pLEGFP-WT-STAT3人源基因质粒

pLEGFP-WT-STAT3人源基因质粒

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  • 上海
  • P1153
  • 2025年07月14日
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    • 技术资料
    • 保存条件

      -20

    • 保质期

      2年

    • 英文名

      没有EGFP融合标签

    • 库存

      100

    • 供应商

      上海烜雅生物科技有限公司

    • 规格

      干粉/液体

    基本信息
    名称:pLEGFP-WT-STAT3人源基因质粒
    别称: 没有EGFP融合标签
    启动子:CMV
    复制子: pUC
    质粒大小:9237bp
    质粒标签:C-FLAG
    原核抗性: Amp
    真核抗性:  新霉素Neo/遗传霉素G418
    筛选标记:G418
    克隆菌株: DH5a
    培养条件: 37度

    质粒属性
    载体宿主:哺乳细胞
    载体用途:蛋白表达
    片段类型:基因CDS
    基因种属:
    基因类型:ORF
    原核抗性:氨苄青霉素
    真核抗性:
    荧光蛋白:绿色

    质粒简介
       pLEGFP-WT-STAT3 是一个过表达人源STAT3基因的逆病毒质粒,STAT3基因的C端融合了FLAG标签,但没有融合EGFP标签。

    质粒图谱
    pLEGFP-WT-STAT3人源基因质粒

    质粒序列
    LOCUS       Exported                9237 bp ds-DNA     circular SYN 11-OCT-2017
    DEFINITION  synthetic circular DNA
    ACCESSION   .
    VERSION     .
    KEYWORDS    .
    SOURCE      synthetic DNA construct
      ORGANISM  synthetic DNA construct
    REFERENCE   1  (bases 1 to 9237)
      AUTHORS   .
      TITLE     Direct Submission
                http://www.miaolingbio.com
    FEATURES             Location/Qualifiers
         source          1..9237
                         /organism="synthetic DNA construct"
                         /mol_type="other DNA"
         enhancer        1..304
                         /label=CMV enhancer
                         /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
         promoter        305..508
                         /label=CMV promoter
                         /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                         promoter"
         misc_feature    572..2881
                         /label=STAT3
         CDS             2882..2905
                         /codon_start=1
                         /product="FLAG(R) epitope tag, followed by an enterokinase 
                         cleavage site"
                         /label=FLAG
                         /translation="DYKDDDDK"
         regulatory      2960..2969
                         /regulatory_class="other"
                         /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 
                         of translation (Kozak, 1987)"
         CDS             2966..3685
                         /codon_start=1
                         /product="enhanced GFP"
                         /label=EGFP
                         /note="mammalian codon-optimized"
                         /translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
                         KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
                         GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
                         VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
                         EFVTAAGITLGMDELYK"
         LTR             3763..4356
                         /note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia 
                         virus"
         misc_feature    4567..4707
                         /label=bom
                         /note="basis of mobility region from pBR322"
         rep_origin      complement(4893..5481)
                         /direction=LEFT
                         /label=ori
                         /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                         replication"
         CDS             complement(5652..6512)
                         /codon_start=1
                         /gene="bla"
                         /product="beta-lactamase"
                         /label=AmpR
                         /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                         related antibiotics"
                         /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                         ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                         PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                         EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                         LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                         LIKHW"
         promoter        complement(6513..6617)
                         /gene="bla"
                         /label=AmpR promoter
         LTR             7275..7450
                         /label=5' LTR (truncated)
                         /note="truncated long terminal repeat from Moloney murine 
                         sarcoma virus"
         misc_feature    7513..7712
                         /label=MMLV Psi
                         /note="packaging signal of Moloney murine leukemia virus 
                         (MMLV)"
         CDS             7913..8329
                         /label=gag (truncated)
                         /note="truncated Moloney murine leukemia virus (MMLV) gag 
                         gene lacking the start codon"
         CDS             8373..9167
                         /codon_start=1
                         /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                         /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                         /label=Neo
                         /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                         (Geneticin(R))"
                         /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                         VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                         SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                         GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                         LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
    ORIGIN
            1 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
           61 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
          121 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
          181 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
          241 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
          301 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
          361 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
          421 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
          481 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
          541 ccggactcag atctcgagct caagcttcag gatggcccaa tggaatcagc tacagcagct
          601 tgacacacgg tacctggagc agctccatca gctctacagt gacagcttcc caatggagct
          661 gcggcagttt ctggcccctt ggattgagag tcaagattgg gcatatgcgg ccagcaaaga
          721 atcacatgcc actttggtgt ttcataatct cctgggagag attgaccagc agtatagccg
          781 cttcctgcaa gagtcgaatg ttctctatca gcacaatcta cgaagaatca agcagtttct
          841 tcagagcagg tatcttgaga agccaatgga gattgcccgg attgtggccc ggtgcctgtg
          901 ggaagaatca cgccttctac agactgcagc cactgcggcc cagcaagggg gccaggccaa
          961 ccaccccaca gcagccgtgg tgacggagaa gcagcagatg ctggagcagc accttcagga
         1021 tgtccggaag agagtgcagg atctagaaca gaaaatgaaa gtggtagaga atctccagga
         1081 tgactttgat ttcaactata aaaccctcaa gagtcaagga gacatgcaag atctgaatgg
         1141 aaacaaccag tcagtgacca ggcagaagat gcagcagctg gaacagatgc tcactgcgct
         1201 ggaccagatg cggagaagca tcgtgagtga gctggcgggg cttttgtcag cgatggagta
         1261 cgtgcagaaa actctcacgg acgaggagct ggctgactgg aagaggcggc aacagattgc
         1321 ctgcattgga ggcccgccca acatctgcct agatcggcta gaaaactgga taacgtcatt
         1381 agcagaatct caacttcaga cccgtcaaca aattaagaaa ctggaggagt tgcagcaaaa
         1441 agtttcctac aaaggggacc ccattgtaca gcaccggccg atgctggagg agagaatcgt
         1501 ggagctgttt agaaacttaa tgaaaagtgc ctttgtggtg gagcggcagc cctgcatgcc
         1561 catgcatcct gaccggcccc tcgtcatcaa gaccggcgtc cagttcacta ctaaagtcag
         1621 gttgctggtc aaattccctg agttgaatta tcagcttaaa attaaagtgt gcattgacaa
         1681 agactctggg gacgttgcag ctctcagagg atcccggaaa tttaacattc tgggcacaaa
         1741 cacaaaagtg atgaacatgg aagaatccaa caacggcagc ctctctgcag aattcaaaca
         1801 cttgaccctg agggagcaga gatgtgggaa tgggggccga gccaattgtg atgcttccct
         1861 gattgtgact gaggagctgc acctgatcac ctttgagacc gaggtgtatc accaaggcct
         1921 caagattgac ctagagaccc actccttgcc agttgtggtg atctccaaca tctgtcagat
         1981 gccaaatgcc tgggcgtcca tcctgtggta caacatgctg accaacaatc ccaagaatgt
         2041 aaactttttt accaagcccc caattggaac ctgggatcaa gtggccgagg tcctgagctg
         2101 gcagttctcc tccaccacca agcgaggact gagcatcgag cagctgacta cactggcaga
         2161 gaaactcttg ggacctggtg tgaattattc agggtgtcag atcacatggg ctaaattttg
         2221 caaagaaaac atggctggca agggcttctc cttctgggtc tggctggaca atatcattga
         2281 ccttgtgaaa aagtacatcc tggccctttg gaacgaaggg tacatcatgg gctttatcag
         2341 taaggagcgg gagcgggcca tcttgagcac taagcctcca ggcaccttcc tgctaagatt
         2401 cagtgaaagc agcaaagaag gaggcgtcac tttcacttgg gtggagaagg acatcagcgg
         2461 taagacccag atccagtccg tggaaccata cacaaagcag cagctgaaca acatgtcatt
         2521 tgctgaaatc atcatgggct ataagatcat ggatgctacc aatatcctgg tgtctccact
         2581 ggtctatctc tatcctgaca ttcccaagga ggaggcattc ggaaagtatt gtcggccaga
         2641 gagccaggag catcctgaag ctgacccagg tagcgctgcc ccatacctga agaccaagtt
         2701 tatctgtgtg acaccaacga cctgcagcaa taccattgac ctgccgatgt ccccccgcac
         2761 tttagattca ttgatgcagt ttggaaataa tggtgaaggt gctgaaccct cagcaggagg
         2821 gcagtttgag tccctcacct ttgacatgga gttgacctcg gagtgcgcta cctcccccat
         2881 ggactacaag gacgacgatg acaagtgaaa gcttcgaatt ctgcagtcga cggtaccgcg
         2941 ggcccgggat ccaccggtcg ccaccatggt gagcaagggc gaggagctgt tcaccggggt
         3001 ggtgcccatc ctggtcgagc tggacggcga cgtaaacggc cacaagttca gcgtgtccgg
         3061 cgagggcgag ggcgatgcca cctacggcaa gctgaccctg aagttcatct gcaccaccgg
         3121 caagctgccc gtgccctggc ccaccctcgt gaccaccctg acctacggcg tgcagtgctt
         3181 cagccgctac cccgaccaca tgaagcagca cgacttcttc aagtccgcca tgcccgaagg
         3241 ctacgtccag gagcgcacca tcttcttcaa ggacgacggc aactacaaga cccgcgccga
         3301 ggtgaagttc gagggcgaca ccctggtgaa ccgcatcgag ctgaagggca tcgacttcaa
         3361 ggaggacggc aacatcctgg ggcacaagct ggagtacaac tacaacagcc acaacgtcta
         3421 tatcatggcc gacaagcaga agaacggcat caaggtgaac ttcaagatcc gccacaacat
         3481 cgaggacggc agcgtgcagc tcgccgacca ctaccagcag aacaccccca tcggcgacgg
         3541 ccccgtgctg ctgcccgaca accactacct gagcacccag tccgccctga gcaaagaccc
         3601 caacgagaag cgcgatcaca tggtcctgct ggagttcgtg accgccgccg ggatcactct
         3661 cggcatggac gagctgtaca agtaaagcgg ccgcgactct agccttaatg gcctaacatc
         3721 gataaaataa aagattttat ttagtctcca gaaaaagggg ggaatgaaag accccacctg
         3781 taggtttggc aagctagctt aagtaacgcc attttgcaag gcatggaaaa atacataact
         3841 gagaatagag aagttcagat caaggtcagg aacagatgga acagctgaat atgggccaaa
         3901 caggatatct gtggtaagca gttcctgccc cggctcaggg ccaagaacag atggaacagc
         3961 tgaatatggg ccaaacagga tatctgtggt aagcagttcc tgccccggct cagggccaag
         4021 aacagatggt ccccagatgc ggtccagccc tcagcagttt ctagagaacc atcagatgtt
         4081 tccagggtgc cccaaggacc tgaaatgacc ctgtgcctta tttgaactaa ccaatcagtt
         4141 cgcttctcgc ttctgttcgc gcgcttctgc tccccgagct caataaaaga gcccacaacc
         4201 cctcactcgg ggcgccagtc ctccgattga ctgagtcgcc cgggtacccg tgtatccaat
         4261 aaaccctctt gcagttgcat ccgacttgtg gtctcgctgt tccttgggag ggtctcctct
         4321 gagtgattga ctacccgtca gcgggggtct ttcatttggg ggctcgtccg ggatcgggag
         4381 acccctgccc agggaccacc gacccaccac cgggaggtaa gctggctgcc tcgcgcgttt
         4441 cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca cagcttgtct
         4501 gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg ttggcgggtg
         4561 tcggggcgca gccatgaccc agtcacgtag cgatagcgga gtgtatactg gcttaactat
         4621 gcggcatcag agcagattgt actgagagtg caccatatgc ggtgtgaaat accgcacaga
         4681 tgcgtaagga gaaaataccg catcaggcgc tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg
         4741 cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt aatacggtta
         4801 tccacagaat caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc
         4861 aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc ccctgacgag
         4921 catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac
         4981 caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc
         5041 ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt
         5101 aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc
         5161 gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga
         5221 cacgacttat cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta
         5281 ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag aaggacagta
         5341 tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg tagctcttga
         5401 tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg
         5461 cgcagaaaaa aaggatctca agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag
         5521 tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc
         5581 tagatccttt taaattaaaa atgaagtttt aaatcaatct aaagtatata tgagtaaact
         5641 tggtctgaca gttaccaatg cttaatcagt gaggcaccta tctcagcgat ctgtctattt
         5701 cgttcatcca tagttgcctg actccccgtc gtgtagataa ctacgatacg ggagggctta
         5761 ccatctggcc ccagtgctgc aatgataccg cgagacccac gctcaccggc tccagattta
         5821 tcagcaataa accagccagc cggaagggcc gagcgcagaa gtggtcctgc aactttatcc
         5881 gcctccatcc agtctattaa ttgttgccgg gaagctagag taagtagttc gccagttaat
         5941 agtttgcgca acgttgttgc cattgctgca ggcatcgtgg tgtcacgctc gtcgtttggt
         6001 atggcttcat tcagctccgg ttcccaacga tcaaggcgag ttacatgatc ccccatgttg
         6061 tgcaaaaaag cggttagctc cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca
         6121 gtgttatcac tcatggttat ggcagcactg cataattctc ttactgtcat gccatccgta
         6181 agatgctttt ctgtgactgg tgagtactca accaagtcat tctgagaata gtgtatgcgg
         6241 cgaccgagtt gctcttgccc ggcgtcaaca cgggataata ccgcgccaca tagcagaact
         6301 ttaaaagtgc tcatcattgg aaaacgttct tcggggcgaa aactctcaag gatcttaccg
         6361 ctgttgagat ccagttcgat gtaacccact cgtgcaccca actgatcttc agcatctttt
         6421 actttcacca gcgtttctgg gtgagcaaaa acaggaaggc aaaatgccgc aaaaaaggga
         6481 ataagggcga cacggaaatg ttgaatactc atactcttcc tttttcaata ttattgaagc
         6541 atttatcagg gttattgtct catgagcgga tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa
         6601 caaatagggg ttccgcgcac atttccccga aaagtgccac ctgacgtcta agaaaccatt
         6661 attatcatga cattaaccta taaaaatagg cgtatcacga ggccctttcg tcttcaagaa
         6721 ttcataccag atcaccgaaa actgtcctcc aaatgtgtcc ccctcacact cccaaattcg
         6781 cgggcttctg cctcttagac cactctaccc tattccccac actcaccgga gccaaagccg
         6841 cggcccttcc gtttctttgc ttttgaaaga ccccacccgt aggtggcaag ctagcttaag
         6901 taacgccact ttgcaaggca tggaaaaata cataactgag aatagaaaag ttcagatcaa
         6961 ggtcaggaac aaagaaacag ctgaatacca aacaggatat ctgtggtaag cggttcctgc
         7021 cccggctcag ggccaagaac agatgagaca gctgagtgat gggccaaaca ggatatctgt
         7081 ggtaagcagt tcctgccccg gctcggggcc aagaacagat ggtccccaga tgcggtccag
         7141 ccctcagcag tttctagtga atcatcagat gtttccaggg tgccccaagg acctgaaaat
         7201 gaccctgtac cttatttgaa ctaaccaatc agttcgcttc tcgcttctgt tcgcgcgctt
         7261 ccgctctccg agctcaataa aagagcccac aacccctcac tcggcgcgcc agtcttccga
         7321 tagactgcgt cgcccgggta cccgtattcc caataaagcc tcttgctgtt tgcatccgaa
         7381 tcgtggtctc gctgttcctt gggagggtct cctctgagtg attgactacc cacgacgggg
         7441 gtctttcatt tgggggctcg tccgggattt ggagacccct gcccagggac caccgaccca
         7501 ccaccgggag gtaagctggc cagcaactta tctgtgtctg tccgattgtc tagtgtctat
         7561 gtttgatgtt atgcgcctgc gtctgtacta gttagctaac tagctctgta tctggcggac
         7621 ccgtggtgga actgacgagt tctgaacacc cggccgcaac cctgggagac gtcccaggga
         7681 ctttgggggc cgtttttgtg gcccgacctg aggaagggag tcgatgtgga atccgacccc
         7741 gtcaggatat gtggttctgg taggagacga gaacctaaaa cagttcccgc ctccgtctga
         7801 atttttgctt tcggtttgga accgaagccg cgcgtcttgt ctgctgcagc gctgcagcat
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         8821 ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg aagagcatca ggggctcgcg ccagccgaac
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         9061 aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct tcctcgtgct ttacggtatc gccgctcccg
         9121 attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc ttgacgagtt cttctgagcg ggactctggg
         9181 gttcgaatag taatcaatta cggggtcatt agttcatagc ccatatatgg agttccg
    //

    质粒菌株产品操作说明书
    一、扩增流程
             收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
             1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
                  收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
                  1100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
                  加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37培养45min
                  6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
                  将平板正向培养1h,再倒置37培养14h。如果要求是30度则培养20h
    (菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
                  挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
            2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
                  四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
            3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4,保质期7天)
                  穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
            4、菌落平板(冰袋运输,存于4,保质期7天)
                  直接挑取单菌落至液体培养基中。
            5、液体质粒(冰袋运输,存于-20,保质期90天)
                  单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
            6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
                  收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。

    二、转化图片
    pLEGFP-WT-STAT3人源基因质粒
    pLEGFP-WT-STAT3人源基因质粒
    P2881/pCDNA3.1-EGFP-GOT1-p猪源基因质粒
    P4193/pCDNA3.1-HA-STAT2-p-Myc猪源基因质粒
    P4194/pCDNA3.1-HA-STAT1-p-Myc猪源基因质粒
    P4195/pCDNA3.1-3×HA-IKK-p猪源基因质粒
    P4196/pCDNA3.1-3×HA-TRAF3-p猪源基因质粒
    P1922/pLKO.1-EGFRshRNA1-p猪源干扰质粒
    P1923/pLKO.1-EGFRshRNA2-p猪源干扰质粒
    P1924/pLKO.1-EGFRshRNA3-p猪源干扰质粒
    P2201/pLVX-S100A9shRNA1-p猪源干扰质粒
    P2202/pLVX-S100A9shRNA2-p猪源干扰质粒
    P2203/pLVX-S100A9shRNA3-p猪源干扰质粒
    P0601/pShuttle-Survium病毒基因质粒

     

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