立克次氏体介绍
立克次氏体(Rickettsia)是介于最小细菌和病毒之间的一类独特的微生物,它们的特点之一是多形性,可以是球杆状或杆状,还有时出现长丝状体。立克次体长0.3微米~0.8微米,宽0.3微米~0.5微米,丝状体长可达2微米。一般可在光学显微镜下观察到。
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重组病毒扩增和纯化
1. 75cm2方瓶中接种 293 细胞,至密度达到 90%,加入适量病毒上清感染细胞。 3- 4d 后,细胞几乎变圆,且有一半细胞漂浮,则收集所有细胞。约500g 转速离心,弃上清。2. 以灭菌 PBS 重悬沉淀,反复冻融4 次。4℃下 7000g 离心 5min.病毒纯化至少 需要 30 瓶 75cm2方瓶细胞。3. CsCl 连续梯度离心纯化:50ml 离心管中称量 4.4g CsCl ...
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大讨论:利用现有技术,如何鉴定一个全新的病毒呢?
80年代的技术很经典,但那时分子生物学不够发达,现在方法有无进步呢?如何利用现在的技术来鉴定全新的病毒呢?有此想法很久了,可一直未搞清楚。这也跟如何发现一个新基因的道理是相通的。这是真正创新的基础。我先来最简单的,1、采集各种病料,用各种细胞、宿主盲传,分离病毒,期望看到细胞病变。如果连细胞病变都没有,没折了?有别的办法证明有病毒吗?。2、纯化病毒,做电镜观察,与已有病毒形态、大小相似好办,要是 ...
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重组腺病毒构建,扩增及纯化基本技术操作
一 目的基因的克隆(以pshuttle-CMV质粒为例)1. 选择适当酶切位点,进行酶切连接,将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。2. 重组质粒鉴定: 酶切鉴定或测序。3. 重组质粒扩增,纯化并 ...
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