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- 2026年01月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_001146156.1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pT7-His-GSK3B人源基因质粒
别称: NM_001146156.1
复制子: pBR322
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pT7-His-GSK3B是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6547 bp ds-DNA circular SYN 30-九月-2017
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6547
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 141..159
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
protein_bind 160..184
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 240..257
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
misc_feature 282..1541
/note="GSK3B"
CDS 1548..1565
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
terminator 1632..1679
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
rep_origin 1716..2171
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
CDS complement(2264..3079)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
rep_origin 3201..3789
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4219..4410)
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
CDS complement(5219..6301)
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
promoter complement(6302..6379)
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
ORIGIN
1 tcatgagccc gaagtggcga gcccgatctt ccccatcggt gatgtcggcg atataggcgc
61 cagcaaccgc acctgtggcg ccggtgatgc cggccacgat gcgtccggcg tagaggatcg
121 agatctcgat cccgcgaaat taatacgact cactataggg gaattgtgag cggataacaa
181 ttcccctcta gaaataattt tgtttaactt taagaaggag atataccatg ggcagcagcc
241 atcatcatca tcatcacagc agcggccgcg gatccgaatt catgtcaggg cggcccagaa
301 ccacctcctt tgcggagagc tgcaagccgg tgcagcagcc ttcagctttt ggcagcatga
361 aagttagcag agacaaggac ggcagcaagg tgacaacagt ggtggcaact cctgggcagg
421 gtccagacag gccacaagaa gtcagctata cagacactaa agtgattgga aatggatcat
481 ttggtgtggt atatcaagcc aaactttgtg attcaggaga actggtcgcc atcaagaaag
541 tattgcagga caagagattt aagaatcgag agctccagat catgagaaag ctagatcact
601 gtaacatagt ccgattgcgt tatttcttct actccagtgg tgagaagaaa gatgaggtct
661 atcttaatct ggtgctggac tatgttccgg aaacagtata cagagttgcc agacactata
721 gtcgagccaa acagacgctc cctgtgattt atgtcaagtt gtatatgtat cagctgttcc
781 gaagtttagc ctatatccat tcctttggaa tctgccatcg ggatattaaa ccgcagaacc
841 tcttgttgga tcctgatact gctgtattaa aactctgtga ctttggaagt gcaaagcagc
901 tggtccgagg agaacccaat gtttcgtata tctgttctcg gtactatagg gcaccagagt
961 tgatctttgg agccactgat tatacctcta gtatagatgt atggtctgct ggctgtgtgt
1021 tggctgagct gttactagga caaccaatat ttccagggga tagtggtgtg gatcagttgg
1081 tagaaataat caaggtcctg ggaactccaa caagggagca aatcagagaa atgaacccaa
1141 actacacaga atttaaattc cctcaaatta aggcacatcc ttggactaag gtcttccgac
1201 cccgaactcc accggaggca attgcactgt gtagccgtct gctggagtat acaccaactg
1261 cccgactaac accactggaa gcttgtgcac attcattttt tgatgaatta cgggacccaa
1321 atgtcaaact accaaatggg cgagacacac ctgcactctt caacttcacc actcaagaac
1381 tgtcaagtaa tccacctctg gctaccatcc ttattcctcc tcatgctcgg attcaagcag
1441 ctgcttcaac ccccacaaat gccacagcag cgtcagatgc taatactgga gaccgtggac
1501 agaccaataa tgctgcttct gcatcagctt ccaactccac cctcgagcac caccaccacc
1561 accactgaga tccggctgct aacaaagccc gaaaggaagc tgagttggct gctgccaccg
1621 ctgagcaata actagcataa ccccttgggg cctctaaacg ggtcttgagg ggttttttgc
1681 tgaaaggagg aactatatcc ggattggcga atgggacgcg ccctgtagcg gcgcattaag
1741 cgcggcgggt gtggtggtta cgcgcagcgt gaccgctaca cttgccagcg ccctagcgcc
1801 cgctcctttc gctttcttcc cttcctttct cgccacgttc gccggctttc cccgtcaagc
1861 tctaaatcgg gggctccctt tagggttccg atttagtgct ttacggcacc tcgaccccaa
1921 aaaacttgat tagggtgatg gttcacgtag tgggccatcg ccctgataga cggtttttcg
1981 ccctttgacg ttggagtcca cgttctttaa tagtggactc ttgttccaaa ctggaacaac
2041 actcaaccct atctcggtct attcttttga tttataaggg attttgccga tttcggccta
2101 ttggttaaaa aatgagctga tttaacaaaa atttaacgcg aattttaaca aaatattaac
2161 gtttacaatt tcaggtggca cttttcgggg aaatgtgcgc ggaaccccta tttgtttatt
2221 tttctaaata cattcaaata tgtatccgct catgaattaa ttcttagaaa aactcatcga
2281 gcatcaaatg aaactgcaat ttattcatat caggattatc aataccatat ttttgaaaaa
2341 gccgtttctg taatgaagga gaaaactcac cgaggcagtt ccataggatg gcaagatcct
2401 ggtatcggtc tgcgattccg actcgtccaa catcaataca acctattaat ttcccctcgt
2461 caaaaataag gttatcaagt gagaaatcac catgagtgac gactgaatcc ggtgagaatg
2521 gcaaaagttt atgcatttct ttccagactt gttcaacagg ccagccatta cgctcgtcat
2581 caaaatcact cgcatcaacc aaaccgttat tcattcgtga ttgcgcctga gcgagacgaa
2641 atacgcgatc gctgttaaaa ggacaattac aaacaggaat cgaatgcaac cggcgcagga
2701 acactgccag cgcatcaaca atattttcac ctgaatcagg atattcttct aatacctgga
2761 atgctgtttt cccggggatc gcagtggtga gtaaccatgc atcatcagga gtacggataa
2821 aatgcttgat ggtcggaaga ggcataaatt ccgtcagcca gtttagtctg accatctcat
2881 ctgtaacatc attggcaacg ctacctttgc catgtttcag aaacaactct ggcgcatcgg
2941 gcttcccata caatcgatag attgtcgcac ctgattgccc gacattatcg cgagcccatt
3001 tatacccata taaatcagca tccatgttgg aatttaatcg cggcctagag caagacgttt
3061 cccgttgaat atggctcata acaccccttg tattactgtt tatgtaagca gacagtttta
3121 ttgttcatga ccaaaatccc ttaacgtgag ttttcgttcc actgagcgtc agaccccgta
3181 gaaaagatca aaggatcttc ttgagatcct ttttttctgc gcgtaatctg ctgcttgcaa
3241 acaaaaaaac caccgctacc agcggtggtt tgtttgccgg atcaagagct accaactctt
3301 tttccgaagg taactggctt cagcagagcg cagataccaa atactgtcct tctagtgtag
3361 ccgtagttag gccaccactt caagaactct gtagcaccgc ctacatacct cgctctgcta
3421 atcctgttac cagtggctgc tgccagtggc gataagtcgt gtcttaccgg gttggactca
3481 agacgatagt taccggataa ggcgcagcgg tcgggctgaa cggggggttc gtgcacacag
3541 cccagcttgg agcgaacgac ctacaccgaa ctgagatacc tacagcgtga gctatgagaa
3601 agcgccacgc ttcccgaagg gagaaaggcg gacaggtatc cggtaagcgg cagggtcgga
3661 acaggagagc gcacgaggga gcttccaggg ggaaacgcct ggtatcttta tagtcctgtc
3721 gggtttcgcc acctctgact tgagcgtcga tttttgtgat gctcgtcagg ggggcggagc
3781 ctatggaaaa acgccagcaa cgcggccttt ttacggttcc tggccttttg ctggcctttt
3841 gctcacatgt tctttcctgc gttatcccct gattctgtgg ataaccgtat taccgccttt
3901 gagtgagctg ataccgctcg ccgcagccga acgaccgagc gcagcgagtc agtgagcgag
3961 gaagcggaag agcgcctgat gcggtatttt ctccttacgc atctgtgcgg tatttcacac
4021 cgcatatatg gtgcactctc agtacaatct gctctgatgc cgcatagtta agccagtata
4081 cactccgcta tcgctacgtg actgggtcat ggctgcgccc cgacacccgc caacacccgc
4141 tgacgcgccc tgacgggctt gtctgctccc ggcatccgct tacagacaag ctgtgaccgt
4201 ctccgggagc tgcatgtgtc agaggttttc accgtcatca ccgaaacgcg cgaggcagct
4261 gcggtaaagc tcatcagcgt ggtcgtgaag cgattcacag atgtctgcct gttcatccgc
4321 gtccagctcg ttgagtttct ccagaagcgt taatgtctgg cttctgataa agcgggccat
4381 gttaagggcg gttttttcct gtttggtcac tgatgcctcc gtgtaagggg gatttctgtt
4441 catgggggta atgataccga tgaaacgaga gaggatgctc acgatacggg ttactgatga
4501 tgaacatgcc cggttactgg aacgttgtga gggtaaacaa ctggcggtat ggatgcggcg
4561 ggaccagaga aaaatcactc agggtcaatg ccagcgcttc gttaatacag atgtaggtgt
4621 tccacagggt agccagcagc atcctgcgat gcagatccgg aacataatgg tgcagggcgc
4681 tgacttccgc gtttccagac tttacgaaac acggaaaccg aagaccattc atgttgttgc
4741 tcaggtcgca gacgttttgc agcagcagtc gcttcacgtt cgctcgcgta tcggtgattc
4801 attctgctaa ccagtaaggc aaccccgcca gcctagccgg gtcctcaacg acaggagcac
4861 gatcatgcgc acccgtgggg ccgccatgcc ggcgataatg gcctgcttct cgccgaaacg
4921 tttggtggcg ggaccagtga cgaaggcttg agcgagggcg tgcaagattc cgaataccgc
4981 aagcgacagg ccgatcatcg tcgcgctcca gcgaaagcgg tcctcgccga aaatgaccca
5041 gagcgctgcc ggcacctgtc ctacgagttg catgataaag aagacagtca taagtgcggc
5101 gacgatagtc atgccccgcg cccaccggaa ggagctgact gggttgaagg ctctcaaggg
5161 catcggtcga gatcccggtg cctaatgagt gagctaactt acattaattg cgttgcgctc
5221 actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg
5281 cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg ccagggtggt ttttcttttc accagtgaga
5341 cgggcaacag ctgattgccc ttcaccgcct ggccctgaga gagttgcagc aagcggtcca
5401 cgctggtttg ccccagcagg cgaaaatcct gtttgatggt ggttaacggc gggatataac
5461 atgagctgtc ttcggtatcg tcgtatccca ctaccgagat atccgcacca acgcgcagcc
5521 cggactcggt aatggcgcgc attgcgccca gcgccatctg atcgttggca accagcatcg
5581 cagtgggaac gatgccctca ttcagcattt gcatggtttg ttgaaaaccg gacatggcac
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5701 agccagccag acgcagacgc gccgagacag aacttaatgg gcccgctaac agcgcgattt
5761 gctggtgacc caatgcgacc agatgctcca cgcccagtcg cgtaccgtct tcatgggaga
5821 aaataatact gttgatgggt gtctggtcag agacatcaag aaataacgcc ggaacattag
5881 tgcaggcagc ttccacagca atggcatcct ggtcatccag cggatagtta atgatcagcc
5941 cactgacgcg ttgcgcgaga agattgtgca ccgccgcttt acaggcttcg acgccgcttc
6001 gttctaccat cgacaccacc acgctggcac ccagttgatc ggcgcgagat ttaatcgccg
6061 cgacaatttg cgacggcgcg tgcagggcca gactggaggt ggcaacgcca atcagcaacg
6121 actgtttgcc cgccagttgt tgtgccacgc ggttgggaat gtaattcagc tccgccatcg
6181 ccgcttccac tttttcccgc gttttcgcag aaacgtggct ggcctggttc accacgcggg
6241 aaacggtctg ataagagaca ccggcatact ctgcgacatc gtataacgtt actggtttca
6301 cattcaccac cctgaattga ctctcttccg ggcgctatca tgccataccg cgaaaggttt
6361 tgcgccattc gatggtgtcc gggatctcga cgctctccct tatgcgactc ctgcattagg
6421 aagcagccca gtagtaggtt gaggccgttg agcaccgccg ccgcaaggaa tggtgcatgc
6481 aaggagatgg cgcccaacag tcccccggcc acggggcctg ccaccatacc cacgccgaaa
6541 caagcgc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pT7-His-GSK3B人源基因质粒
别称: NM_001146156.1
| 启动子: | T7 |
|---|
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pT7-His-GSK3B是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6547 bp ds-DNA circular SYN 30-九月-2017
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6547
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 141..159
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
protein_bind 160..184
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 240..257
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terminator 1632..1679
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
rep_origin 1716..2171
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/note="f1 ori"
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indicates direction of (+) strand synthesis"
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/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
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/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin"
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KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
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SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
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MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
promoter complement(6302..6379)
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
ORIGIN
1 tcatgagccc gaagtggcga gcccgatctt ccccatcggt gatgtcggcg atataggcgc
61 cagcaaccgc acctgtggcg ccggtgatgc cggccacgat gcgtccggcg tagaggatcg
121 agatctcgat cccgcgaaat taatacgact cactataggg gaattgtgag cggataacaa
181 ttcccctcta gaaataattt tgtttaactt taagaaggag atataccatg ggcagcagcc
241 atcatcatca tcatcacagc agcggccgcg gatccgaatt catgtcaggg cggcccagaa
301 ccacctcctt tgcggagagc tgcaagccgg tgcagcagcc ttcagctttt ggcagcatga
361 aagttagcag agacaaggac ggcagcaagg tgacaacagt ggtggcaact cctgggcagg
421 gtccagacag gccacaagaa gtcagctata cagacactaa agtgattgga aatggatcat
481 ttggtgtggt atatcaagcc aaactttgtg attcaggaga actggtcgcc atcaagaaag
541 tattgcagga caagagattt aagaatcgag agctccagat catgagaaag ctagatcact
601 gtaacatagt ccgattgcgt tatttcttct actccagtgg tgagaagaaa gatgaggtct
661 atcttaatct ggtgctggac tatgttccgg aaacagtata cagagttgcc agacactata
721 gtcgagccaa acagacgctc cctgtgattt atgtcaagtt gtatatgtat cagctgttcc
781 gaagtttagc ctatatccat tcctttggaa tctgccatcg ggatattaaa ccgcagaacc
841 tcttgttgga tcctgatact gctgtattaa aactctgtga ctttggaagt gcaaagcagc
901 tggtccgagg agaacccaat gtttcgtata tctgttctcg gtactatagg gcaccagagt
961 tgatctttgg agccactgat tatacctcta gtatagatgt atggtctgct ggctgtgtgt
1021 tggctgagct gttactagga caaccaatat ttccagggga tagtggtgtg gatcagttgg
1081 tagaaataat caaggtcctg ggaactccaa caagggagca aatcagagaa atgaacccaa
1141 actacacaga atttaaattc cctcaaatta aggcacatcc ttggactaag gtcttccgac
1201 cccgaactcc accggaggca attgcactgt gtagccgtct gctggagtat acaccaactg
1261 cccgactaac accactggaa gcttgtgcac attcattttt tgatgaatta cgggacccaa
1321 atgtcaaact accaaatggg cgagacacac ctgcactctt caacttcacc actcaagaac
1381 tgtcaagtaa tccacctctg gctaccatcc ttattcctcc tcatgctcgg attcaagcag
1441 ctgcttcaac ccccacaaat gccacagcag cgtcagatgc taatactgga gaccgtggac
1501 agaccaataa tgctgcttct gcatcagctt ccaactccac cctcgagcac caccaccacc
1561 accactgaga tccggctgct aacaaagccc gaaaggaagc tgagttggct gctgccaccg
1621 ctgagcaata actagcataa ccccttgggg cctctaaacg ggtcttgagg ggttttttgc
1681 tgaaaggagg aactatatcc ggattggcga atgggacgcg ccctgtagcg gcgcattaag
1741 cgcggcgggt gtggtggtta cgcgcagcgt gaccgctaca cttgccagcg ccctagcgcc
1801 cgctcctttc gctttcttcc cttcctttct cgccacgttc gccggctttc cccgtcaagc
1861 tctaaatcgg gggctccctt tagggttccg atttagtgct ttacggcacc tcgaccccaa
1921 aaaacttgat tagggtgatg gttcacgtag tgggccatcg ccctgataga cggtttttcg
1981 ccctttgacg ttggagtcca cgttctttaa tagtggactc ttgttccaaa ctggaacaac
2041 actcaaccct atctcggtct attcttttga tttataaggg attttgccga tttcggccta
2101 ttggttaaaa aatgagctga tttaacaaaa atttaacgcg aattttaaca aaatattaac
2161 gtttacaatt tcaggtggca cttttcgggg aaatgtgcgc ggaaccccta tttgtttatt
2221 tttctaaata cattcaaata tgtatccgct catgaattaa ttcttagaaa aactcatcga
2281 gcatcaaatg aaactgcaat ttattcatat caggattatc aataccatat ttttgaaaaa
2341 gccgtttctg taatgaagga gaaaactcac cgaggcagtt ccataggatg gcaagatcct
2401 ggtatcggtc tgcgattccg actcgtccaa catcaataca acctattaat ttcccctcgt
2461 caaaaataag gttatcaagt gagaaatcac catgagtgac gactgaatcc ggtgagaatg
2521 gcaaaagttt atgcatttct ttccagactt gttcaacagg ccagccatta cgctcgtcat
2581 caaaatcact cgcatcaacc aaaccgttat tcattcgtga ttgcgcctga gcgagacgaa
2641 atacgcgatc gctgttaaaa ggacaattac aaacaggaat cgaatgcaac cggcgcagga
2701 acactgccag cgcatcaaca atattttcac ctgaatcagg atattcttct aatacctgga
2761 atgctgtttt cccggggatc gcagtggtga gtaaccatgc atcatcagga gtacggataa
2821 aatgcttgat ggtcggaaga ggcataaatt ccgtcagcca gtttagtctg accatctcat
2881 ctgtaacatc attggcaacg ctacctttgc catgtttcag aaacaactct ggcgcatcgg
2941 gcttcccata caatcgatag attgtcgcac ctgattgccc gacattatcg cgagcccatt
3001 tatacccata taaatcagca tccatgttgg aatttaatcg cggcctagag caagacgttt
3061 cccgttgaat atggctcata acaccccttg tattactgtt tatgtaagca gacagtttta
3121 ttgttcatga ccaaaatccc ttaacgtgag ttttcgttcc actgagcgtc agaccccgta
3181 gaaaagatca aaggatcttc ttgagatcct ttttttctgc gcgtaatctg ctgcttgcaa
3241 acaaaaaaac caccgctacc agcggtggtt tgtttgccgg atcaagagct accaactctt
3301 tttccgaagg taactggctt cagcagagcg cagataccaa atactgtcct tctagtgtag
3361 ccgtagttag gccaccactt caagaactct gtagcaccgc ctacatacct cgctctgcta
3421 atcctgttac cagtggctgc tgccagtggc gataagtcgt gtcttaccgg gttggactca
3481 agacgatagt taccggataa ggcgcagcgg tcgggctgaa cggggggttc gtgcacacag
3541 cccagcttgg agcgaacgac ctacaccgaa ctgagatacc tacagcgtga gctatgagaa
3601 agcgccacgc ttcccgaagg gagaaaggcg gacaggtatc cggtaagcgg cagggtcgga
3661 acaggagagc gcacgaggga gcttccaggg ggaaacgcct ggtatcttta tagtcctgtc
3721 gggtttcgcc acctctgact tgagcgtcga tttttgtgat gctcgtcagg ggggcggagc
3781 ctatggaaaa acgccagcaa cgcggccttt ttacggttcc tggccttttg ctggcctttt
3841 gctcacatgt tctttcctgc gttatcccct gattctgtgg ataaccgtat taccgccttt
3901 gagtgagctg ataccgctcg ccgcagccga acgaccgagc gcagcgagtc agtgagcgag
3961 gaagcggaag agcgcctgat gcggtatttt ctccttacgc atctgtgcgg tatttcacac
4021 cgcatatatg gtgcactctc agtacaatct gctctgatgc cgcatagtta agccagtata
4081 cactccgcta tcgctacgtg actgggtcat ggctgcgccc cgacacccgc caacacccgc
4141 tgacgcgccc tgacgggctt gtctgctccc ggcatccgct tacagacaag ctgtgaccgt
4201 ctccgggagc tgcatgtgtc agaggttttc accgtcatca ccgaaacgcg cgaggcagct
4261 gcggtaaagc tcatcagcgt ggtcgtgaag cgattcacag atgtctgcct gttcatccgc
4321 gtccagctcg ttgagtttct ccagaagcgt taatgtctgg cttctgataa agcgggccat
4381 gttaagggcg gttttttcct gtttggtcac tgatgcctcc gtgtaagggg gatttctgtt
4441 catgggggta atgataccga tgaaacgaga gaggatgctc acgatacggg ttactgatga
4501 tgaacatgcc cggttactgg aacgttgtga gggtaaacaa ctggcggtat ggatgcggcg
4561 ggaccagaga aaaatcactc agggtcaatg ccagcgcttc gttaatacag atgtaggtgt
4621 tccacagggt agccagcagc atcctgcgat gcagatccgg aacataatgg tgcagggcgc
4681 tgacttccgc gtttccagac tttacgaaac acggaaaccg aagaccattc atgttgttgc
4741 tcaggtcgca gacgttttgc agcagcagtc gcttcacgtt cgctcgcgta tcggtgattc
4801 attctgctaa ccagtaaggc aaccccgcca gcctagccgg gtcctcaacg acaggagcac
4861 gatcatgcgc acccgtgggg ccgccatgcc ggcgataatg gcctgcttct cgccgaaacg
4921 tttggtggcg ggaccagtga cgaaggcttg agcgagggcg tgcaagattc cgaataccgc
4981 aagcgacagg ccgatcatcg tcgcgctcca gcgaaagcgg tcctcgccga aaatgaccca
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5101 gacgatagtc atgccccgcg cccaccggaa ggagctgact gggttgaagg ctctcaaggg
5161 catcggtcga gatcccggtg cctaatgagt gagctaactt acattaattg cgttgcgctc
5221 actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg
5281 cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg ccagggtggt ttttcttttc accagtgaga
5341 cgggcaacag ctgattgccc ttcaccgcct ggccctgaga gagttgcagc aagcggtcca
5401 cgctggtttg ccccagcagg cgaaaatcct gtttgatggt ggttaacggc gggatataac
5461 atgagctgtc ttcggtatcg tcgtatccca ctaccgagat atccgcacca acgcgcagcc
5521 cggactcggt aatggcgcgc attgcgccca gcgccatctg atcgttggca accagcatcg
5581 cagtgggaac gatgccctca ttcagcattt gcatggtttg ttgaaaaccg gacatggcac
5641 tccagtcgcc ttcccgttcc gctatcggct gaatttgatt gcgagtgaga tatttatgcc
5701 agccagccag acgcagacgc gccgagacag aacttaatgg gcccgctaac agcgcgattt
5761 gctggtgacc caatgcgacc agatgctcca cgcccagtcg cgtaccgtct tcatgggaga
5821 aaataatact gttgatgggt gtctggtcag agacatcaag aaataacgcc ggaacattag
5881 tgcaggcagc ttccacagca atggcatcct ggtcatccag cggatagtta atgatcagcc
5941 cactgacgcg ttgcgcgaga agattgtgca ccgccgcttt acaggcttcg acgccgcttc
6001 gttctaccat cgacaccacc acgctggcac ccagttgatc ggcgcgagat ttaatcgccg
6061 cgacaatttg cgacggcgcg tgcagggcca gactggaggt ggcaacgcca atcagcaacg
6121 actgtttgcc cgccagttgt tgtgccacgc ggttgggaat gtaattcagc tccgccatcg
6181 ccgcttccac tttttcccgc gttttcgcag aaacgtggct ggcctggttc accacgcggg
6241 aaacggtctg ataagagaca ccggcatact ctgcgacatc gtataacgtt actggtttca
6301 cattcaccac cctgaattga ctctcttccg ggcgctatca tgccataccg cgaaaggttt
6361 tgcgccattc gatggtgtcc gggatctcga cgctctccct tatgcgactc ctgcattagg
6421 aagcagccca gtagtaggtt gaggccgttg agcaccgccg ccgcaaggaa tggtgcatgc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4153/pECMV-3×FLAG-VNN2(2同义突变）人源基因质粒 |
| P4154/pECMV-3×FLAG-LYN(1同义突变）人源基因质粒 |
| P4155/pECMV-3×FLAG-TOMM20人源基因质粒 |
| P4156/pECMV-3×FLAG-ZDHHC16人源基因质粒 |
| P4157/pECMV-3×FLAG-HMGB2人源基因质粒 |
| P4158/pECMV-3×FLAG-ATP6V1E2人源基因质粒 |
| P4159/pECMV-3×FLAG-CLEC4D人源基因质粒 |
| P4160/pECMV-3×FLAG-CDCP1人源基因质粒 |
| P4161/pECMV-3×FLAG-CARS人源基因质粒 |
| P4162/pECMV-3×FLAG-MGST1人源基因质粒 |
| P4163/pECMV-3×FLAG-KLHL12人源基因质粒 |
| P4164/pECMV-3×FLAG-BCL2L14人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
shinesnowing 想构建一个能通过接合作用进入野生型弧菌并在其中表达外源基因的质粒，现在找到一个名为pBOR8的质粒，只有质粒简图，没找到全序列，质粒上的元件为ori R6K、mob RP4、Ap、lacIq，如下图: 现有两个问题想请教各位高人 （1）该质粒能否直接作为表达载体，将外源基因克隆到该质粒上，如果可以通常外源基因应该克隆到哪个位点？ （2）如果不能直接进行外源基因克隆和表达，那么应该
分，一是未稳定整合的，一是稳定整合的，所以开始时亮度要高。 2.为什么筛选后单克隆无荧光：首先，经过G418筛选，外源质粒不能整合入染色体的细胞死亡；其次，稳定整合的细胞外源质粒整合的位置存在位置效应，即整合于不利于外源基因表达的位置，从而使外源基因沉默；第三，我不知道你的质粒中是否加入了核糖体进入位点序列，如果有的话，研究显示该位点前后的基因表达水平存在不同，可以查查相关文献 3.有无好的办法：我认为没有，稳定转染筛选时有运气的成分，假如外源质粒恰好整合到了利于表达的染色体部位，这时筛
一、实验目的 学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。 二、实验原理 上图所示是脂质体介导转染的示意图，它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。 外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入
pT7-His-GSK3B人源基因质粒
￥100 - 1000
