关键词: 双荧光素酶报告基因测试
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Control和pRL SV40载体DNA.细胞用PBS洗涤后,加入400μl PLB制成裂解液。将20μl小量细胞裂解液和100μl荧光素酶测试试剂II(LARII)混合,萤火虫荧光素酶的活力立即用荧光照度仪检测(细线示踪)。100μl Stop &GloTM 试剂加入到荧光照度仪管中,湮灭萤火虫荧光素酶反应,同时激活Renilla荧光素酶反应,并立即检测Renilla荧光素酶的活力(粗线示踪)。Turner Designs 型号20/20荧光照度仪配有计算机用来示踪荧光发射,12秒内完成两次测试。
双荧光素酶报告基因测试系统的方式
定量两个报告基因荧光素酶的发光信号,可在制备裂解液后立刻进行,不需将样品分成小组分或作额外的处理。因海洋腔肠和萤火虫荧光素酶均呈现闪烁型反应动力学,作双荧光素酶报告基因测试不需要有试剂注射器的荧光照度仪。
通常DLR测试,大约需要30秒钟完成,如图4所说明。起始萤火虫荧光素酶报告基因测试时,将一份裂解产物和荧光素酶测试试剂II (LAR II)混合。在完成萤火虫荧光素酶测试时,此时萤火虫发光被湮灭,同时激活海洋腔肠荧光素酶的发光,加入Stop & GloTM 试剂到样品管。在1秒钟内,Stop & GloTM 试剂湮灭大于105 滴度萤火虫反应的发光信号(图5),并同时激活海洋腔肠荧光素酶。
图3 萤火虫荧光素酶和Renilla荧光素酶发光反应的线性范围。纯化的萤火虫和Renilla荧光素酶连续地用含1mg/ml BSA的1×PLB稀释,配有计算机的Turner Designs荧光照度仪用来检测10秒钟的总荧光,在最初2秒的预读延迟后。直接检测高浓度的两种荧光素酶的发光反应时,在荧光照度仪的样品室中加入中性密度滤光片。在含10fg和100fg的Renilla荧光素酶反应中测试发光,需减去来自海洋腔肠荧光素自发光的背景信号。两种荧光素酶的发光活力对各自的测试变化浓度作图。
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微球菌核酸酶实验DNA 电泳一直观察不到200bp
有人做过么?想交流一下
1 评论
请教各位大佬
具体研磨液配制的比例是多少?
楼主,那么多注释没有写明白哦,谢谢分享
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