BrdU检测-免疫荧光法

Brdu细胞增殖检测 BrdU作为一种胸腺嘧啶核苷的类似物（其化学结构特点是胸腺嘧啶的碱基嘧啶环上与5位C原子连接的甲基细胞合成的DNA中。当细胞处于DNA合成期而同时又有BrdU存在时, 就会有BrdU掺入新合成的DNA中，只要中长期存留。
操作步骤
1. 细胞以1.5×105 /ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％FC G0 期。
2. 终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。
3. 弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。
4. 甲醇/醋酸固定10min。
5. 经固定的玻片空气干燥，0.3％H2 O2 -甲醇30min灭活内源性氧化酶。
6. 5％正常兔血清封闭。
7. 甲酰胺100℃，5min变性核酸。
8. 冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。 9. 按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性
细胞增殖的流式检测BrdU法
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1. 提供新鲜的肝素或者EDTA抗凝的外周血；
2. 提供新鲜的培养细胞，提供新鲜组织，需要实验室制备成单细胞悬液。
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