单克隆抗体制备工艺流程
单克隆抗体制备主要步骤包括:动物免疫、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选与单抗检测、杂交瘤细胞的克隆化、单抗的鉴定及制备等。1 动物免疫根据抗原的特性选择合适的免疫方案,对于可溶性抗原免疫原性弱,一般要加佐剂。常用佐剂为福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂。要求抗原和佐剂等体积混合在一起,研磨成油包水的乳糜状。(1)初次免疫,Ag50ug/只,加福氏完全佐剂皮下多点注射,一般1.5ml,间隔3周。(2)第二次免疫,剂量途径同上,加福氏不完全 ...
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Western Blot 中如何选择内参抗体
Western Blot 即免疫印迹试验,可以利用 Western Blot 来比较在不同条件下,不同细胞组织中目的蛋白表达量的差异,属于定性,半定量试验。既然有差异性比较,参照物必不可少。Western Blot 试验中的标准(表达量)参照物即内参,有了参照物才能准确地比较目的蛋白表达量的差异。内参一般选用管家基因表达的蛋白,它们在各个组织细胞中表达相对恒定,不会因为外部条件变化而引起表达量的变化。而且内参可以监测整个试验体系是否正常, ...
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这些问题才是导致 ELISA 测定结果出错的元凶?
ELISA 即酶联免疫吸附试验,是一种常用的固相酶免疫测定方法。Engvall 和 Perlmann 于 1971 年最先应用该法进行了 IgG 定量测定,并命名为"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。 ELISA 的基本原理是:①使抗原(或抗体)结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性;②使抗原(或抗体)与某种酶联结成酶标抗原(或抗体),而且此酶标抗原(或抗体)既保留其免疫活性,又保留其酶活性;③ 测定时将受检标本(抗体或抗原)和 ...
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抗核抗体(ANA)实验室检测及结果解读
一.1.抗核抗体阳性提示患者结缔组织病的可能,但仍要结合患者的临床表现及各结缔组织病的诊断标准.2.结缔组织病的易感人群一般为中青年女性,老年患者的自身抗体的滴度会升高,但一般为低水平.3.抗核抗体为一大类自身抗体的总称,ANA阳性进一步分型为针对多种核抗原成份特异性的自身抗体,根据间接免疫荧光的荧光模型(抗原底物为HEP-2和肝片)可区分不同的荧光核型,不同核型也有鉴别意义,如SLE多为均质型.MCTD多为颗粒 ...
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