免疫荧光技术常见问题汇总
1、问:免疫荧光:用免疫荧光方法做同样的内容,组织切片和培养细胞,两者操作过程中有哪些不同?参考见解:只是固定方法不同,细胞固定用甲醇,切片固定用多聚甲醛,而染色方法是一样的。2、问:近期要做免疫荧光双标,不知哪位有免疫荧光双标技术的详细步骤以及注意事项?参考见解:我正在做冰冻组织切片的免疫荧光的双染。有些体会:(1)选取primary antibodies时要来源于两种不同的动物,我用的 ...
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HRP标记抗体的方法
酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物,可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。
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缺口平移法探针标记
缺口平移法探针标记 探针的标记方法很多,大致可以分为两大类:引入法和化学修饰法。引入法是运用标记好的核苷酸来合成探针,即先将标记物与核苷酸结合,然后通过DNA聚合酶、RNA聚合酶及末端转移酶等将标记的核苷酸整合入DNA或RNA探针序列中去。化学修饰法即采用化学方法将标记物掺入已合成的探针分子中去,或改变探针原有的结构,使之产生特定的化学基团。引人法较化学修饰法更常用.按其整合的方法不同?引 ...
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随机引物法探针标记
随机引物法探针标记 随机引物法的原理是使被称为随机引物(random primer)的长6个核苷酸的寡核苷酸片段与单链DNA或变性的双链DNA随机互补结合(退火),以提供3,羟基端,在无5,→3,外切酶活性的DNA聚合酶大片段(如Klenow片段)作用下,在引物的3,羟基末端逐个加上核苷酸直至下一个引物。当反应液中含有标记的核苷酸时,即形成标记的DNA探针。6个核苷酸混合物出现所有可能结合 ...
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