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- BrdU检测-免疫荧光法
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- 2026年04月22日
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- 提供商：
晶莱生物
- 服务名称：
BrdU检测-免疫荧光法
- 规格：
切片/组
BrdU作为一种胸腺嘧啶核苷的类似物（其化学结构特点是胸腺嘧啶的碱基嘧啶环上与5位C原子连接的甲基被溴代替），像胸腺嘧啶核苷一样可掺入到细胞合成的DNA中。当细胞处于DNA合成期而同时又有BrdU存在时, 就会有BrdU掺入新合成的DNA中，只要细胞不消亡，这种BrdU就在胞核的DNA中长期存留。
操作步骤
1. 细胞以1.5×105 /ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0 期。
2. 终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。
3. 弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。
4. 甲醇/醋酸固定10min。
5. 经固定的玻片空气干燥，0.3％H2 O2 -甲醇30min灭活内源性氧化酶。
6. 5％正常兔血清封闭。
7. 甲酰胺100℃，5min变性核酸。
8. 冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。
9. 按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。
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2. 提供新鲜的培养细胞，提供新鲜组织，需要实验室制备成单细胞悬液。
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文献和实验免疫荧光法 immunofluorescence method
将荧光素及蕊香红等荧光色素同抗原或抗体结合，然后使与组织切片或细胞涂片标本中各个相对应的抗体或抗原结合，用荧光显微镜检查其定位的方法。由于此法是孔斯（A． H． Coons）和卡普兰（ M． H． Kaplan， 1950）所创用的。因此又称为孔斯法（ Co-on’ s method）。免疫荧光法有直接法和间接法（ sa-ndwich法）。直接法依靠荧光抗体与抗原或荧光抗原同抗体的结合；与此相反，间接法首先使抗原（抗体）结合相对应的抗体（抗原），然后让那种抗体（抗原）与相对应的荧光抗原
基本原理将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。试剂与仪器磷酸盐缓冲盐水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4荧光标记的抗体溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS进行稀释缓冲甘油：分析纯无荧光的甘油9份+ pH9.2 0.2M碳酸盐缓冲液1份配制搪瓷桶三只（内有0.01mol/L，pH
Immunoflourescent Assay (indirect) IFA immunoInflorescent assay IFA serology (looking for Ab.) used mainly in some autoimmune diseases Respiratory viral infection (e.g Influenza, RSV...etc) " 免疫荧光法的操作指南 "
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