同样的样本,做两次曲线肯定不是完全一样的,你需要计算两条曲线的Ct值来判断的!Ct值是结果分析的标准!这是因为,同一模板在同一台仪器上的扩增曲线不同pcr终点产物差异也很大,但是Ct只与初始模板量是有关系的。详情参看:http://www.biomart.cn/infosupply/27646868.htm
没有具体信息。每次条件的一致包括样本处理的一致
你怎么优化了一下条件,能不能详细点说明,还有就是同样的东西做了两次结果都不太一样,差别很大是指的在完全一样的操作条件下,还是东西一样的,但是条件改变了?如果都是一摸一样的条件和样品,结果不一样的话,可以考虑扩大反应体系来减少误差,枪要精准,操作要熟练,这个需要多做
优化条件的时候就越来越没有了是什么意思?条件改变了结果改变是很有可能的。同意wk125的观点,最好跑个胶看下条带的特异性,因为你是用染料法做的,扩增的特异性很重要。
我感兴趣的是你溶解曲线的峰宽怎么样? 峰的位置在哪里,在实验结果不明确的时候,可以跑个电泳看下扩增后条带怎么样,有没有非特异扩增,等等。