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- 2026年10月24日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_001080430.3;CAGF9;TNRC9
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pCDH-CMV-3×FLAG-TOX3-EF1-Puro人源基因质粒
别称: NM_001080430.3;CAGF9;TNRC9
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pCDH-CMV-3×FLAG-TOX3-EF1-Puro人源基因质粒
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4279/pCMV-SPORT6-EBAG9人源基因质粒 |
| P4280/pCMV-SPORT6-APH1A人源基因质粒 |
| P4281/pCMV-SPORT6-VSIR（1点突变）人源基因质粒 |
| P4282/pCMV-SPORT6-WDR77人源基因质粒 |
| P4287/pCMV-SPORT6-CRADD人源基因质粒 |
| P4286/PCMV-SPORT6-CCDC127人源基因质粒 |
| P4285/PCMV-SPORT6-CIDEC（5-756bp1同义突变）人源基因质粒 |
| P4284/PCMV-SPORT6-SSSCA1人源基因质粒 |
| P4283/PCMV-SPORT6-AGR2（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4277/pCMV-SPORT6-TSPAN6（1同义突变）人源基因质粒 |
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文献和实验克隆 or 单克隆） --- 一、第一步：载体设计 载体元件由实验目的决定，逐项确认： 元件 选择要点 启动子 普遍高表达选 CMV、EF1α 等；需要模拟内源水平或避免沉默可考虑其他启动子 目的基因 CDS 序列；是否需要做 WB 决定是否加 Flag/HA 等融合标签 荧光标签 是否需要观察感染效率或做活细胞示踪（GFP/mCherry 等） 抗性基因 常用 puromycin（Puro），也可选新霉素（Neomycin）、杀稻瘟菌素（Blasticidin） 其他元件
会怎样"用 CRISPRa。 --- 一、机制差异决定了两者能回答的问题不同 过表达质粒（cDNA / ORF） 外源启动子（CMV、EF1α 等）驱动，表达量与内源调控完全脱钩； 通常只包含单一 CDS，不含内含子和 UTR； 表达量可达到内源的几十到几百倍； 可携带标签（FLAG、HA、GFP）方便检测。 CRISPRa（dCas9-VP64 / VPR / SAM / SunTag） 失活 Cas9（dCas9）融合转录激活域，被 gRNA 引导至靶基因启动子区； 激活的是内源位点，转录本包含完整的内含
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