关键词: 双荧光素酶报告基因测试
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图4 用手工荧光照度仪或配有试剂加样器的荧光照度仪的双荧光素酶测试方式。如荧光照度仪配有两个加样器,将裂解液预先分装到荧光照度仪的管子中,随后按序自动加入Luciferase Assay Reagent II (LAR II),Stop & GloTM 试剂。
PLB裂解液
PLB裂解液 (Passive Lysis Buffer),经特别设计可有效裂解培养的哺乳细胞,而不必刮下贴壁细胞或作冻融循环。尽管PLB设计应用于被动裂解过程中,但它可靠的裂解效果同样有益于使用常规处理方法制作的裂解液。无论使用何种裂解方法,对培养的哺乳细胞而言,释放到PLB裂解液中的萤火虫和海洋腔肠荧光素酶报告基因酶是定量和可靠的 (图6)。被动裂解液的一个明显优点,是可以抑制低水平的非酶促发光 (自发光),这是海洋腔肠荧光素在水溶液中的固有特点。通常用来制备细胞裂解液的试剂可增强海洋腔肠荧光素自发光,包括Triton X-100,Promega的细胞培养裂解试(CCLR)和报告基因裂解试剂(RLB),这些试剂还会显着抑制海洋腔肠荧光素酶的发光反应。PLB经特别设计用来最大地增强荧光素酶活力,使自发光减弱到最低,可提供最优的测试灵敏度,定量很低水平的海洋腔肠荧光素酶。另外,PLB抑制发泡,非常适合高通量应用,可用于自动化系统中将培养在多孔板中的细胞组制备成裂解液并测试。
图5 双荧光素酶报告基因测试系统湮灭萤火虫荧光素酶发光和激活Renilla荧光素酶发光。CHO细胞裂解液有共转染pGL3 -Control和pRL SV40载体DNA,按图2描述的方法制备。萤火虫荧光素酶(报告基因1) 和Renilla荧光素酶 (报告基因2)活力检测在10秒内完成,最初有2秒的预读延迟。为了显示Stop & GloTM 试剂湮灭报告基因1的高效率,加入等体积的Stop & GloTM 试剂 (缺少海洋腔肠荧光素无法激活Renilla荧光素酶反应),萤火虫荧光素酶发光被湮灭而又不激活Renilla荧光素酶发光。在这一实验中,湮灭萤火虫荧光素酶反应的残留发光,小于未湮灭反应值的0.0004%。
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微球菌核酸酶实验DNA 电泳一直观察不到200bp
有人做过么?想交流一下
1 评论
请教各位大佬
具体研磨液配制的比例是多少?
楼主,那么多注释没有写明白哦,谢谢分享
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