pCMV-FLAG-SIRT4人源基因质粒

基本信息
名称：pCMV-FLAG-SIRT4人源基因质粒
别称: SIR2L4
启动子：CMV
复制子: pUC
质粒标签：N-FLAG
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
       Homo sapiens sirtuin 4 (SIRT4)

质粒图谱


质粒序列
ORIGIN
        1 atgaagatga gctttgcgtt gactttcagg tcagcaaaag gccgttggat cgcaaacccc
       61 agccagccgt gctcgaaagc ctccattggg ttatttgtgc cagcaagtcc tcctctggac
      121 cctgagaagg tcaaagagtt acagcgcttc atcacccttt ccaagagact ccttgtgatg
      181 actggggcag gaatctccac cgaatcgggg ataccagact acaggtcaga aaaagtgggg
      241 ctttatgccc gcactgaccg caggcccatc cagcatggtg attttgtccg gagtgcccca
      301 atccgccagc ggtactgggc gagaaacttc gtaggctggc ctcaattctc ctcccaccag
      361 cctaaccctg cacactgggc tttgagcacc tgggagaaac tcggaaagct gtactggttg
      421 gtgacccaaa atgtggatgc tttgcacacc aaggcgggga gtcggcgcct gacagagctc
      481 cacggatgca tggacagggt cctgtgcttg gattgtgggg aacagactcc ccggggggtg
      541 ctgcaagagc gtttccaagt cctgaacccc acctggagtg ctgaggccca tggcctggct
      601 cctgatggtg acgtctttct ctcagaggag caagtccgga gctttcaggt cccaacctgc
      661 gttcaatgtg gaggccatct gaaaccagat gtcgttttct tcggggacac agtgaaccct
      721 gacaaggttg attttgtgca caagcgtgta aaagaagccg actccctctt ggtggtggga
      781 tcatccttgc aggtatactc tggttacagg tttatcctca ctgcctggga gaagaagctc
      841 ccgattgcaa tactgaacat tgggcccaca cggtcggatg acttggcgtg tctgaaactg
      901 aattctcgtt gtggagagtt gctgcctttg atagacccat gctga

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2123/pGFP-HBx病毒基因质粒

P0857/pUC57s-CLSTN1-d鸭源基因质粒

P1091/TAL3393斑马鱼基因质粒

P1145/TAL3392斑马鱼基因质粒

P1682/DsRed-Rab5 WT狗源基因质粒

P1158/pInt噬菌体基因质粒

P1176/pJV62噬菌体基因质粒

P1177/pJV53噬菌体基因质粒

P1635/pET32a-MS2噬菌体基因质粒

P4522/pMS2-GFP噬菌体基因质粒

P0314/pTrc-Taq聚合酶基因质粒