pQFLAG-USP7 WT puroR人源基因质粒

基本信息
名称：pQFLAG-USP7 WT puroR人源基因质粒
别称: Plasmid#46751;TEF1;HAUSP
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记:  Puro
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Puro
荧光蛋白：

质粒简介
              Retroviral vector that expresses wild type Flag-tagged human USP7

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported               10491 bp ds-DNA     circular SYN 24-FEB-2018
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..10491
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     promoter        309..512
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     LTR             513..688
                     /label=5' LTR (truncated)
                     /note="truncated long terminal repeat from Moloney murine 
                     sarcoma virus"
     misc_feature    751..950
                     /label=MMLV Psi
                     /note="packaging signal of Moloney murine leukemia virus 
                     (MMLV)"
     CDS             1151..1567
                     /label=gag (truncated)
                     /note="truncated Moloney murine leukemia virus (MMLV) gag 
                     gene lacking the start codon"
     enhancer        1604..1907
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        1908..2111
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     CDS             2265..2288
                     /codon_start=1
                     /product="FLAG(R) epitope tag, followed by an enterokinase 
                     cleavage site"
                     /label=FLAG
                     /translation="DYKDDDDK"
     CDS             2289..5603
                     /codon_start=1
                     /label=USP7
                     /translation="TGMNHQQQQQQQKAGEQQLSEPEDMEMEAGDTDDPPRITQNPVIN
                     GNVAL-SDGHNTAEEDMEDDTSWRSEATFQFTVERFSRLSESVLSPPCFVRNLPWKIMVM
                     PRFYPDRPHQKSVGFFLQCNAESDSTSWSCHAQAVLKIINYRDDEKSFSRRISHLFFHK
                     ENDWGFSNFMAWSEVTDPEKGFIDDDKVTFEVFVQADAPHGVAWDSKKHTGYVGLKNQG
                     ATCYMNSLLQTLFFTNQLRKAVYMMPTEGDDSSKSVPLALQRVFYELQHSDKPVGTKKL
                     TKSFGWETLDSFMQHDVQELCRVLLDNVENKMKGTCVEGTIPKLFRGKMVSYIQCKEVD
                     YRSDRREDYYDIQLSIKGKKNIFESFVDYVAVEQLDGDNKYDAGEHGLQEAEKGVKFLT
                     LPPVLHLQLMRFMYDPQTDQNIKINDRFEFPEQLPLDEFLQKTDPKDPANYILHAVLVH
                     SGDNHGGHYVVYLNPKGDGKWCKFDDDVVSRCTKEEAIEHNYGGHDDDLSVRHCTNAYM
                     LVYIRESKLSEVLQAVTDHDIPQQLVERLQEEKRIEAQKRKERQEAHLYMQVQIVAEDQ
                     FCGHQGNDMYDEEKVKYTVFKVLKNSSLAEFVQSLSQTMGFPQDQIRLWPMQARSNGTK
                     RPAMLDNEADGNKTMIEL-SDNENPWTIFLETVDPELAASGATLPKFDKDHDVMLFLKMY
                     DPKTRSLNYCGHIYTPISCKIRDLLPVMCDRAGFIQDTSLILYEEVKPNLTERIQDYDV
                     SLDKALDELMDGDIIVFQKDDPENDNSELPTAKEYFRDLYHRVDVIFCDKTIPNDPGFV
                     VTLSNRMNYFQVAKTVAQRLNTDPMLLQFFKSQGYRDGPGNPLRHNYEGTLRDLLQFFK
                     PRQPKKLYYQQLKMKITDFENRRSFKCIWLNSQFREEEITLYPDKHGCVRDLLEECKKA
                     VELGEKASGKLRLLEIVSYKIIGVHQEDELLECLSPATSRTFRIEEIPLDQVDIDKENE
                     MLVTVAHFHKEVFGTFGIPFLLRIHQGEHFREVMKRIQSLLDIQEKEFEKFKFAIVMTG
                     RHQYINEDEYEVNLKDFEPQPGNMSHPRPWLGLDHFNKAPKRSRYTYLEKAIKIHN"
     misc_feature    5619..6191
                     /label=IRES
                     /note="internal ribosome entry site (IRES) of the 
                     encephalomyocarditis virus (EMCV)"
     CDS             6224..6823
                     /codon_start=1
                     /gene="pac from Streptomyces"
                     /product="puromycin N-acetyltransferase"
                     /label=PuroR
                     /note="confers resistance to puromycin"
                     /translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
                     VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
                     AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
                     APRNLPFYERLGFTVTADVECPKDRATWCMTRKPGA"
     LTR             7197..7622
                     /label=3' LTR (Delta-U3)
                     /note="self-inactivating 3' long terminal repeat (LTR) from
                     Moloney murine leukemia virus"
     promoter        7888..8217
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      complement(8510..9098)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(9269..10129)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(10130..10234)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     enhancer        10420..308
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
ORIGIN
        1 tccgcgttac ataacttacg gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc
       61 cattgacgtc aataatgacg tatgttccca tagtaacgcc aatagggact ttccattgac
      121 gtcaatgggt ggagtattta cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata
      181 tgccaagtac gccccctatt gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc
      241 agtacatgac cttatgggac tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta
      301 ttaccatggt gatgcggttt tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac
      361 ggggatttcc aagtctccac cccattgacg tcaatgggag tttgttttgg caccaaaatc
      421 aacgggactt tccaaaatgt cgtaacaact ccgccccatt gacgcaaatg ggcggtaggc
      481 gtgtacggtg ggaggtctat ataagcagag ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc
      541 ggcgcgccag tcttccgata gactgcgtcg cccgggtacc cgtattccca ataaagcctc
      601 ttgctgtttg catccgaatc gtggtctcgc tgttccttgg gagggtctcc tctgagtgat
      661 tgactaccca cgacgggggt ctttcatttg ggggctcgtc cgggatttgg agacccctgc
      721 ccagggacca ccgacccacc accgggaggt aagctggcca gcaacttatc tgtgtctgtc
      781 cgattgtcta gtgtctatgt ttgatgttat gcgcctgcgt ctgtactagt tagctaacta
      841 gctctgtatc tggcggaccc gtggtggaac tgacgagttc tgaacacccg gccgcaaccc
      901 tgggagacgt cccagggact ttgggggccg tttttgtggc ccgacctgag gaagggagtc
      961 gatgtggaat ccgaccccgt caggatatgt ggttctggta ggagacgaga acctaaaaca
     1021 gttcccgcct ccgtctgaat ttttgctttc ggtttggaac cgaagccgcg cgtcttgtct
     1081 gctgcagcgc tgcagcatcg ttctgtgttg tctctgtctg actgtgtttc tgtatttgtc
     1141 tgaaaattag ggccagactg ttaccactcc cttaagtttg accttaggtc actggaaaga
     1201 tgtcgagcgg atcgctcaca accagtcggt agatgtcaag aagagacgtt gggttacctt
     1261 ctgctctgca gaatggccaa cctttaacgt cggatggccg cgagacggca cctttaaccg
     1321 agacctcatc acccaggtta agatcaaggt cttttcacct ggcccgcatg gacacccaga
     1381 ccaggtcccc tacatcgtga cctgggaagc cttggctttt gacccccctc cctgggtcaa
     1441 gccctttgta caccctaagc ctccgcctcc tcttcctcca tccgccccgt ctctccccct
     1501 tgaacctcct cgttcgaccc cgcctcgatc ctccctttat ccagccctca ctccttctct
     1561 aggcgccgga attgaagatc tgggggatcg atcctctaga gtccgttaca taacttacgg
     1621 taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt
     1681 atgttcccat agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac
     1741 ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg
     1801 acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttatgggact
     1861 ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt
     1921 ggcagtacat caatgggcgt gaatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc
     1981 ccattgacgt caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc
     2041 gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata
     2101 taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag acgccatcca cgctgttttg
     2161 acctccatag aagacaccgg gaccgatcca gcctccgcgg ccgggaacgg tgcattggaa
     2221 cgctgcagga attgatccgc ggccgcgaca ccatggcaca attggattac aaggatgacg
     2281 atgacaagac cggtatgaac caccagcagc agcagcagca gcagaaagcg ggcgagcagc
     2341 agttgagcga gcccgaggac atggagatgg aagcgggaga tacagatgac ccaccaagaa
     2401 ttactcagaa ccctgtgatc aatgggaatg tggccctgag tgatggacac aacaccgcgg
     2461 aggaggacat ggaggatgac accagttggc gctccgaggc aacctttcag ttcactgtgg
     2521 agcgcttcag cagactgagt gagtcggtcc ttagccctcc gtgttttgtg cgaaatctgc
     2581 catggaagat tatggtgatg ccacgctttt atccagacag accacaccaa aaaagcgtag
     2641 gattctttct ccagtgcaat gctgaatctg attccacgtc atggtcttgc catgcacaag
     2701 cagtgctgaa gataataaat tacagagatg atgaaaagtc gttcagtcgt cgtattagtc
     2761 atttgttctt ccataaagaa aatgattggg gattttccaa ttttatggcc tggagtgaag
     2821 tgaccgatcc tgagaaagga tttatagatg atgacaaagt tacctttgaa gtctttgtac
     2881 aggcggatgc tccccatgga gttgcgtggg attcaaagaa gcacacaggc tacgtcggct
     2941 taaagaatca gggagcgact tgttacatga acagcctgct acagacgtta tttttcacga
     3001 atcagctacg aaaggctgtg tacatgatgc caaccgaggg ggatgattcg tctaaaagcg
     3061 tccctttagc attacaaaga gtgttctatg aattacagca tagtgataaa cctgtaggaa
     3121 caaaaaagtt aacaaagtca tttgggtggg aaactttaga tagcttcatg caacatgatg
     3181 ttcaggagct ttgtcgagtg ttgctcgata atgtggaaaa taagatgaaa ggcacctgtg
     3241 tagagggcac catacccaaa ttattccgcg gcaaaatggt gtcctatatc cagtgtaaag
     3301 aagtagacta tcggtctgat agaagagaag attattatga tatccagcta agtatcaaag
     3361 gaaagaaaaa tatatttgaa tcatttgtgg attatgtggc agtagaacag ctcgatgggg
     3421 acaataaata cgacgctggg gaacatggct tacaggaagc agagaaaggt gtgaaattcc
     3481 taacattgcc accagtgtta catctacaac tgatgagatt tatgtatgac cctcagacgg
     3541 accaaaatat caagatcaat gataggtttg aattcccaga gcagttacca cttgatgaat
     3601 ttttgcaaaa aacagatcct aaggaccctg caaattatat tcttcatgca gtcctggttc
     3661 atagtggaga taatcatggt ggacattatg tggtttatct aaaccccaaa ggggatggca
     3721 aatggtgtaa atttgatgac gacgtggtgt caaggtgtac taaagaggaa gcaattgagc
     3781 acaattatgg gggtcacgat gacgacctgt ctgttcgaca ctgcactaat gcttacatgt
     3841 tagtctacat cagggaatca aaactgagtg aagttttaca ggcggtcacc gaccatgata
     3901 ttcctcagca gttggtggag cgattacaag aagagaaaag gatcgaggct cagaagcgga
     3961 aggagcggca ggaagcccat ctctatatgc aagtgcagat agtcgcagag gaccagtttt
     4021 gtggccacca agggaatgac atgtacgatg aagaaaaagt gaaatacact gtgttcaaag
     4081 tattgaagaa ctcctcgctt gctgagtttg ttcagagcct ctctcagacc atgggatttc
     4141 cacaagatca aattcgattg tggcccatgc aagcaaggag taatggaaca aaacgaccag
     4201 caatgttaga taatgaagcc gacggcaata aaacaatgat tgagctcagt gataatgaaa
     4261 acccttggac aatattcctg gaaacagttg atcccgagct ggctgctagt ggagcgacct
     4321 tacccaagtt tgataaagat catgatgtaa tgttattttt gaagatgtat gatcccaaaa
     4381 cgcggagctt gaattactgt gggcatatct acacaccaat atcctgtaaa atacgtgact
     4441 tgctcccagt tatgtgtgac agagcaggat ttattcaaga tactagcctt atcctctatg
     4501 aggaagttaa accgaattta acagagagaa ttcaggacta tgacgtgtct cttgataaag
     4561 cccttgatga actaatggat ggtgacatca tagtatttca gaaggatgac cctgaaaatg
     4621 ataacagtga attacccacc gcaaaggagt atttccgaga tctctaccac cgcgttgatg
     4681 tcattttctg tgataaaaca atccctaatg atcctggatt tgtggttacg ttatcaaata
     4741 gaatgaatta ttttcaggtt gcaaagacag ttgcacagag gctcaacaca gatccaatgt
     4801 tgctgcagtt tttcaagtct caaggttata gggatggccc aggtaatcct cttagacata
     4861 attatgaagg tactttaaga gatcttctac agttcttcaa gcctagacaa cctaagaaac
     4921 tttactatca gcagcttaag atgaaaatca cagactttga gaacaggcga agttttaaat
     4981 gtatatggtt aaacagccaa tttagggaag aggaaataac actatatcca gacaagcatg
     5041 ggtgtgtccg ggacctgtta gaagaatgta aaaaggccgt ggagcttggg gagaaagcat
     5101 cagggaaact taggctgcta gaaattgtaa gctacaaaat cattggtgtt catcaagaag
     5161 atgaactatt agaatgttta tctcctgcaa cgagccggac gtttcgaata gaggaaatcc
     5221 ctttggacca ggtggacata gacaaagaga atgagatgct tgtcacagtg gcgcatttcc
     5281 acaaagaggt cttcggaacg ttcggaatcc cgtttttgct gaggatacac cagggcgagc
     5341 attttcgaga agtgatgaag cgaatccaga gcctgctgga catccaggag aaggagtttg
     5401 agaagtttaa atttgcaatt gtaatgacgg gccgacacca gtacataaat gaagacgagt
     5461 atgaagtaaa tttgaaagac tttgagccac agcccggtaa tatgtctcat cctcggcctt
     5521 ggctagggct cgaccacttc aacaaagccc caaagaggag tcgctacact taccttgaaa
     5581 aggccattaa aatccataac tgaggatccg gaattccgcc cctctccctc ccccccccct
     5641 aacgttactg gccgaagccg cttggaataa ggccggtgtg cgtttgtcta tatgttattt
     5701 tccaccatat tgccgtcttt tggcaatgtg agggcccgga aacctggccc tgtcttcttg
     5761 acgagcattc ctaggggtct ttcccctctc gccaaaggaa tgcaaggtct gttgaatgtc
     5821 gtgaaggaag cagttcctct ggaagcttct tgaagacaaa caacgtctgt agcgaccctt
     5881 tgcaggcagc ggaacccccc acctggcgac aggtgcctct gcggccaaaa gccacgtgta
     5941 taagatacac ctgcaaaggc ggcacaaccc cagtgccacg ttgtgagttg gatagttgtg
     6001 gaaagagtca aatggctctc ctcaagcgta ttcaacaagg ggctgaagga tgcccagaag
     6061 gtaccccatt gtatgggatc tgatctgggg cctcggtgca catgctttac atgtgtttag
     6121 tcgaggttaa aaaacgtcta ggccccccga accacgggga cgtggttttc ctttgaaaaa
     6181 cacgatgata agcttgccac aacccacaag gagacgacct tccatgaccg agtacaagcc
     6241 cacggtgcgc ctcgccaccc gcgacgacgt cccccgggcc gtacgcaccc tcgccgccgc
     6301 gttcgccgac taccccgcca cgcgccacac cgtcgacccg gaccgccaca tcgagcgggt
     6361 caccgagctg caagaactct tcctcacgcg cgtcgggctc gacatcggca aggtgtgggt
     6421 cgcggacgac ggcgccgcgg tggcggtctg gaccacgccg gagagcgtcg aagcgggggc
     6481 ggtgttcgcc gagatcggcc cgcgcatggc cgagttgagc ggttcccggc tggccgcgca
     6541 gcaacagatg gaaggcctcc tggcgccgca ccggcccaag gagcccgcgt ggttcctggc
     6601 caccgtcggc gtctcgcccg accaccaggg caagggtctg ggcagcgccg tcgtgctccc
     6661 cggagtggag gcggccgagc gcgccggggt gcccgccttc ctggagacct ccgcgccccg
     6721 caacctcccc ttctacgagc ggctcggctt caccgtcacc gccgacgtcg agtgcccgaa
     6781 ggaccgcgcg acctggtgca tgacccgcaa gcccggtgcc tgacgcccgc cccacgaccc
     6841 gcagcgcccg accgaaagga gcgcacgacc ccatggctcc gaccgaagcc gacccgggcg
     6901 gccccgccga ccccgcaccc gcccccgagg cccaccgact ctagtcgagg gctgcagcgc
     6961 tgcagaggcc gagtgcagaa ctgctccaaa gggacctcaa ggctttccga gggacactag
     7021 gctgactcca tcgagccagt gtagagataa gcttatcgat tagtccaatt tgttaaagac
     7081 aggatatcag tggtccaggc tctagttttg actcaacaat atcaccagct gaagcctata
     7141 gagtacgagc catagataaa ataaaagatt ttatttagtc tccagaaaaa ggggggaatg
     7201 aaagacccca cctgtaggtt tggcaagcta gcttaagtaa cgccattttg caaggcatgg
     7261 aaaaatacat aactgagaat agagaagttc agatcaaggt caggaacaga tggaacaggg
     7321 tcgaccctag agaaccatca gatgtttcca gggtgcccca aggacctgaa atgaccctgt
     7381 gccttatttg aactaaccaa tcagttcgct tctcgcttct gttcgcgcgc ttctgctccc
     7441 cgagctcaat aaaagagccc acaacccctc actcggggcg ccagtcctcc gattgactga
     7501 gtcgcccggg tacccgtgta tccaataaac cctcttgcag ttgcatccga cttgtggtct
     7561 cgctgttcct tgggagggtc tcctctgagt gattgactac ccgtcagcgg gggtctttca
     7621 tttgggggct cgtccgggat cgggagaccc ctgcccaggg accaccgacc caccaccggg
     7681 aggtaagctg gctgcctcgc gcgtttcggt gatgacggtg aaaacctctg acacatgcag
     7741 ctcccggaga cggtcacagc ttgtctgtaa gcggatgccg ggagcagaca agcccgtcag
     7801 ggcgcgtcag cgggtgttgg cgggtgtcgg ggcgcagcca tgacccagtc acgtagcgat
     7861 agcggagtgt agatccggct gtggaatgtg tgtcagttag ggtgtggaaa gtccccaggc
     7921 tccccagcag gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac caggtgtgga
     7981 aagtccccag gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca
     8041 accatagtcc cgcccctaac tccgcccatc ccgcccctaa ctccgcccag ttccgcccat
     8101 tctccgcccc atggctgact aatttttttt atttatgcag aggccgaggc cgcctcggcc
     8161 tctgagctat tccagaagta gtgaggaggc ttttttggag gcctaggctt ttgcaaaaag
     8221 cttactggct taactatgcg gcatcagagc agattgtact gagagtgcac catatgcggt
     8281 gtgaaatacc gcacagatgc gtaaggagaa aataccgcat caggcgctct tccgcttcct
     8341 cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa
     8401 aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa
     8461 aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc
     8521 tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga
     8581 caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc
     8641 cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt
     8701 ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct
     8761 gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg
     8821 agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta
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     9661 catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca
     9721 gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta
     9781 ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct
     9841 gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaacacgg gataataccg
     9901 cgccacatag cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac
     9961 tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact
    10021 gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa
    10081 atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt
    10141 ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat
    10201 gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg
    10261 acgtctaaga aaccattatt atcatgacat taacctataa aaataggcgt atcacgaggc
    10321 cctttcgtct tcaagaatta gcttggccat tgcatacgtt gtatccatat cataatatgt
    10381 acatttatat tggctcatgt ccaacattac cgccatgttg acattgatta ttgactagtt
    10441 attaatagta atcaattacg gggtcattag ttcatagccc atatatggag t
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4007/pCMV-SPORT6-LRRC40人源基因质粒

P4008/pCMV-SPORT6-RPSA人源基因质粒

P4009/pCMV-SPORT6-MKRN2（1同义突变）人源基因质粒

P4010/pCMV-SPORT6-UCN2人源基因质粒

P4011/pCMV-SPORT6-MOB3A人源基因质粒

P4012/pCMV-SPORT6-MAP7D1（827-2523bp）人源基因质粒

P4013/pCMV-SPORT6-H3F3B人源基因质粒

P4014/pCMV-SPORT6-C14orf80人源基因质粒

P4015/pCMV-SPORT6-NABP1人源基因质粒

P4016/pCMV-SPORT6-SLC16A5（1同义突变）人源基因质粒

P4017/pCMV-SPORT6-SLBP人源基因质粒