在293 细胞中大量扩增腺病毒
一旦重组病毒已被纯化和鉴定,即可在293 细胞中进行大量扩增。本手册提供了递增培养规模和腺病毒感染周期的基本方法,按这一方法最终得到的病毒量约为3×1011~3×1012。由于一个细胞中所含的病毒颗粒为1000~10000,因此1L 培养细胞可得到约5×1012 病毒颗粒。如果要把病毒用氯化铯梯度离心纯化,则必须至少3×108 的细胞,这样才能正确 ...
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病毒的鸡胚培养
一、目的要求掌握鸡胚尿囊腔接种培养新城疫病毒的操作技术。二、器材1.鸡胚 应选用健康鸡群的受精蛋,接种鸡的鸡胚应无母源抗体,以免影响病毒在胚胎中的增殖。实验用的鸡胚多采用9—10日龄的活胚。2.接种材料 新城疫I系疫苗3.各种器械 孵卵器、照蛋箱、蛋架、打孔器、1ml结核菌素注射器、41/2号注射针头、镊子、3%碘酊、75%酒精棉球、铅笔、酒精灯、剪刀、眼科镊子、灭菌的疫苗瓶、灭菌滴管 ...
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流感病毒的MDCK细胞分离方法
一、目的流感病毒的MDCK细胞分离方法是流感实验的关键技术,用于流感病毒的分离、培养。本SOP是为确保MDCK细胞分离流感病毒的操作准确、规范和可靠而制定。二、范围适用于实验室所有技术人员进行流感病毒的MDCK细胞分离。三、程序(一)生物安全要求H5H7亚型高致病性禽流感病毒,H2N2亚型流感病毒的MDCK细胞分离实验室生物安全级别:BSL-3。实验操作人员需进行BSL-3防护,具体详 ...
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重组腺病毒构建、扩增及纯化
一、目的基因的克隆(以pshuttle-CMV质粒为例):1、选择适当酶切位点,进行酶切连接,将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。2、重组质粒鉴定: 酶切鉴定或测序。3、重组质粒扩增,纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。4、用PmeI单酶切线性化重组穿梭质粒,电泳鉴定质粒完全被切开。5、胶回收线性化质粒,以备共转化 ...
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