冻存液

如何让细胞乖乖的死去活来

科幻电影中将冻存若干年的生命体重新解冻复活的情节在生命科学研究过程中每一天都在上演。为了将每一种有生命的细胞较好的保存其原有的细胞特性或者长久的保存种质资源，实验人员往往将细胞用特殊配置的细胞冻存液保存于-196℃ 的液氮，使得细胞暂时脱离生长状态，等到实验需要的时候再从液氮中取出复苏应用。在这一看似神奇的生命存储过程中，我们不禁要问，这是如何实现的呢？ 其实，细胞冻存和复苏的教科书和实验手册上面都有。小编不想再重复了。这里，我要谈谈应该注意的一些事项和技巧，大部分都是血泪教训

人外周血PBMC的制备及注意事项

mL离心管，且离心管使用量不要超过三分之一，可以将血样进行等分后加入多个离心管。 分选后的细胞样本直接诱导阻断进行细胞因子的检测，效果最佳，分选后的样本也可冻存，需要的时候再诱导检测。 诱导阻断后来不及检测的样本，最好冻存，并在 3 天内检测效果最好。冻存液推荐使用 90% 的FBS+10% 的 DMSO。冻存 24h 再检测，结果无大的影响；冻存 3 天再检测，CD3 和 IFN-γ 表达略有降低；冻存1周后再复苏检测，CD3和IFN-γ表达较大幅度降低。 Ficoll 分离液分离后图片：

原代细胞培养注意事项有哪些？

可以适当提高冻存液中的血清浓度； 很多原代细胞的体外培养需要加入生长因子，细胞才能正常生长增殖和分化； 理论上，在显微镜下可以观察到梭形的细胞说明传代培养成功。和原代培养的观察类似。但是总的来说，我们实验室的实验结果不是很好，观察到的好的细胞很少，其原因可能和原代培养时候的相近； 细胞增殖分化缓慢：有些原代细胞体外培养需要加入生长因子，细胞才可正常增殖和分化，因而，实验前要根据具体细胞配置相应培养基； 细胞污染：细胞污染类型分为物理污染、化学污染以及生物污染，因而原代培养要严格无菌操作，培养基专用专配