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- 2026年01月16日
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_003352.4;DAP1;GMP1;PIC1;SMT3;UBL1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：p3×FLAG-SUMO1人源基因质粒
别称: NM_003352.4;DAP1;GMP1;PIC1;SMT3;UBL1
启动子: CMV
复制子: pUC
质粒分类: 基因文库质粒；人源哺乳细胞表达质粒
原核抗性: Amp
筛选标记: G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
Homo sapiens small ubiquitin-like modifier 1 (SUMO1
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6556 bp ds-DNA circular SYN 27-FEB-2018
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6556
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 318..697
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 698..901
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 931..996
/codon_start=1
/product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
enterokinase cleavage site"
/note="3xFLAG"
/translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
CDS 1000..1305
/codon_start=1
/note="SUMO1"
/translation="MSDQEAKPSTEDLGDKKEGEYIKLKVIGQDSSEIHFKVKMTTHLK
KLKESYCQRQGVPMNSLRFLFEGQRIADNHTPKELGMEEEDVIEVYQEQTGGHSTV"
polyA_signal 1315..1937
/note="hGH poly(A) signal"
/note="human growth hormone polyadenylation signal"
promoter 1979..2276
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
CDS 2330..3124
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="Neo"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 3776..3910
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
promoter complement(3916..3934)
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
rep_origin complement(4350..4938)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(5109..5969)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(5970..6074)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
rep_origin 6101..6556
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 ccattcgcca ttcaggctgc gcaactgttg ggaagggcga tcggtgcggg cctcttcgct
61 attacgccag ctggcgaaag ggggatgtgc tgcaaggcga ttaagttggg taacgccagg
121 gttttcccag tcacgacgtt gtaaaacgac ggccagtgcc aagctgatct atacattgaa
181 tcaatattgg caattagcca tattagtcat tggttatata gcataaatca atattggcta
241 ttggccattg catacgttgt atctatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc
301 aatatgaccg ccatgttgac attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg
361 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc
421 gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat
481 agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc
541 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtccg ccccctattg acgtcaatga
601 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttacgggact ttcctacttg
661 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacac
721 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt
781 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaataaccc
841 cgccccgttg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc
901 tcgtttagtg aaccgtcaga attaaccatg gactacaaag accatgacgg tgattataaa
961 gatcatgaca tcgattacaa ggatgacgat gacaagctta tgtctgacca ggaggcaaaa
1021 ccttcaactg aggacttggg ggataagaag gaaggtgaat atattaaact caaagtcatt
1081 ggacaggata gcagtgagat tcacttcaaa gtgaaaatga caacacatct caagaaactc
1141 aaagaatcat actgtcaaag acagggtgtt ccaatgaatt cactcaggtt tctctttgag
1201 ggtcagagaa ttgctgataa tcatactcca aaagaactgg gaatggagga agaagatgtg
1261 attgaagttt atcaggaaca aacggggggt cattcaacag tttaggcgga tcccgggtgg
1321 catccctgtg acccctcccc agtgcctctc ctggccctgg aagttgccac tccagtgccc
1381 accagccttg tcctaataaa attaagttgc atcattttgt ctgactaggt gtccttctat
1441 aatattatgg ggtggagggg ggtggtatgg agcaaggggc aagttgggaa gacaacctgt
1501 agggcctgcg gggtctattg ggaaccaagc tggagtgcag tggcacaatc ttggctcact
1561 gcaatctccg cctcctgggt tcaagcgatt ctcctgcctc agcctcccga gttgttggga
1621 ttccaggcat gcatgaccag gctcagctaa tttttgtttt tttggtagag acggggtttc
1681 accatattgg ccaggctggt ctccaactcc taatctcagg tgatctaccc accttggcct
1741 cccaaattgc tgggattaca ggcgtgaacc actgctccct tccctgtcct tctgatttta
1801 aaataactat accagcagga ggacgtccag acacagcata ggctacctgg ccatgcccaa
1861 ccggtgggac atttgagttg cttgcttggc actgtcctct catgcgttgg gtccactcag
1921 tagatgcctg ttgaattggg tacgcggcca gcttggctgt ggaatgtgtg tcagttaggg
1981 tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag
2041 tcagcaacca ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag gcagaagtat gcaaagcatg
2101 catctcaatt agtcagcaac catagtcccg cccctaactc cgcccatccc gcccctaact
2161 ccgcccagtt ccgcccattc tccgccccat ggctgactaa ttttttttat ttatgcagag
2221 gccgaggccg cctcggcctc tgagctattc cagaagtagt gaggaggctt ttttggagga
2281 attgatcagc ttgggatctg atcaagagac aggatgagga tcgtttcgca tgattgaaca
2341 agatggattg cacgcaggtt ctccggccgc ttgggtggag aggctattcg gctatgactg
2401 ggcacaacag acaatcggct gctctgatgc cgccgtgttc cggctgtcag cgcaggggcg
2461 cccggttctt tttgtcaaga ccgacctgtc cggtgccctg aatgaactgc aggacgaggc
2521 agcgcggcta tcgtggctgg ccacgacggg cgttccttgc gcagctgtgc tcgacgttgt
2581 cactgaagcg ggaagggact ggctgctatt gggcgaagtg ccggggcagg atctcctgtc
2641 atctcacctt gctcctgccg agaaagtatc catcatggct gatgcaatgc ggcggctgca
2701 tacgcttgat ccggctacct gcccattcga ccaccaagcg aaacatcgca tcgagcgagc
2761 acgtactcgg atggaagccg gtcttgtcga tcaggatgat ctggacgaag agcatcaggg
2821 gctcgcgcca gccgaactgt tcgccaggct caaggcgcgc atgcccgacg gcgaggatct
2881 cgtcgtgacc catggcgatg cctgcttgcc gaatatcatg gtggaaaatg gccgcttttc
2941 tggattcatc gactgtggcc ggctgggtgt ggcggaccgc tatcaggaca tagcgttggc
3001 tacccgtgat attgctgaag agcttggcgg cgaatgggct gaccgcttcc tcgtgcttta
3061 cggtatcgcc gctcccgatt cgcagcgcat cgccttctat cgccttcttg acgagttctt
3121 ctgagcggga ctctggggtt cgaaatgacc gaccaagcga cgcccaacct gccatcacga
3181 gatttcgatt ccaccgccgc cttctatgaa aggttgggct tcggaatcgt tttccgggac
3241 gccggctgga tgatcctcca gcgcggggat ctcatgctgg agttcttcgc ccaccccggg
3301 ctcgatcccc tcgcgagttg gttcagctgc tgcctgaggc tggacgacct cgcggagttc
3361 taccggcagt gcaaatccgt cggcatccag gaaaccagca gcggctatcc gcgcatccat
3421 gcccccgaac tgcaggagtg gggaggcacg atggccgctt tggtcgaccc ggacgggacg
3481 ctcctgcgcc tgatacagaa cgaattgctt gcaggcatct catgagtgtg tcttcccgtt
3541 ttccgcctga ggtcactgcg tggatggagc gctggcgcct gctgcgcgac ggcgagctgc
3601 tcaccaccca ctcgccaagc tggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata
3661 ggctccgccg atcataatca gccataccac atttgtagag gttttacttg ctttaaaaaa
3721 cctcccacac ctccccctga acctgaaaca taaaatgaat gcaattgttg ttgttaactt
3781 gtttattgca gcttataatg gttacaaata aagcaatagc atcacaaatt tcacaaataa
3841 agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg tttgtccaaa ctcatcaatg tatcttatca
3901 tgtctggatc aattccctat agtgagtcgt attaaattcg taatcatgtc atagctgttt
3961 cctgtgtgaa attgttatcc gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag
4021 tgtaaagcct ggggtgccta atgagtgagc taactcacat taattgcgtt gcgctcactg
4081 cccgctttcc agtcgggaaa cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg
4141 gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc
4201 tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc
4261 acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg
4321 aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat
4381 cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag
4441 gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga
4501 tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg
4561 tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt
4621 cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac
4681 gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc
4741 ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag aacagtattt
4801 ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc
4861 ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc
4921 agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg
4981 aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag
5041 atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg
5101 tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt
5161 tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca
5221 tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca
5281 gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc
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5401 ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg
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5761 aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg
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5941 agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt
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6061 ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgcgccctg tagcggcgca
6121 ttaagcgcgg cgggtgtggt ggttacgcgc agcgtgaccg ctacacttgc cagcgcccta
6181 gcgcccgctc ctttcgcttt cttcccttcc tttctcgcca cgttcgccgg ctttccccgt
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6421 acaacactca accctatctc ggtctattct tttgatttat aagggatttt gccgatttcg
6481 gcctattggt taaaaaatga gctgatttaa caaaaattta acgcgaattt taacaaaata
6541 ttaacgctta caattt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：p3×FLAG-SUMO1人源基因质粒
别称: NM_003352.4;DAP1;GMP1;PIC1;SMT3;UBL1
启动子: CMV
复制子: pUC
质粒分类: 基因文库质粒；人源哺乳细胞表达质粒
原核抗性: Amp
筛选标记: G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
Homo sapiens small ubiquitin-like modifier 1 (SUMO1
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6556 bp ds-DNA circular SYN 27-FEB-2018
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6556
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 318..697
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
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promoter"
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enterokinase cleavage site"
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promoter 1979..2276
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
CDS 2330..3124
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
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/note="Neo"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
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SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
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/note="SV40 polyadenylation signal"
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/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
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replication"
CDS complement(5109..5969)
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/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(5970..6074)
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/note="AmpR promoter"
rep_origin 6101..6556
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/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 ccattcgcca ttcaggctgc gcaactgttg ggaagggcga tcggtgcggg cctcttcgct
61 attacgccag ctggcgaaag ggggatgtgc tgcaaggcga ttaagttggg taacgccagg
121 gttttcccag tcacgacgtt gtaaaacgac ggccagtgcc aagctgatct atacattgaa
181 tcaatattgg caattagcca tattagtcat tggttatata gcataaatca atattggcta
241 ttggccattg catacgttgt atctatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc
301 aatatgaccg ccatgttgac attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg
361 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc
421 gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat
481 agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc
541 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtccg ccccctattg acgtcaatga
601 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttacgggact ttcctacttg
661 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacac
721 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt
781 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaataaccc
841 cgccccgttg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc
901 tcgtttagtg aaccgtcaga attaaccatg gactacaaag accatgacgg tgattataaa
961 gatcatgaca tcgattacaa ggatgacgat gacaagctta tgtctgacca ggaggcaaaa
1021 ccttcaactg aggacttggg ggataagaag gaaggtgaat atattaaact caaagtcatt
1081 ggacaggata gcagtgagat tcacttcaaa gtgaaaatga caacacatct caagaaactc
1141 aaagaatcat actgtcaaag acagggtgtt ccaatgaatt cactcaggtt tctctttgag
1201 ggtcagagaa ttgctgataa tcatactcca aaagaactgg gaatggagga agaagatgtg
1261 attgaagttt atcaggaaca aacggggggt cattcaacag tttaggcgga tcccgggtgg
1321 catccctgtg acccctcccc agtgcctctc ctggccctgg aagttgccac tccagtgccc
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1441 aatattatgg ggtggagggg ggtggtatgg agcaaggggc aagttgggaa gacaacctgt
1501 agggcctgcg gggtctattg ggaaccaagc tggagtgcag tggcacaatc ttggctcact
1561 gcaatctccg cctcctgggt tcaagcgatt ctcctgcctc agcctcccga gttgttggga
1621 ttccaggcat gcatgaccag gctcagctaa tttttgtttt tttggtagag acggggtttc
1681 accatattgg ccaggctggt ctccaactcc taatctcagg tgatctaccc accttggcct
1741 cccaaattgc tgggattaca ggcgtgaacc actgctccct tccctgtcct tctgatttta
1801 aaataactat accagcagga ggacgtccag acacagcata ggctacctgg ccatgcccaa
1861 ccggtgggac atttgagttg cttgcttggc actgtcctct catgcgttgg gtccactcag
1921 tagatgcctg ttgaattggg tacgcggcca gcttggctgt ggaatgtgtg tcagttaggg
1981 tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag
2041 tcagcaacca ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag gcagaagtat gcaaagcatg
2101 catctcaatt agtcagcaac catagtcccg cccctaactc cgcccatccc gcccctaact
2161 ccgcccagtt ccgcccattc tccgccccat ggctgactaa ttttttttat ttatgcagag
2221 gccgaggccg cctcggcctc tgagctattc cagaagtagt gaggaggctt ttttggagga
2281 attgatcagc ttgggatctg atcaagagac aggatgagga tcgtttcgca tgattgaaca
2341 agatggattg cacgcaggtt ctccggccgc ttgggtggag aggctattcg gctatgactg
2401 ggcacaacag acaatcggct gctctgatgc cgccgtgttc cggctgtcag cgcaggggcg
2461 cccggttctt tttgtcaaga ccgacctgtc cggtgccctg aatgaactgc aggacgaggc
2521 agcgcggcta tcgtggctgg ccacgacggg cgttccttgc gcagctgtgc tcgacgttgt
2581 cactgaagcg ggaagggact ggctgctatt gggcgaagtg ccggggcagg atctcctgtc
2641 atctcacctt gctcctgccg agaaagtatc catcatggct gatgcaatgc ggcggctgca
2701 tacgcttgat ccggctacct gcccattcga ccaccaagcg aaacatcgca tcgagcgagc
2761 acgtactcgg atggaagccg gtcttgtcga tcaggatgat ctggacgaag agcatcaggg
2821 gctcgcgcca gccgaactgt tcgccaggct caaggcgcgc atgcccgacg gcgaggatct
2881 cgtcgtgacc catggcgatg cctgcttgcc gaatatcatg gtggaaaatg gccgcttttc
2941 tggattcatc gactgtggcc ggctgggtgt ggcggaccgc tatcaggaca tagcgttggc
3001 tacccgtgat attgctgaag agcttggcgg cgaatgggct gaccgcttcc tcgtgcttta
3061 cggtatcgcc gctcccgatt cgcagcgcat cgccttctat cgccttcttg acgagttctt
3121 ctgagcggga ctctggggtt cgaaatgacc gaccaagcga cgcccaacct gccatcacga
3181 gatttcgatt ccaccgccgc cttctatgaa aggttgggct tcggaatcgt tttccgggac
3241 gccggctgga tgatcctcca gcgcggggat ctcatgctgg agttcttcgc ccaccccggg
3301 ctcgatcccc tcgcgagttg gttcagctgc tgcctgaggc tggacgacct cgcggagttc
3361 taccggcagt gcaaatccgt cggcatccag gaaaccagca gcggctatcc gcgcatccat
3421 gcccccgaac tgcaggagtg gggaggcacg atggccgctt tggtcgaccc ggacgggacg
3481 ctcctgcgcc tgatacagaa cgaattgctt gcaggcatct catgagtgtg tcttcccgtt
3541 ttccgcctga ggtcactgcg tggatggagc gctggcgcct gctgcgcgac ggcgagctgc
3601 tcaccaccca ctcgccaagc tggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata
3661 ggctccgccg atcataatca gccataccac atttgtagag gttttacttg ctttaaaaaa
3721 cctcccacac ctccccctga acctgaaaca taaaatgaat gcaattgttg ttgttaactt
3781 gtttattgca gcttataatg gttacaaata aagcaatagc atcacaaatt tcacaaataa
3841 agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg tttgtccaaa ctcatcaatg tatcttatca
3901 tgtctggatc aattccctat agtgagtcgt attaaattcg taatcatgtc atagctgttt
3961 cctgtgtgaa attgttatcc gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag
4021 tgtaaagcct ggggtgccta atgagtgagc taactcacat taattgcgtt gcgctcactg
4081 cccgctttcc agtcgggaaa cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg
4141 gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc
4201 tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc
4261 acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg
4321 aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat
4381 cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag
4441 gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga
4501 tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg
4561 tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt
4621 cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac
4681 gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc
4741 ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag aacagtattt
4801 ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc
4861 ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc
4921 agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg
4981 aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag
5041 atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg
5101 tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt
5161 tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca
5221 tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca
5281 gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc
5341 tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt
5401 ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg
5461 gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc
5521 aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg
5581 ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga
5641 tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga
5701 ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta
5761 aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg
5821 ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact
5881 ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata
5941 agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt
6001 tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa
6061 ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgcgccctg tagcggcgca
6121 ttaagcgcgg cgggtgtggt ggttacgcgc agcgtgaccg ctacacttgc cagcgcccta
6181 gcgcccgctc ctttcgcttt cttcccttcc tttctcgcca cgttcgccgg ctttccccgt
6241 caagctctaa atcgggggct ccctttaggg ttccgattta gtgctttacg gcacctcgac
6301 cccaaaaaac ttgattaggg tgatggttca cgtagtgggc catcgccctg atagacggtt
6361 tttcgccctt tgacgttgga gtccacgttc tttaatagtg gactcttgtt ccaaactgga
6421 acaacactca accctatctc ggtctattct tttgatttat aagggatttt gccgatttcg
6481 gcctattggt taaaaaatga gctgatttaa caaaaattta acgcgaattt taacaaaata
6541 ttaacgctta caattt
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3817/pCMV-SPORT6-GDAP1L1人源基因质粒 |
| P3818/pCMV-SPORT6-ARNTL2人源基因质粒 |
| P3821/pCMV-SPORT6-FAM184A人源基因质粒 |
| P3822/pCMV-SPORT6-GALNT15（1同义突变） |
| P3823/pCMV-SPORT6-ZC2HC1A人源基因质粒 |
| P0637/pCR4-MME人源基因质粒 |
| P0645/pCR4-IL12A人源基因质粒 |
| P0646/pCR4-PKD2人源基因质粒 |
| P4957/pCR-XL-TOPO-EFCAB4B人源基因质粒 |
| P0647/pDNR-Dual-IL12B人源基因质粒 |
| P4822/pDNR-LIB-PABPN1（2点突变）人源基因质粒 |
| P2411/pOTB7-LILRB1人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
入 DMSO 或 2-巯基乙醇，混合后加入 L 连接反应液 (含重组质粒)，温和混匀，置冰上 30 min；2. 42 ℃ 水浴 45 秒，然后迅速放回冰中 1～2 min；3. 加入 2 mL LB 培养液，37 ℃ 轻摇荡培养 1 h；4. 4,000×g 离心 10 秒钟，弃上清，用 LB 培养液重悬菌体；5. 将菌液铺于含有适当抗生素的 LB 琼脂培养板上，涂匀，室温放置 20～30 min，倒置于 37 ℃ 孵箱中培养 12～16 h。（三）转化细胞的筛选【实验原理】1、 蓝白筛选:以 TA
毒载体。 2.慢病毒包装与纯化 慢病毒包装采用三质粒或四质粒系统进行包装，收集细胞培养上清，通过超速离心浓缩纯化和收集病毒。 3.慢病毒滴度检测 检测方法：定量PCR检测干扰后细胞基因组中外源DNA拷贝数 实验原理：慢病毒介导外源基因以逆转录方式整合进目的细胞基因组 4.慢病毒载体优势 ① 表达时间长：慢病毒可将外源基因整合到宿主细胞基因组上，实现基因长时间稳定的表达，不随细胞分裂传代而丢失，是细胞实验的首选，常用于构建稳转株 ② 安全性高：未发现致病性，慢病毒载体改造T细胞用于CAR-T
良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。 慢病毒转染优点：1.外源基因表达水平较高、表达稳定；2.转染效率高，可感染分裂和不分裂的细胞，几乎可以感染所有类型的细胞，特别适合质粒载体转染效率低的细胞；3.慢病毒基因容易操作，易于制备大量病毒且滴度高；4.病毒基因组可整合到细胞基因组，易于构建稳定细胞株。 慢病毒包装技术：慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。将外源基因克隆进入表达载体，同时与包装质粒（表达病毒包装所需辅助蛋白）一起转染
p3×FLAG-SUMO1人源基因质粒
￥100 - 1000
