手机验证
大量
MycAway™ Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit
点击查看
有效期1年
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
-20℃保存
5T
产品信息
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格(元) |
促销价(元) |
MycAway™ Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit 支原体qPCR检测试剂盒(探针法) |
40618ES05 |
5 T |
855 |
595 |
40618ES25 |
25 T |
4155 |
3155 |
|
40618ES60 |
100 T |
13855 |
10355 |
产品描述
MycAway™ Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit 作为精确支原体检测试剂盒,可用于确定如细胞库、病毒种子、临床治疗用途的细胞和生物制品中是否存在支原体污染。本试剂盒采用荧光探针qPCR法技术,定性检测待测样本中支原体DNA,可覆盖100多种支原体DNA序列;具备高灵敏、高特异、高效率、安全高等优势,严格按照EP2.6.7和JPXVII支原体检测相关标准要求进行验证。
本试剂盒包含内部质控(IC),可用来判断待检样本中是否包含对扩增反应存在抑制的因素,从而达到防止假阴性结果的产生;内部质控(IC)也可在样本提取阶段加入,以评估提取效果。本试剂盒与支原体DNA提取纯化试剂盒配套使用,高效提取样本中的支原体DNA,检测限可达到10 CFU/mL,最高灵敏度可达1 CFU/mL。
产品组分
编号 |
组分 |
产品编号/规格 |
||
40618ES05 (5T) |
40618ES25 (25 T) |
40618ES60 (100 T) |
||
40618-A |
4×MyqPCR Reaction Buffer |
50 μL |
250 μL |
1 mL |
40618-B |
MyPrimer&Probe MIX |
5 μL |
25 μL |
100 μL |
40618-C |
内部质控(IC) |
5μL |
25 μL |
100 μL |
40618-D |
阳性质控(PC) |
100 μL |
500 μL |
2 mL |
【注】:阳性质控(PC)浓度为1000copies/µL。
运输储存方法
干冰运输。-20℃保存,有效期一年。
注意事项
1)使用本试剂前请仔细阅读本说明书,实验应规范操作,包括样本处理、反应体系的配制及加样。
2)加样和配液步骤都尽量在冰上操作。
3)每个组分在使用前都应震荡混匀,低速离心。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
5)本产品仅作科研用途。
适用机型
PRISM® 7500Real-Time PCR System、QuantStudio™ 5(ABI);CFX96(Bio-Rad)
实验设计
一、待测样本DNA提取
建议使用QIAGEN公司的QIAamp DNA Mini Kit提取样本DNA。
二、qPCR反应体系的准备
1)根据所要检测样本的数量,计算所需反应孔数,一般做2个重复孔。
反应孔数=(1个阳性质控PC+1个无模板对照NTC+N个待测样本)×2
2)根据表1反应体系,将所需试剂放冰上融化。
3)根据反应孔数计算所需要的qPCR Mix的量。
Mix=(反应孔数+2)*(10+1+1+8)(包含加样损失)
表1. 反应体系(以40 μL为例)
组分 |
单孔体积(μL) |
终浓度 |
4× MyqPCR Reaction Buffer (40618-A) |
10 |
1× |
待测样本DNA/阳性质控 |
20 |
|
MyPrimer&Probe MIX (40618-B) |
1 |
0.4 μM |
IC (40618-C) |
1 |
|
超纯水 |
8 |
|
Total |
40 |
【注】:
1)为保证实验的稳定性,40618-A、40618-B组分需储存于-20℃。
2)为减少反复冻融次数和避免污染,建议初次使用时将40618-C、40618-D分装储存于-80℃。
3)qPCR Mix配制过程不加待测样本DNA与阳性质控。
三、加样
1)充分震荡混匀qPCR Mix,低速离心,将管盖残留液体收集至管底。
2)向每孔反应管中分装20μL qPCR Mix。
3)向已分装过qPCR Mix的反应管中加入样品,示例如下:
表2. 加样示例
待测样本DNA |
20 μL qPCR Mix+20 μL 待测样本DNA |
NTC对照 |
20 μL qPCR Mix+20 μL DNA Elution Buffer (或者ddH2O) |
阳性质控(PC) |
20 μL qPCR Mix +20 μL 阳性质控 |
【注】:此时每个反应孔的体积为40μL
4)盖上反应管盖子或者贴上光学膜,为避免影响荧光信号读取,请注意不要在管盖或者膜上做标记,或者用刮板反复摩擦。
5)反应管短时低速离心,将管壁液体收集至管底;充分震荡混匀后,再短时低速离心,将管盖和管壁的残留液体收集至底,如有气泡,需将气泡排尽。
qPCR程序参数设置
1、创建目的通道探针:
创建目的通道的FAM探针,选择报告荧光基团为FAM,猝灭荧光基团为none;
创建IC 通道的VIC探针,选择报告荧光基团为VIC,猝灭荧光基团为none;
选择检测参比荧光为ROX(可选择,试剂盒中不含)。
2、标准扩增程序:
反应阶段 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
1 |
预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
2 |
扩增反应 |
95℃ |
15 sec |
45 |
62℃* |
30 sec |
【注】:* 荧光信号采集。
结果分析
1、PC、NTC结果判断:
质控样本 |
FAM 信号 |
VIC 信号 |
PC |
Ct<40 ,且有明显的扩增曲线。 |
Ct<40 ,且有明显的扩增曲线。 |
NTC |
Ct≧40 ,或无明显的起峰 |
Ct≧40 ,或无明显的起峰 |
2、待测样本检测结果判定:
FAM 信号 |
VIC 信号 |
结果判断 |
Ct<40 ,且有明显的扩增曲线 |
Ct<40 ,且有明显的扩增曲线 |
阳性 |
Ct≧40 ,或无明显的起峰 |
有抑制 |
|
Ct≧40 ,或无明显的起峰 |
Ct<40 ,且有明显的扩增曲线 |
阴性 |
Ct≧40 ,或无明显的起峰 |
有抑制 |
【注】:*VIC信号如果有抑制,需重测或对样本进行合适处理消除抑制因子
HB210901
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
需要更多技术资料 索取更多技术资料
40618ES25.pdf 附 (下载 0 次)