我跑定量的时候,怎么扩增曲线老是跑出折线呢,不是平滑的线,这是什么原因呢,求各位高手解答啊
1,体系不稳定,加大体系,2,如果是国产试剂的话可能这种现象算正常的,因为每次循环完后读荧光时,国产的染料不一定每次都结合的到DNA上,因此即使扩增出片的,也可能因为染料无法结合到DNA导致荧光值上下波动。3,引物扩增效率不高,非特异性不强,4,延伸出问题,可以考虑72度延伸时间增长,
是否加了Rox或其他矫正剂?
如果怀疑染料问题,你可以试试EVA GREEN饱和染料,要比SYBR GREEN精确很多,不过很贵哈,要是做一般的mRNA基因表达差异分析大可不必使用EVA GREEN
参比染料浓度太低
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