pET-GST大肠表达质粒

基本信息
名称：pET-GST大肠表达质粒
别称: pETGST

启动子:	T7
复制子:	pBR322
终止子:	T7 terminator
质粒分类:	大肠杆菌载体；PET系列表达质粒
质粒大小:	3.7kb
质粒标签:	N-GST,C-6×His，N-P3C
原核抗性:	Amp
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	BL21(DE3)
培养条件:	37℃，有氧，LB
诱导方式:	IPTG或乳糖及其类似物
5'测序引物:	T7:TAATACGACTCACTATAGGG
3'测序引物:	T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG

质粒属性

载体宿主：	大肠杆菌
载体用途：	蛋白表达
基因种属：	空载体
基因类型：	ORF
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
         pET—GST表达载体采用T7启动子和GST融合表达，同时选用人鼻病毒14亚型3C蛋白酶专一性切割位点。此外，C端还添加了6个His，便于采用chelating sepharose亲和层析。本载体表达的融合蛋白可采用吸附GST的亲和层析和6个His的chelating sepharose双重亲和层析，极大地方便了下游纯化。GST融合表达背景文献在medline里极为丰富，有数百个基因采用GST融合表达成功。

质粒图谱


质粒序列
pET-GST部分序列，仅供参考            877 bp ds-DNA     linear   UNA 05-MAR-2019
DEFINITION  natural linear DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..877
                     /organism="unspecified"
                     /mol_type="genomic DNA"
     promoter        51..69
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     CDS             115..768
                     /codon_start=1
                     /product="glutathione S-transferase from Schistosoma 
                     japonicum"
                     /label=GST
                     /translation="MSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKK
                     FELGLEFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRY
                     GVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVL
                     YMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFGGGDHPPK"
     CDS             790..813
                     /codon_start=1
                     /product="recognition and cleavage site for human 
                     rhinovirus 3C and PreScission proteases"
                     /label=HRV 3C site
                     /translation="LEVLFQGP"
     CDS             841..858
                     /codon_start=1
                     /product="6xHis affinity tag"
                     /label=6xHis
                     /translation="HHHHHH"
BASE COUNT         255 a         176 c         189 g         256 t
ORIGIN
        1 tccccgcgcg ttggccgatt cattaatgca ggatctcgat cccgcgaaat taatacgact
       61 cactataggg agaccacaac ggtttccctc tagatcacac aggaaacagt attcatgtcc
      121 cctatactag gttattggaa aattaagggc cttgtgcaac ccactcgact tcttttggaa
      181 tatcttgaag aaaaatatga agagcatttg tatgagcgcg atgaaggtga taaatggcga
      241 aacaaaaagt ttgaattggg tttggagttt cccaatcttc cttattatat tgatggtgat
      301 gttaaattaa cacagtctat ggccatcata cgttatatag ctgacaagca caacatgttg
      361 ggtggttgtc caaaagagcg tgcagagatt tcaatgcttg aaggagcggt tttggatatt
      421 agatacggtg tttcgagaat tgcatatagt aaagactttg aaactctcaa agttgatttt
      481 cttagcaagc tacctgaaat gctgaaaatg ttcgaagatc gtttatgtca taaaacatat
      541 ttaaatggtg atcatgtaac ccatcctgac ttcatgttgt atgacgctct tgatgttgtt
      601 ttatacatgg acccaatgtg cctggatgcg ttcccaaaat tagtttgttt taaaaaacgt
      661 attgaagcta tcccacaaat tgataagtac ttgaaatcca gcaagtatat agcatggcct
      721 ttgcagggct ggcaagccac gtttggtggt ggcgaccatc ctccaaaatc ggacagcatg
      781 ccagactctc tcgaagttct gtttcagggt ccagcaggat ccgcagaatt cagcgctagc
      841 caccatcatc atcatcatta agcttgatcc ggctgct
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4855/pCRISPomyces-1大肠敲除质粒

P1031/pCRISPomyces-2大肠敲除质粒

P1931/BPK764大肠敲除质粒

P1932/MSP1673大肠敲除质粒

P1827/pJYS3_ΔcrtYf大肠敲除质粒

P0748/pET-NLS-Cas9-6xHis大肠敲除质粒

P0783/pMJ806大肠敲除质粒

P0779/pwtCas9-bacteria大肠敲除质粒

P0325/pET22b-SaCas9大肠敲除质粒

P0435/pdCas9-bacteria大肠敲除质粒

P2273/pMJ826大肠基因编辑质粒