaaaccg catcagcatg gtaatagcga tgactaatac
3661 gtagatgtac tgccaagtag gaaagtcccg taaggtcatg tactgggcat aatgccaggc
3721 gggccattta ccgtcattga cgtcaatagg gggcggactt ggcatatgat acacttgatg
3781 tactgccaag tgggcagttt accgtaaata ctccacccat tgacgtcaat ggaaagtccc
3841 tattggcgtt actatgggaa catacgtcat tattgacgtc aatgggcggg ggtcgttggg
3901 cggtcagcca ggcgggccat ttaccgtaag ttatgtaacg cggaactcca tatatgggct
3961 atgaactaat gaccccgtaa ttgattacta ttaataggcc ggccatcagc aactatatat
4021 tgatagacat ttccagtttg tgatattagt ttgtgcgtct cattacaatg gctgttattt
4081 ttaacaacaa acaactgctc gcagacaata gtatagaaaa gggaggtgaa ctgtttttgt
4141 ttaacggttc gtacaacatt ttggaaagtt atgttaatcc ggtgctgcta aaaaatggtg
4201 taattgaact agaagaagct gcgtactatg ccggcaacat attgtacaaa accgacgatc
4261 ccaaattcat tgattatata aatttaataa ttaaagcaac acactccgaa gaactaccag
4321 aaaatagcac tgttgtaaat tacagaaaaa ctatgcgcag cggtactata caccccatta
4381 aaaaagacat atatatttat gacaacaaaa aatttactct atacgataga tacatatatg
4441 gatacgataa taactatgtt aatttttatg aagagaaaaa tgaaaaagag aaggaatacg
4501 aagaagaaga cgacaaggcg tctagtttat gtgaaaataa aattatattg tcgcaaatta
4561 actgtgaatc atttgaaaat gattttaaat attacctcag cgattataac tacgcgtttt
4621 caattataga taatactaca aatgttcttg ttgcgtttgg tttgtatcgt taataaaaaa
4681 caaatttgac atttataatt gttttattat tcaataatta caaataggat tgagaccctt
4741 gcagttgcca gcaaacggac agagcttgtc gacagttttc attttttggc agtttggtgg
4801 tttatacaca tcttgggatt tgattaaaag atgcatgact tcacccacac acttggagtc
4861 gtggttgtag aaatgcgtca gagccttgat taaacatcgg ttttcacact tggcacacga
4921 aaccacgttt gcaatgtaac agtttagtat aaacctcttc ctgtacatac cggcgcgttt
4981 atacacatct tgggatttga ttaaaagatg caggaaacgc gcggacatga gacaataacc
5041 ctgataaatg cttcaataat attgaaaaag gaagagtatg agtattcaac atttccgtgt
5101 cgcccttatt cccttttttg cggcattttg ccttcctgtt tttgctcacc cagaaacgct
5161 ggtgaaagta aaagatgctg aagatcagtt gggtgcacga gtgggttaca tcgaactgga
5221 tctcaacagc ggtaagatcc ttgagagttt tcgccccgaa gaacgttttc caatgatgag
5281 cacttttaaa gttctgctat gtggcgcggt attatcccgt attgacgccg ggcaagagca
5341 actcggtcgc cgcatacact attctcagaa tgacttggtt gagtactcac cagtcacaga
5401 aaagcatctt acggatggca tgacagtaag agaattatgc agtgctgcca taaccatgag
5461 tgataacact gcggccaact tacttctgac aacgatcgga ggaccgaagg agctaaccgc
5521 ttttttgcac aacatggggg atcatgtaac tcgccttgat cgttgggaac cggagctgaa
5581 tgaagccata ccaaacgacg agcgtgacac cacgatgcct gtagcaatgg caacaacgtt
5641 gcgcaaacta ttaactggcg aactacttac tctagcttcc cggcaacaat taatagactg
5701 gatggaggcg gataaagttg caggaccact tctgcgctcg gcccttccgg ctggctggtt
5761 tattgctgat aaatctggag ccggtgagcg tgggtctcgc ggtatcattg cagcactggg
5821 gccagatggt aagccctccc gtatcgtagt tatctacacg acggggagtc aggcaactat
5881 ggatgaacga aatagacaga tcgctgagat aggtgcctca ctgattaagc attggtaaca
5941 aaggatcttc ttgagatcct ttttttctgc gcgtaatctg ctgcttgcaa acaaaaaaac
6001 caccgctacc agcggtggtt tgtttgccgg atcaagagct accaactctt tttccgaagg
6061 taactggctt cagcagagcg cagataccaa atactgttct tctagtgtag ccgtagttag
6121 gccaccactt caagaactct gtagcaccgc ctacatacct cgctctgcta atcctgttac
6181 cagtggctgc tgccagtggc gataagtcgt gtcttaccgg gttggactca agacgatagt
6241 taccggataa ggcgcagcgg tcgggctgaa cggggggttc gtgcacacag cccagcttgg
6301 agcgaacgac ctacaccgaa ctgagatacc tacagcgtga gctatgagaa agcgccacgc
6361 ttcccgaagg gagaaaggcg gacaggtatc cggtaagcgg cagggtcgga acaggagagc
6421 gcacgaggga gcttccaggg ggaaacgcct ggtatcttta tagtcctgtc gggtttcgcc
6481 acctctgact tgagcgtcga tttttgtgat gctcgtcagg gggcggagcc tatggaaaaa
6541 cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt
6601 ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga
6661 taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgttccg agcttataac ttcgtataat
6721 gtatgctata cgaagttatg cgatcgc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3715/pCMV-SPORT6-AMOTL2（730-2340）人源基因质粒 |
| P3716/pCMV-SPORT6-AGT人源基因质粒 |
| P3717/pCMV-SPORT6-C11orf54人源基因质粒 |
| P3718/pCMV-SPORT6-C14orf104人源基因质粒 |
| P3719/pCMV-SPORT6-TIMD4-T719C人源基因质粒 |
| P4952/pCMV-SPORT6-EIF1AX人源基因质粒 |
| P4953/pCMV-SPORT6-SFTA2（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4959/pCMV-SPORT6-UBE3B人源基因质粒 |
| P3720/pCMV-SPORT6-SLC25A4人源基因质粒 |
| P3721/pCMV-SPORT6-GLOD4人源基因质粒 |
| P3722/pCMV-SPORT6-SSBP1人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
数一般只有一个；④反转录病毒只选择感染分裂细胞；⑤病毒可容纳外源基因的DNA长度为 反转录病毒载体的结构：已切除了病毒的结构基因gag，大部分pol和env，包括两侧的LTR，被选择(标记)基因和目的基因插入的多聚位点所取代，同时还带有包装信号ψ。 (一)可产生特异性逆转录病毒细胞系的建立 1、逆转录病毒载体进入包装细胞系 从细胞质粒中产生感染性病毒包括将质粒导入包装细胞系，可从稳定感染细胞中选择病毒产生细胞或用一个包装细胞系暂时产生的病毒感染另一种有不同包装的细胞系，从中选择病毒的产生细胞
可溶性表达：大肠杆菌表达效率很高，特别是强启动子，目的蛋白来不及折叠而形成不溶的包含体颗粒，包含体容易纯化但是复性效率不高。分泌表达可以得到可溶的产物，也有部分融合Tag有助于提高产物的可溶性，比如Thio，pMAL系统。 转录终止子对外源基因在大肠杆菌中的高效表达有重要作用——控制转录的RNA长度提高稳定性，避免质粒上异常表达导致质粒稳定性下降。放在启动子上游的转录终止子还可以防止其他启动子的通读，降低本底。转录终止子有两类，Rho因子作用下使转录终止mRNA和根据模版上的对称
颗粒都明显减少.设计的核酶构建了带有5’-、3’-自身修剪的真核细胞核酶表达质粒，包括含单个核酶和多个***的鸟枪型核酶基因的质粒，通过转染把他们同带有HBV基因组的质粒转入HepG2细胞. 用Southern blot、ELISA、RNase保护法等测定结果后，显示HBsAg、HBcAg、HBeAg以及他们相应的RNA、Dane颗粒数都因为核酶的作用而明显地减少[16]. Puthtz et al学者用重组筛选的方法从一个发夹型核酶文库中(5×109个)确定能有效地在转基因人肝癌细胞(HCC)中
pTriEx-mCherry-PA-Rac1-T17N人源基因质粒
￥100 - 1000
