p3×FLAG-SUMO3-A99V人源基因质粒

基本信息
名称：p3×FLAG-SUMO3-A99V人源基因质粒
别称: SMT3A;Smt3B;SMT3H1;SUMO-3
启动子:  CMV
复制子: pUC
质粒分类:  基因文库质粒；人源哺乳细胞表达质粒
原核抗性: Amp
筛选标记:  G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：

质粒简介
  Homo sapiens small ubiquitin-like modifier 3 (SUMO3)

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                6560 bp ds-DNA     circular SYN 27-FEB-2018
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..6560
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        318..697
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        698..901
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     CDS             931..996
                     /codon_start=1
                     /product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
                     enterokinase cleavage site"
                     /label=3xFLAG
                     /translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
     CDS             1000..1311
                     /codon_start=1
                     /label=SUMO3-A99V
                     /translation="MSEEKPKEGVKTENDHINLKVAGQDGSVVQFKIKRHTPLSKLMKA
                     YCERQGLSMRQIRFRFDGQPINETDTPAQLEMEDEDTIDVFQQQTGGVPESSLVGHSF"
     polyA_signal    1319..1941
                     /label=hGH poly(A) signal
                     /note="human growth hormone polyadenylation signal"
     promoter        1983..2280
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     CDS             2334..3128
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /label=Neo
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    3780..3914
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(4354..4942)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(5113..5973)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(5974..6078)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     rep_origin      6105..6560
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
        1 ccattcgcca ttcaggctgc gcaactgttg ggaagggcga tcggtgcggg cctcttcgct
       61 attacgccag ctggcgaaag ggggatgtgc tgcaaggcga ttaagttggg taacgccagg
      121 gttttcccag tcacgacgtt gtaaaacgac ggccagtgcc aagctgatct atacattgaa
      181 tcaatattgg caattagcca tattagtcat tggttatata gcataaatca atattggcta
      241 ttggccattg catacgttgt atctatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc
      301 aatatgaccg ccatgttgac attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg
      361 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc
      421 gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat
      481 agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc
      541 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtccg ccccctattg acgtcaatga
      601 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttacgggact ttcctacttg
      661 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacac
      721 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt
      781 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaataaccc
      841 cgccccgttg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc
      901 tcgtttagtg aaccgtcaga attaaccatg gactacaaag accatgacgg tgattataaa
      961 gatcatgaca tcgattacaa ggatgacgat gacaagctta tgtccgagga gaagcccaag
     1021 gagggtgtga agacagagaa tgaccacatc aacctgaagg tggccgggca ggacggctcc
     1081 gtggtgcagt tcaagatcaa gaggcacacg ccgctgagca agctgatgaa ggcctactgc
     1141 gagaggcagg gcttgtcaat gaggcagatc agattcaggt tcgacgggca gccaatcaat
     1201 gaaactgaca ctccagcaca gctggagatg gaggacgagg acaccatcga cgtgttccag
     1261 cagcagacgg gaggtgtgcc ggagagcagc ctggtagggc acagtttcta gggatcccgg
     1321 gtggcatccc tgtgacccct ccccagtgcc tctcctggcc ctggaagttg ccactccagt
     1381 gcccaccagc cttgtcctaa taaaattaag ttgcatcatt ttgtctgact aggtgtcctt
     1441 ctataatatt atggggtgga ggggggtggt atggagcaag gggcaagttg ggaagacaac
     1501 ctgtagggcc tgcggggtct attgggaacc aagctggagt gcagtggcac aatcttggct
     1561 cactgcaatc tccgcctcct gggttcaagc gattctcctg cctcagcctc ccgagttgtt
     1621 gggattccag gcatgcatga ccaggctcag ctaatttttg tttttttggt agagacgggg
     1681 tttcaccata ttggccaggc tggtctccaa ctcctaatct caggtgatct acccaccttg
     1741 gcctcccaaa ttgctgggat tacaggcgtg aaccactgct cccttccctg tccttctgat
     1801 tttaaaataa ctataccagc aggaggacgt ccagacacag cataggctac ctggccatgc
     1861 ccaaccggtg ggacatttga gttgcttgct tggcactgtc ctctcatgcg ttgggtccac
     1921 tcagtagatg cctgttgaat tgggtacgcg gccagcttgg ctgtggaatg tgtgtcagtt
     1981 agggtgtgga aagtccccag gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa
     2041 ttagtcagca accaggtgtg gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag
     2101 catgcatctc aattagtcag caaccatagt cccgccccta actccgccca tcccgcccct
     2161 aactccgccc agttccgccc attctccgcc ccatggctga ctaatttttt ttatttatgc
     2221 agaggccgag gccgcctcgg cctctgagct attccagaag tagtgaggag gcttttttgg
     2281 aggaattgat cagcttggga tctgatcaag agacaggatg aggatcgttt cgcatgattg
     2341 aacaagatgg attgcacgca ggttctccgg ccgcttgggt ggagaggcta ttcggctatg
     2401 actgggcaca acagacaatc ggctgctctg atgccgccgt gttccggctg tcagcgcagg
     2461 ggcgcccggt tctttttgtc aagaccgacc tgtccggtgc cctgaatgaa ctgcaggacg
     2521 aggcagcgcg gctatcgtgg ctggccacga cgggcgttcc ttgcgcagct gtgctcgacg
     2581 ttgtcactga agcgggaagg gactggctgc tattgggcga agtgccgggg caggatctcc
     2641 tgtcatctca ccttgctcct gccgagaaag tatccatcat ggctgatgca atgcggcggc
     2701 tgcatacgct tgatccggct acctgcccat tcgaccacca agcgaaacat cgcatcgagc
     2761 gagcacgtac tcggatggaa gccggtcttg tcgatcagga tgatctggac gaagagcatc
     2821 aggggctcgc gccagccgaa ctgttcgcca ggctcaaggc gcgcatgccc gacggcgagg
     2881 atctcgtcgt gacccatggc gatgcctgct tgccgaatat catggtggaa aatggccgct
     2941 tttctggatt catcgactgt ggccggctgg gtgtggcgga ccgctatcag gacatagcgt
     3001 tggctacccg tgatattgct gaagagcttg gcggcgaatg ggctgaccgc ttcctcgtgc
     3061 tttacggtat cgccgctccc gattcgcagc gcatcgcctt ctatcgcctt cttgacgagt
     3121 tcttctgagc gggactctgg ggttcgaaat gaccgaccaa gcgacgccca acctgccatc
     3181 acgagatttc gattccaccg ccgccttcta tgaaaggttg ggcttcggaa tcgttttccg
     3241 ggacgccggc tggatgatcc tccagcgcgg ggatctcatg ctggagttct tcgcccaccc
     3301 cgggctcgat cccctcgcga gttggttcag ctgctgcctg aggctggacg acctcgcgga
     3361 gttctaccgg cagtgcaaat ccgtcggcat ccaggaaacc agcagcggct atccgcgcat
     3421 ccatgccccc gaactgcagg agtggggagg cacgatggcc gctttggtcg acccggacgg
     3481 gacgctcctg cgcctgatac agaacgaatt gcttgcaggc atctcatgag tgtgtcttcc
     3541 cgttttccgc ctgaggtcac tgcgtggatg gagcgctggc gcctgctgcg cgacggcgag
     3601 ctgctcacca cccactcgcc aagctggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct ggcgtttttc
     3661 cataggctcc gccgatcata atcagccata ccacatttgt agaggtttta cttgctttaa
     3721 aaaacctccc acacctcccc ctgaacctga aacataaaat gaatgcaatt gttgttgtta
     3781 acttgtttat tgcagcttat aatggttaca aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa
     3841 ataaagcatt tttttcactg cattctagtt gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt
     3901 atcatgtctg gatcaattcc ctatagtgag tcgtattaaa ttcgtaatca tgtcatagct
     3961 gtttcctgtg tgaaattgtt atccgctcac aattccacac aacatacgag ccggaagcat
     4021 aaagtgtaaa gcctggggtg cctaatgagt gagctaactc acattaattg cgttgcgctc
     4081 actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg
     4141 cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct
     4201 gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt
     4261 atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc
     4321 caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc cccctgacga
     4381 gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata
     4441 ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac
     4501 cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg
     4561 taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc
     4621 cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag
     4681 acacgactta tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt
     4741 aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaagaacagt
     4801 atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg
     4861 atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac
     4921 gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca
     4981 gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac
     5041 ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac
     5101 ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt
     5161 tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt cgtgtagata actacgatac gggagggctt
     5221 accatctggc cccagtgctg caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt
     5281 atcagcaata aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc
     5341 cgcctccatc cagtctatta attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa
     5401 tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg
     5461 tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt
     5521 gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc
     5581 agtgttatca ctcatggtta tggcagcact gcataattct cttactgtca tgccatccgt
     5641 aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg
     5701 gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat acgggataat accgcgccac atagcagaac
     5761 tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc
     5821 gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt
     5881 tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg
     5941 aataagggcg acacggaaat gttgaatact catactcttc ctttttcaat attattgaag
     6001 catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt agaaaaataa
     6061 acaaataggg gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca cctgacgcgc cctgtagcgg
     6121 cgcattaagc gcggcgggtg tggtggttac gcgcagcgtg accgctacac ttgccagcgc
     6181 cctagcgccc gctcctttcg ctttcttccc ttcctttctc gccacgttcg ccggctttcc
     6241 ccgtcaagct ctaaatcggg ggctcccttt agggttccga tttagtgctt tacggcacct
     6301 cgaccccaaa aaacttgatt agggtgatgg ttcacgtagt gggccatcgc cctgatagac
     6361 ggtttttcgc cctttgacgt tggagtccac gttctttaat agtggactct tgttccaaac
     6421 tggaacaaca ctcaacccta tctcggtcta ttcttttgat ttataaggga ttttgccgat
     6481 ttcggcctat tggttaaaaa atgagctgat ttaacaaaaa tttaacgcga attttaacaa
     6541 aatattaacg cttacaattt
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2917/pCR4-TOPO-A2ML1人源基因质粒

P2918/pCR4-TOPO-GALNT9（3同义突变）人源基因质粒

P2935/pCR4-TOPO-BTBD11人源基因质粒

P2936/pCR4-TOPO-TMSB4X人源基因质粒

P2937/pCR-BluntII-TOPO-USP22人源基因质粒

P3075/pCR4-TOPO-C20orf96（2同义突变）人源基因质粒

P4826/pCR-BluntII-TOPO-CHRM3人源基因质粒

P4827/pCR4-TOPO-CHRM4人源基因质粒

P4828/pCR4-TOPO-DRD1（1同义突变）人源基因质粒

P3076/pCMV-SPORT6-SEMA4G人源基因质粒

P3077/pOTB7-PANK2人源基因质粒