人PBMC分离和培养

关键词: 人PBMC 分离 培养 2008-08-19 00:00 来源:互联网 点击次数:13700

1、将静脉血20ml用ACD抗凝剂以容积比血:抗凝剂=9:1抗凝处理

2、按血:分离液=1:2注入国产淋巴细胞分离液上层,400g 20℃离心30分钟

3、交接层重浮于4倍体积的RPMI1640并通过离心法200g,10min洗三次

4、获得细胞可做分选或其他实验。

体会:

1、实验中我用过肝素方法抗凝,但效果不好,因为肝素抗凝后交接层混浊,洗涤后没有细胞。后来是一位老师推荐我用ACD抗凝剂,效果very good

2、实验用的是国产淋巴细胞液(天津TBD),没有用过进口的Ficoll/Paqnl

3、分层时的离心温度只能在20-25℃,过高细胞容易死亡或破坏,过低分层效果不好。我刚开始不知道,试过用5℃离心,其结果是一塌糊涂

4、不能使用角离心机。

编辑: xywym_78
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