利用农杆菌侵染烟草进行体内瞬时表达的方法
原理通常,我们可以利用烟草的瞬时表达系统来观察感兴趣蛋白的亚细胞定位(通过与绿色荧光蛋白构成融合蛋白)。同时,还可以检测蛋白的表达量。这一个过程是通过农杆菌作为一个工具将目的基因整合到到烟草的细胞内的。材料与试剂1. 携带表达载体的农杆菌菌株(通常表达载体由35S启动子驱动)2. 2-4周的烟草植株3. LB培养基4. ...
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【实验技巧】丽春红染色
丽春红(Ponceau S)染色是 WB 实验中的一个重要环节,今天就来给大家详解丽春红染色的作用和操作方法。丽春红染色作用可用于 PVDF 膜,硝酸纤维素膜和和醋酸纤维素膜上的蛋白的检测。丽春红染色原理丽春红带负电荷,可以与带正电荷的氨基酸残基结合,同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合,从而形成红色的条带。丽春红特性丽春红对蛋白的染色是可逆的,染色后可以用蒸馏水,PBS 或其它适当溶液洗去。为什么要用丽春红染色?通过丽春红染色可验 ...
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尿素对蛋白质的变性作用
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【实验技巧】WB 上样前如何制样
WB 是实验室常见实验之一,蛋白定量后,上样之前,还需要哪些步骤制样呢?1. 蛋白含量测定后,Invent 建议大家把各个样品稀释到某一固定浓度(稀释可使用 PBS,水或裂解液),等体积等质量上样,计算上样体积时需包含 loading buffer 的体积。例如:把所有蛋白浓度都稀释到 2ug/ul,然后与 2Xloading buffer 1:1 混合后,浓度成为 1ug/ul,建议上样 20-30ul 即可。2. 与 loading buffer 混匀后,要将样品在沸水中煮 3-5 分钟,使蛋白充分 ...
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