pECMV-3×FLAG-IL6人源基因质粒

基本信息
名称：pECMV-3×FLAG-IL6人源基因质粒
别称: HGF;HSF;BSF2;IL-6;IFNB2
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：

质粒简介
  pECMV-3×FLAG-IL6是一个人源基因哺乳表达质粒。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                6091 bp ds-DNA     circular SYN 29-SEP-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pECMV-3×FLAG-IL6
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 6091)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Sep 29, 2017 from MiaoLingPlasmid
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..6091
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        235..614
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        615..818
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     promoter        863..881
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     CDS             922..987
                     /codon_start=1
                     /product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
                     enterokinase cleavage site"
                     /label=3xFLAG
                     /translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
     misc_feature    1009..1644
                     /label=IL6
     polyA_signal    1691..1915
                     /label=bGH poly(A) signal
                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
     rep_origin      1961..2389
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        2403..2732
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      2583..2718
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             2799..3593
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /label=Neo
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    3767..3888
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(4339..4924)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(5095..5955)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(5956..6060)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
       61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
      121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
      181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
      241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
      301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
      361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
      421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
      481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
      541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
      601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
      661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
      721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
      781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
      841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
      901 gtttaaactt aagccaccat ggactacaaa gaccatgacg gtgattataa agatcatgac
      961 atcgactaca aggatgacga tgacaagctt ggtaccgagc tcggatccat gaactccttc
     1021 tccacaagcg ccttcggtcc agttgccttc tccctggggc tgctcctggt gttgcctgct
     1081 gccttccctg ccccagtacc cccaggagaa gattccaaag atgtagccgc cccacacaga
     1141 cagccactca cctcttcaga acgaattgac aaacaaattc ggtacatcct cgacggcatc
     1201 tcagccctga gaaaggagac atgtaacaag agtaacatgt gtgaaagcag caaagaggca
     1261 ctggcagaaa acaacctgaa ccttccaaag atggctgaaa aagatggatg cttccaatct
     1321 ggattcaatg aggagacttg cctggtgaaa atcatcactg gtcttttgga gtttgaggta
     1381 tacctagagt acctccagaa cagatttgag agtagtgagg aacaagccag agctgtgcag
     1441 atgagtacaa aagtcctgat ccagttcctg cagaaaaagg caaagaatct agatgcaata
     1501 accacccctg acccaaccac aaatgccagc ctgctgacga agctgcaggc acagaaccag
     1561 tggctgcagg acatgacaac tcatctcatt ctgcgcagct ttaaggagtt cctgcagtcc
     1621 agcctgaggg ctcttcggca aatgtgactc gagtctagag ggcccgttta aacccgctga
     1681 tcagcctcga ctgtgccttc tagttgccag ccatctgttg tttgcccctc ccccgtgcct
     1741 tccttgaccc tggaaggtgc cactcccact gtcctttcct aataaaatga ggaaattgca
     1801 tcgcattgtc tgagtaggtg tcattctatt ctggggggtg gggtggggca ggacagcaag
     1861 ggggaggatt gggaagacaa tagcaggcat gctggggatg cggtgggctc tatggcttct
     1921 gaggcggaaa gaaccagctg gggctctagg gggtatcccc acgcgccctg tagcggcgca
     1981 ttaagcgcgg cgggtgtggt ggttacgcgc agcgtgaccg ctacacttgc cagcgcccta
     2041 gcgcccgctc ctttcgcttt cttcccttcc tttctcgcca cgttcgccgg ctttccccgt
     2101 caagctctaa atcgggggct ccctttaggg ttccgattta gtgctttacg gcacctcgac
     2161 cccaaaaaac ttgattaggg tgatggttca cgtagtgggc catcgccctg atagacggtt
     2221 tttcgccctt tgacgttgga gtccacgttc tttaatagtg gactcttgtt ccaaactgga
     2281 acaacactca accctatctc ggtctattct tttgatttat aagggatttt gccgatttcg
     2341 gcctattggt taaaaaatga gctgatttaa caaaaattta acgcgaatta attctgtgga
     2401 atgtgtgtca gttagggtgt ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa
     2461 gcatgcatct caattagtca gcaaccaggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca
     2521 gaagtatgca aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccat agtcccgccc ctaactccgc
     2581 ccatcccgcc cctaactccg cccagttccg cccattctcc gccccatggc tgactaattt
     2641 tttttattta tgcagaggcc gaggccgcct ctgcctctga gctattccag aagtagtgag
     2701 gaggcttttt tggaggccta ggcttttgca aaaagctccc gggagcttgt atatccattt
     2761 tcggatctga tcaagagaca ggatgaggat cgtttcgcat gattgaacaa gatggattgc
     2821 acgcaggttc tccggccgct tgggtggaga ggctattcgg ctatgactgg gcacaacaga
     2881 caatcggctg ctctgatgcc gccgtgttcc ggctgtcagc gcaggggcgc ccggttcttt
     2941 ttgtcaagac cgacctgtcc ggtgccctga atgaactgca ggacgaggca gcgcggctat
     3001 cgtggctggc cacgacgggc gttccttgcg cagctgtgct cgacgttgtc actgaagcgg
     3061 gaagggactg gctgctattg ggcgaagtgc cggggcagga tctcctgtca tctcaccttg
     3121 ctcctgccga gaaagtatcc atcatggctg atgcaatgcg gcggctgcat acgcttgatc
     3181 cggctacctg cccattcgac caccaagcga aacatcgcat cgagcgagca cgtactcgga
     3241 tggaagccgg tcttgtcgat caggatgatc tggacgaaga gcatcagggg ctcgcgccag
     3301 ccgaactgtt cgccaggctc aaggcgcgca tgcccgacgg cgaggatctc gtcgtgaccc
     3361 atggcgatgc ctgcttgccg aatatcatgg tggaaaatgg ccgcttttct ggattcatcg
     3421 actgtggccg gctgggtgtg gcggaccgct atcaggacat agcgttggct acccgtgata
     3481 ttgctgaaga gcttggcggc gaatgggctg accgcttcct cgtgctttac ggtatcgccg
     3541 ctcccgattc gcagcgcatc gccttctatc gccttcttga cgagttcttc tgagcgggac
     3601 tctggggttc gaaatgaccg accaagcgac gcccaacctg ccatcacgag atttcgattc
     3661 caccgccgcc ttctatgaaa ggttgggctt cggaatcgtt ttccgggacg ccggctggat
     3721 gatcctccag cgcggggatc tcatgctgga gttcttcgcc caccccaact tgtttattgc
     3781 agcttataat ggttacaaat aaagcaatag catcacaaat ttcacaaata aagcattttt
     3841 ttcactgcat tctagttgtg gtttgtccaa actcatcaat gtatcttatc atgtctgtat
     3901 accgtcgacc tctagctaga gcttggcgta atcatggtca tagctgtttc ctgtgtgaaa
     3961 ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat acgagccgga agcataaagt gtaaagcctg
     4021 gggtgcctaa tgagtgagct aactcacatt aattgcgttg cgctcactgc ccgctttcca
     4081 gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg
     4141 tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg
     4201 gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg
     4261 ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa
     4321 ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg
     4381 acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc
     4441 tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc
     4501 ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc
     4561 ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg
     4621 ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc
     4681 actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga
     4741 gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaaga acagtatttg gtatctgcgc
     4801 tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac
     4861 caccgctggt agcggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc
     4921 tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg
     4981 ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta
     5041 aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca
     5101 atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc
     5161 ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc
     5221 tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc
     5281 agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat
     5341 taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt
     5401 tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt cattcagctc
     5461 cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa aagcggttag
     5521 ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat cactcatggt
     5581 tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct tttctgtgac
     5641 tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg cggcgaccga gttgctcttg
     5701 cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc acatagcaga actttaaaag tgctcatcat
     5761 tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga gatccagttc
     5821 gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct tttactttca ccagcgtttc
     5881 tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa
     5941 atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga agcatttatc agggttattg
     6001 tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg
     6061 cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt c
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P1109/pFUPI AoT5Cyp猫头鹰猴基因质粒

P0973/pPH37酵母基因质粒

P1157/pET28a-PPK大肠基因质粒

P3006/pTXB1-Tn5大肠基因质粒

P0543/pAX01-PPK大肠基因质粒

P1889/pMA2775大肠基因质粒

P1991/pdnaKp-EGFP大肠启动子质粒

P1127/pcDNA-4mtD3cpv基因质粒

P0915/pBAV1k-T5-LUX基因质粒

P0815/pTE-10M0X其它基因质粒

P0957/pSR58.6蓝藻基因质粒