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晶莱生物
骨组织脱钙(小)
样本
病理实验制片过程中,我们经常会遇到含钙高的组织,因其组织结构质地太硬,组织中存有的钙盐会妨碍使用常规方法制作良好切片,经固定后,必须除去钙盐使组织软化,方能进行常规切片。
骨组织含钙量最多,所以脱钙是制作骨组织切片的重要环节,尤其需要进行免疫组化的骨组织。
为了达到骨组织既充分脱钙,又保护骨组织的抗原不受破坏,需对骨组织固定之后再脱钙或采用兼有固定与脱钙的试剂处理,然后才能常规制片。
一、骨脱钙方法
常见的脱钙方法主要有单纯酸类脱钙法、混合酸类脱钙法以及有机螯合剂法。
单纯酸类脱钙法:
主要有甲酸、硝酸、盐酸等,硝酸和甲酸应用最多。
① 甲酸是一种使用范围较广的脱钙剂,浓度一般10%,脱钙速度较慢,适合骨髓组织脱钙,不适合皮质骨的脱钙。
② 硝酸脱钙液缺点是形成亚硝酸而使溶液呈黄色,产生颜色即迅速影响脱钙速度,且组织的黄染会妨碍随后的染色,可在硝酸内加入0.1%尿素可以防止变黄而使之无色。
③ 盐酸脱钙液易使组织收缩,作用速度较快,用氯化钠作为溶剂则效果良好。
混合酸类脱钙法:
两种酸类脱钙剂一起使用,或在单纯酸内加入另一种脱钙剂或少量的其它试剂所配制的脱钙液。
特点是脱钙完全,快速,防止纤维组织过度膨胀,减少组织破坏对染色结果的影响,通过加入不同的化学成分可以弥补单纯酸类脱钙剂的不足。
① 含甲酸脱钙液(甲酸-福尔马林液)
配方:甲酸 5-25ml
福尔马林 5ml
蒸馏水 加至 100ml
5%的甲酸是良好的一种常规脱钙剂,速度适当,组织损害小。当甲酸成分增至25%则增快脱钙速度,加入甲醛可适当保护组织不受酸损害(注意:增加脱钙速度只能靠牺牲细胞微细构造来获得)。根据组织的厚度和钙化程度,5%甲酸在2至4天可以完全脱钙。
② 含盐酸脱钙液(Von Ebnei氏液)
配方:浓盐酸 15ml
氯化钠 7.5ml
蒸馏水 加至 100ml
③ 含硝酸脱钙液
配方1:福尔马林 5ml
硝酸(比重1.41) 7.5-15ml
蒸馏水 加至 100ml
此配方中甲醛可以部分抑制硝酸的浸软作用,同时具有固定作用,硝酸脱钙迅速,组织不膨胀,掌握好可以直接脱水,不影响染色。不过最好先洗去硝酸。
配方2:硝酸(用0.1尿素稳定) 5-10ml
蒸馏水 加至 100ml
此配方用作常规脱钙剂,作用迅速,对组织不膨胀,对细胞的保存和染色比前者更好,能适用于多种染色技术,但最好每日早晚更换一次新鲜溶液,一般1-3天完成。
④ 螯合剂脱钙
EDTA(乙er胺四乙酸)是用于脱钙的螯合剂。为有机化合物,有结合某些金属的能力,能结合钙盐,15%的溶液即起脱钙作用,组织用此方法脱钙,对组织破坏性小,即放置数月亦不致引起对组织的破坏,对以后大多数的染色技术皆可得到满意结果。
二、骨脱钙步骤
1.取材:将骨组织固定于10%福尔马林24小时后再锯取厚度约0.5厘米骨片。
2.固定:再以10%福尔马林固定2天。
3.将组织置于脱钙剂中,每日更换新鲜液、直至组织软化为止。
4.流水冲洗24小时/2%亚硫酸钠水溶液中和,至少3小时,水洗至少1小时(除酸)。
5.进行常规脱水,透明,浸蜡,切片。
三、鉴定脱钙是否彻底
确定脱钙“终点”有以下三种方法:
1. 最常用的是最简单的方法――针刺,如果很容易被刺透,而且不感到阻力时,说明组织基本上脱钙完全,否则应继续脱钙。
靠组织的柔软性测验脱钙作用靠不住,而且这种插入一根针以察觉钙沉淀的方法会造成组织损伤。
2.用X射线检查:看组织内是否仍有钙质。
3.用化学实验检查:
取5ml脱钙液用2M的NaOH(氢氧Hua钠)调整至中性,再加5%草酸钠或草酸铵1ml,液体混浊表示有钙质。迟至5分钟仍不混浊表示脱钙液中不含有钙质。
组织中仍有钙质时,一定量的钙离子会溶于脱钙液中,游离的钙会干扰脱钙作用的完成。显然,应在每次试验时完全更换,在试验中必须经过2-3小时间隔让钙溶解。
四、优质脱钙剂的标准
(a)完全脱钙;
(b)不损伤组织细胞或纤维;
(c)不妨碍以后的染色技术;
(d)适当的脱钙速度。
晶莱生物服务流程
晶莱生物实验服务项目
动物实验 | 细胞生物学 | 病理实验 |
消化系统模型 | 细胞培养 | 病理染色 |
胃酸分泌模型 | 普通细胞株 | HE染色 |
脓毒症模型 | 细胞缺氧培养 | 油红O染色 |
胃溃疡模型 | 细胞培养+支架 | 番红固绿染色 |
胰腺炎模型 | 干细胞培养 | Masson染色 |
肝纤维化模型 | 原代细胞分离/提取/培养 | 天狼猩红染色 |
DIO肥胖模型 | 细胞转染/病毒感染 | PAS糖原染色 |
胆结石模型 | Trans well共培养 | 阿利新蓝染色 |
结肠炎(UC)模型 | 细胞增殖 | 甲苯胺蓝染色 |
脂肪肝模型 | 细胞计数 | 尼氏染色 |
急性肝损伤模型 | 生长曲线测定 | LFB髓鞘染色 |
免疫、代谢系统疾病模型 | 存活曲线测定 | 普鲁士蓝染色 |
骨质疏松模型 | ccK-8增殖检测 | VG染色 |
糖尿病模型 | MTT增殖检测 | EVG染色 |
高尿酸血症模型 | CFSE检测增殖-流式检测 | VonKossa染色 |
呼吸系统模型 | BrDU检测-免疫荧光法 | 刚果红染色 |
肺纤维化模型 | 细胞凋亡 | 苏丹黑B染色 |
慢性肺阻塞模型 | Annexin V/PI流式检测细胞凋亡 | Trap染色 |
急性肺损伤模型 | WB检测凋亡相关蛋白 | 抗酸染色 |
哮喘模型 | 透射电镜观察凋亡小体 | 革兰氏染色 |
肺栓塞模型 | Tunel染色(POD法,DAB显色) | AB-PAS染色 |
支气管炎模型 | Tunel(荧光法,含试剂盒) | 亚甲基蓝染色 |
泌尿生殖系统模型 | DNA ladder法 | 苯胺蓝染色 |
慢性肾衰模型 | 细胞周期 | 荧光 DAPI染色 |
急性肾衰模型 | 细胞显微计数 | 普鲁士蓝染色 |
肾间质纤维化模型 | PI染色 | 间苯二酚碱性品红染色 |
肾结石模型 | BrdU渗入法 | 银染 |
肾炎模型 | 免疫荧光染色 | 黑色素染色 |
子宫内膜异位症模型 | PI流式检测细胞周期 | 镀银染色 |
心血管系统模型 | 细胞运动 | PASM 六胺银染色 |
冠心病模型 | Transwell检测细胞迁移 | VG染色 |
心肌梗死模型 | Transwell检测细胞侵袭 | 富尔根染色 |
心脏骤停模型 | 细胞划痕 | 亚甲基蓝染色 |
慢性心力衰竭模型 | 细胞克隆 | 碘-碘化钾染色 |
动脉粥样硬化模型 | 集落形成法/稀释铺板方法 | Goldner三色法染色 |
白血病模型 | 软琼脂克隆法 | PAS-萘酚磺S染色 |
高血压模型 | 毛细管克隆法 | 改良苯酚品红染色 |
神经系统模型 | 体外实验血管生成 | 网状纤维染色 |
脑卒中模型 | 磁珠分选细胞 | β-半乳糖苷酶染色 |
栓塞性脑梗死模型 | 流式分选细胞 | 镀银染色 |
脑出血模型 | 开机费 | movat五色染色 |
脑损伤模型 | 单色 | 维多利亚蓝染色 |
脊髓损伤模型 | 双色 | 免疫组化 |
帕金森模型 | CBA多细胞因子流式检测 | 免疫组化预式 |
老年痴呆模型 | 组织/血液细胞制备 | 免疫组化正式 |
应激模型 | 组织单细胞制备 | 免疫荧光(石蜡-单标) |
骨骼疾病模型 | 中性粒细胞提取 | 免疫荧光(石蜡-双标) |
骨折模型 | 其他样本细胞制备(如血液等) | 免疫荧光(石蜡-三标) |
骨缺损模型 | 外周血PBMC分离 | 免疫荧光(冰冻-单标) |
风湿免疫性关节炎模型 | 线粒体组学 | 免疫荧光(冰冻-双标) |
骨关节炎模型 | 线粒体膜电位检测-流式法 | 制片前处理 |
五官疾病模型 | 线粒体膜电位检测-免疫荧光法 | 石蜡组织包埋 |
眼科疾病模型 | 线粒体ROS生物含量检测--流式 | 特殊包埋(细胞、材料、眼球等) |
鼻腔疾病模型 | 线粒体ROS生物含量检测--免疫荧光 | 软化(肝硬化、皮肤结痂、植物等) |
皮肤疾病模型 | 线粒体通透性转换孔(mPTP) | 骨组织脱钙(小) |
皮肤损伤模型 | 溶酶体免疫荧光法 | 骨组织脱钙(大) |
肿瘤疾病模型 | 线粒体+溶酶体共定位 | 骨组织EDTA脱钙(小) |
原位瘤模型 | 内质网 | 骨组织EDTA脱钙(大) |
转移瘤模型 | 线粒体钙瞬时变化检测-流式 | 石蜡白片 |
皮下植瘤模型 | ATP检测 | 细胞爬片 |
ADP检测 | ||
AMP检测 | ||
流式 | DNA/RNA半定量检测 | 基因编辑工具 |
组织细胞悬液处理 | pcr检测mRNA | 合成(3保1)片段/质粒/引物合成 |
细胞处理 | microRNA检测 | 质粒载体构建 |
血液标本处理 | LncRNA表达量的检测 | 过表达腺病毒载体构建包装 |
细胞刺激培养 | CirRNA表达量的检测 | shRNA腺病毒载体构建包装 |
单色检测 | 凝胶电泳 | 过表达慢病毒载体构建包装 |
双色检测 | 基因合成 | shRNA慢病毒载体构建包装 |
Annexin V/PI凋亡 | <300 | 过表达腺相关病毒载体构建包装 |
细胞周期 | 300-1,500 | shRNA腺病毒载体构建包装 |
1500 - 5000 | 稳转细胞株 | |
>5000 | ||
特殊序列 | ||
ELISA | WB | qPCR |
组织匀浆处理 | 蛋白提取及定量一 | RNA抽提 |
ELISA(不含试剂盒)48T/kit | WB检测一(10孔膜/指标) | mRNA引物设计及合成 |
ELISA(不含试剂盒)96T/kit | 灰度值分析及作图一(10孔膜/指标) | miRNA引物设计及合成 |
ELISA(含国产试剂盒)48T/kit | 蛋白提取及定量二 | LncRNA引物设计及合成 |
ELISA(含国产试剂盒)96T/kit | WB检测二(15孔膜/指标) | CircRNA引物设计及合成 |
灰度值分析及作图二(15孔膜/指标) | mRNA RT-qPCR | |
miRNA RT-qPCR | ||
LncRNA RT-qPCR | ||
CircRNA RT-qPCR |
收费标准/服务周期/提供结果:
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