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- 详细信息
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- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_001142564.1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pUC57-CNGA1-FLAG人源基因质粒
别称: NM_001142564.1
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：人
基因类型：cDNA
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pUC57-CNGA1-FLAG质粒是克隆有CNGA1人源基因的非表达重组质粒，可用做扩增CNGA1基因的PCR模板，也可以用XhoI和EcoRI双酶切下CNGA1基因。pUC57-CNGA1-FLAG质粒由武汉淼灵生物科技有限公司构建并分享至淼灵质粒平台。。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4745 bp ds-DNA circular SYN 15-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4745)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 15, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4745
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 402..2471
/label=CNGA1
/note="GenBank: BC140399.1"
CDS 2472..2495
/codon_start=1
/product="FLAG(R) epitope tag, followed by an enterokinase
cleavage site"
/label=FLAG
/translation="DYKDDDDK"
rep_origin complement(2926..3514)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3685..4545)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(4546..4650)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca
61 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg
121 ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc
181 accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc
241 attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat
301 tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt
361 tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtctcga gatgaaacta tccatgaaga
421 acaatattat caatacacag cagtcttttg taaccatgcc caatgtgatt gtaccagata
481 ttgaaaagga aatacgaagg atggaaaatg gagcatgcag ctccttttct gaggatgatg
541 acagtgcctc tacatctgaa gaatcagaga atgaaaaccc tcatgcaagg ggttccttta
601 gttataagtc actcagaaag ggaggaccat cacagaggga gcagtacctg cctggtgcca
661 ttgcactttt taatgtgaac aacagcagca ataaggacca ggaaccagaa gaaaaaaaga
721 aaaagaaaaa agaaaagaag agcaagtcag atgataaaaa cgaaaataaa aacgacccag
781 agaagaaaaa gaagaaaaag gacaaagaga agaaaaagaa agaggagaaa agcaaagata
841 agaaagaaga ggagaagaaa gaagttgtgg ttattgatcc ctcgggaaac acatattaca
901 actggctgtt ttgcatcaca ttacctgtta tgtacaactg gacaatggtt attgccagag
961 catgttttga tgaacttcaa tctgattacc tagaatattg gctcattttg gattacgtat
1021 cagacatagt ctatttaatc gatatgtttg tacgaacaag gacaggttac ctagaacaag
1081 gactgctggt aaaggaagaa cttaaactca taaataaata taaatccaac ttgcaattta
1141 aacttgatgt tctgtcactg ataccaactg atttgctgta ttttaagtta gggtggaact
1201 atccagaaat tagattaaac aggttgttac ggttctctcg tatgtttgag ttcttccaga
1261 gaacagaaac aaggacaaac tatccaaaca tcttcaggat ttccaacctt gttatgtata
1321 tcgtcatcat tatccactgg aatgcatgtg tgttctactc tatttctaaa gctattggat
1381 ttggaaatga tacatgggtc taccctgata ttaatgatcc tgaatttggc cgtttggcta
1441 gaaaatacgt atacagcctt tactggtcta cactgacttt gactaccatt ggtgaaacac
1501 cccctcccgt gagggattct gagtatgtct ttgtggtggt tgatttccta attggagtgt
1561 taatttttgc taccatcgtt ggtaacatag gttctatgat ttccaacatg aatgcagcca
1621 gagcagaatt tcaagcaaga attgatgcta tcaagcaata tatgcatttt cgaaatgtaa
1681 gcaaagatat ggaaaagagg gttattaaat ggtttgacta cctgtggacc aacaaaaaaa
1741 cagttgatga gaaagaagtc ttaaagtatc tacctgataa actaagagca gaaattgcca
1801 tcaacgttca cttagacaca ttaaaaaagg tacgcatttt tgctgattgt gaagctggtc
1861 tgttggtgga gttggtcttg aaattgcaac cccaagtcta cagtcctgga gattatattt
1921 gcaagaaagg ggatatcgga cgagagatgt acattatcaa ggaaggcaaa ctcgctgtgg
1981 tggcagatga tggagtcact cagtttgtgg tattgagcga tggcagctac ttcggtgaga
2041 tcagcattct taacattaaa gggagcaaag ctggcaatcg aagaacggcc aatattaaaa
2101 gtattggcta ctcagacctg ttctgtctct caaaagatga cctcatggaa gctctaactg
2161 agtacccaga tgccaaaact atgctggaag agaaagggaa gcagatttta atgaaagatg
2221 gtctactgga tctaaacatt gcaaatgctg gcagtgatcc taaagatctt gaagagaagg
2281 ttactcgaat ggaggggtca gtagacctcc tgcaaaccag gtttgcccga atcttggctg
2341 agtatgagtc catgcagcag aaactgaaac aaagattaac caaggttgag aaatttctga
2401 aaccgcttat tgacacagaa ttttcaagta ttgagggacc tggagcggaa agtgggccca
2461 tcgactctac agattacaag gatgacgacg ataagtagga attccaagct tggcgtaatc
2521 atggtcatag ctgtttcctg tgtgaaattg ttatccgctc acaattccac acaacatacg
2581 agccggaagc ataaagtgta aagcctgggg tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat
2641 tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg
2701 aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct
2761 cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc
2821 ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg
2881 ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg
2941 cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg
3001 actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac
3061 cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca
3121 tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt
3181 gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc
3241 caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag
3301 agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac
3361 tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt
3421 tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa
3481 gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg
3541 gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa
3601 aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat
3661 atatgagtaa acttggtctg acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc
3721 gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat
3781 acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc
3841 ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc
3901 tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag
3961 ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg
4021 ctcgtcgttt ggtatggctt cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg
4081 atcccccatg ttgtgcaaaa aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag
4141 taagttggcc gcagtgttat cactcatggt tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt
4201 catgccatcc gtaagatgct tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga
4261 atagtgtatg cggcgaccga gttgctcttg cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc
4321 acatagcaga actttaaaag tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc
4381 aaggatctta ccgctgttga gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc
4441 ttcagcatct tttactttca ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc
4501 cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tcctttttca
4561 atattattga agcatttatc agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat
4621 ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt
4681 ctaagaaacc attattatca tgacattaac ctataaaaat aggcgtatca cgaggccctt
4741 tcgtc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pUC57-CNGA1-FLAG人源基因质粒
别称: NM_001142564.1
| 质粒分类: | 基因文库质粒；人源基因质粒；人源克隆质粒 |
|---|
| 质粒大小: | 4745bp |
|---|
| 质粒标签: | C-FLAG |
|---|
| 5'测序引物: | M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT |
|---|
| 3'测序引物: | M13R：CAGGAAACAGCTATGACC |
|---|
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：人
基因类型：cDNA
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pUC57-CNGA1-FLAG质粒是克隆有CNGA1人源基因的非表达重组质粒，可用做扩增CNGA1基因的PCR模板，也可以用XhoI和EcoRI双酶切下CNGA1基因。pUC57-CNGA1-FLAG质粒由武汉淼灵生物科技有限公司构建并分享至淼灵质粒平台。。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4745 bp ds-DNA circular SYN 15-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4745)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 15, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4745
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 402..2471
/label=CNGA1
/note="GenBank: BC140399.1"
CDS 2472..2495
/codon_start=1
/product="FLAG(R) epitope tag, followed by an enterokinase
cleavage site"
/label=FLAG
/translation="DYKDDDDK"
rep_origin complement(2926..3514)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3685..4545)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(4546..4650)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca
61 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg
121 ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc
181 accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc
241 attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat
301 tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt
361 tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtctcga gatgaaacta tccatgaaga
421 acaatattat caatacacag cagtcttttg taaccatgcc caatgtgatt gtaccagata
481 ttgaaaagga aatacgaagg atggaaaatg gagcatgcag ctccttttct gaggatgatg
541 acagtgcctc tacatctgaa gaatcagaga atgaaaaccc tcatgcaagg ggttccttta
601 gttataagtc actcagaaag ggaggaccat cacagaggga gcagtacctg cctggtgcca
661 ttgcactttt taatgtgaac aacagcagca ataaggacca ggaaccagaa gaaaaaaaga
721 aaaagaaaaa agaaaagaag agcaagtcag atgataaaaa cgaaaataaa aacgacccag
781 agaagaaaaa gaagaaaaag gacaaagaga agaaaaagaa agaggagaaa agcaaagata
841 agaaagaaga ggagaagaaa gaagttgtgg ttattgatcc ctcgggaaac acatattaca
901 actggctgtt ttgcatcaca ttacctgtta tgtacaactg gacaatggtt attgccagag
961 catgttttga tgaacttcaa tctgattacc tagaatattg gctcattttg gattacgtat
1021 cagacatagt ctatttaatc gatatgtttg tacgaacaag gacaggttac ctagaacaag
1081 gactgctggt aaaggaagaa cttaaactca taaataaata taaatccaac ttgcaattta
1141 aacttgatgt tctgtcactg ataccaactg atttgctgta ttttaagtta gggtggaact
1201 atccagaaat tagattaaac aggttgttac ggttctctcg tatgtttgag ttcttccaga
1261 gaacagaaac aaggacaaac tatccaaaca tcttcaggat ttccaacctt gttatgtata
1321 tcgtcatcat tatccactgg aatgcatgtg tgttctactc tatttctaaa gctattggat
1381 ttggaaatga tacatgggtc taccctgata ttaatgatcc tgaatttggc cgtttggcta
1441 gaaaatacgt atacagcctt tactggtcta cactgacttt gactaccatt ggtgaaacac
1501 cccctcccgt gagggattct gagtatgtct ttgtggtggt tgatttccta attggagtgt
1561 taatttttgc taccatcgtt ggtaacatag gttctatgat ttccaacatg aatgcagcca
1621 gagcagaatt tcaagcaaga attgatgcta tcaagcaata tatgcatttt cgaaatgtaa
1681 gcaaagatat ggaaaagagg gttattaaat ggtttgacta cctgtggacc aacaaaaaaa
1741 cagttgatga gaaagaagtc ttaaagtatc tacctgataa actaagagca gaaattgcca
1801 tcaacgttca cttagacaca ttaaaaaagg tacgcatttt tgctgattgt gaagctggtc
1861 tgttggtgga gttggtcttg aaattgcaac cccaagtcta cagtcctgga gattatattt
1921 gcaagaaagg ggatatcgga cgagagatgt acattatcaa ggaaggcaaa ctcgctgtgg
1981 tggcagatga tggagtcact cagtttgtgg tattgagcga tggcagctac ttcggtgaga
2041 tcagcattct taacattaaa gggagcaaag ctggcaatcg aagaacggcc aatattaaaa
2101 gtattggcta ctcagacctg ttctgtctct caaaagatga cctcatggaa gctctaactg
2161 agtacccaga tgccaaaact atgctggaag agaaagggaa gcagatttta atgaaagatg
2221 gtctactgga tctaaacatt gcaaatgctg gcagtgatcc taaagatctt gaagagaagg
2281 ttactcgaat ggaggggtca gtagacctcc tgcaaaccag gtttgcccga atcttggctg
2341 agtatgagtc catgcagcag aaactgaaac aaagattaac caaggttgag aaatttctga
2401 aaccgcttat tgacacagaa ttttcaagta ttgagggacc tggagcggaa agtgggccca
2461 tcgactctac agattacaag gatgacgacg ataagtagga attccaagct tggcgtaatc
2521 atggtcatag ctgtttcctg tgtgaaattg ttatccgctc acaattccac acaacatacg
2581 agccggaagc ataaagtgta aagcctgggg tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat
2641 tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg
2701 aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct
2761 cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc
2821 ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg
2881 ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg
2941 cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg
3001 actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac
3061 cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca
3121 tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt
3181 gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc
3241 caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag
3301 agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac
3361 tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt
3421 tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa
3481 gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg
3541 gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa
3601 aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat
3661 atatgagtaa acttggtctg acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc
3721 gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat
3781 acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc
3841 ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc
3901 tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag
3961 ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg
4021 ctcgtcgttt ggtatggctt cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg
4081 atcccccatg ttgtgcaaaa aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag
4141 taagttggcc gcagtgttat cactcatggt tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt
4201 catgccatcc gtaagatgct tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga
4261 atagtgtatg cggcgaccga gttgctcttg cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc
4321 acatagcaga actttaaaag tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc
4381 aaggatctta ccgctgttga gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc
4441 ttcagcatct tttactttca ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc
4501 cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tcctttttca
4561 atattattga agcatttatc agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat
4621 ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt
4681 ctaagaaacc attattatca tgacattaac ctataaaaat aggcgtatca cgaggccctt
4741 tcgtc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3655/pCMV-SPORT6-CREB1人源基因质粒 |
| P3656/pCMV-SPORT6-STK3人源基因质粒 |
| P3657/pCMV-SPORT6-GTF3C5人源基因质粒 |
| P3658/pCMV-SPORT6-CHI3L2(1点突变）人源基因质粒 |
| P3659/pCMV-SPORT6-STMN4人源基因质粒 |
| P3660/pCMV-SPORT6-FAM104A人源基因质粒 |
| P3661/pCMV-SPORT6-B3GAT1人源基因质粒 |
| P3662/pCMV-SPORT6-BAALC（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3663/pCMV-SPORT6-PLCD3（516-2370bp1同义突变）人源基因质粒 |
| P3664/pCMV-SPORT6-EFEMP2（1点突变）人源基因质粒 |
| P3665/pCMV-SPORT6-LPL（点突变）人源基因质粒 |
| P3666/pCMV-SPORT6-SPHK2人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
条件:①容易进入寄主细胞；②进入寄主细胞后能够独立进行自主的复制和表达；③容易从宿主细胞中分离纯化。 在基因工程中常用的载体有： 1.质粒——环状双链小型 DNA 分子，种类丰富,常见的有pUC系列、pET系列等。 2.噬菌体——如λ噬菌体，用于细菌细胞。 3.病毒——如猿猴空泡病毒SV40，常用作动物细胞基因工程的载体。 含有目的基因的DNA片段和载体DNA连接技术即DNA重组技术，其核心步骤是DNA片段之间的体外连接，涉及限制酶、连接酶等的酶促反应。把目的
表达载体的构建方法及步骤 一、载体的选择及如何阅读质粒图谱 目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素： （1）复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而 真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。 （2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如 Amp+ ,Kan+ （3）多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段 （4） P/E 启动子/增强
大肠杆菌(Escherichia coli)是分子遗传学实验、基因工程操作中广泛采用的一种受体菌，它的遗传背景研究的比较详细，常用做寄主进行基因扩增及外源基因的表达。 一. 实验目的 : 掌握大肠杆菌的对照培养、单菌落的分离及菌种保存方法。 二. 实验原理 : 大肠杆菌除本身的核染色体外，往往还含有质粒(Plasmid)DNA，这是一种双链闭合环状
pUC57-CNGA1-FLAG人源基因质粒
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