冻存液

如何让细胞乖乖的死去活来

科幻电影中将冻存若干年的生命体重新解冻复活的情节在生命科学研究过程中每一天都在上演。为了将每一种有生命的细胞较好的保存其原有的细胞特性或者长久的保存种质资源，实验人员往往将细胞用特殊配置的细胞冻存液保存于-196℃ 的液氮，使得细胞暂时脱离生长状态，等到实验需要的时候再从液氮中取出复苏应用。在这一看似神奇的生命存储过程中，我们不禁要问，这是如何实现的呢？ 其实，细胞冻存和复苏的教科书和实验手册上面都有。小编不想再重复了。这里，我要谈谈应该注意的一些事项和技巧，大部分都是血泪教训

培养细胞的保存和复苏

长期保存。（4）复苏：急速融化复苏可防止损害细胞。冻结细胞从液氮中取出后，应立即放入37℃~43℃的水浴中，30秒至一分钟内融化。2、冻存与复苏方法适用于原始组织、原代细胞和细胞系（株）。（1）细胞用胰蛋白酶+EDTA消化后用冻存液稀至2~5X106/ml。（2）分装于2ml冻存管中，装量1ml，封口，作好标记，用几层纱布扎好。（3） 冻存管进入液氮前应有一个渐降温的过程，以1℃/min的速度降温，一般挂在液氮上空8小时后，投入液氮贮存罐中长期保存。（4）为使冻存的细胞复苏，将冻存管置于37℃~43℃水浴中，充分

人外周血PBMC的制备及注意事项

mL离心管，且离心管使用量不要超过三分之一，可以将血样进行等分后加入多个离心管。 分选后的细胞样本直接诱导阻断进行细胞因子的检测，效果最佳，分选后的样本也可冻存，需要的时候再诱导检测。 诱导阻断后来不及检测的样本，最好冻存，并在 3 天内检测效果最好。冻存液推荐使用 90% 的FBS+10% 的 DMSO。冻存 24h 再检测，结果无大的影响；冻存 3 天再检测，CD3 和 IFN-γ 表达略有降低；冻存1周后再复苏检测，CD3和IFN-γ表达较大幅度降低。 Ficoll 分离液分离后图片：