利用农杆菌侵染烟草进行体内瞬时表达的方法
原理通常,我们可以利用烟草的瞬时表达系统来观察感兴趣蛋白的亚细胞定位(通过与绿色荧光蛋白构成融合蛋白)。同时,还可以检测蛋白的表达量。这一个过程是通过农杆菌作为一个工具将目的基因整合到到烟草的细胞内的。材料与试剂1. 携带表达载体的农杆菌菌株(通常表达载体由35S启动子驱动)2. 2-4周的烟草植株3. LB培养基4. ...
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在大肠杆菌中高效表达外源蛋白的策略
本世纪60至70年代对大肠杆菌的研究使之成为自然界中最普遍为人们所认识的生物体。大肠杆菌具有两个显著特征:操作简单和能在廉价的培养基中高密度培养,它的这些特征加上十多年外源基因表达的经验使其在大多数科研应用中成为高效表达异源蛋白最常用的原核表达系统。尽管大肠杆菌有众多的优点,但并非每一种基因都能在其中有效表达。这归因于每种基因都有其独特的结构、mRNA的稳定性和翻译效率、蛋白质折叠的难易程度、宿主 ...
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蛋白的裂解与提取方法步骤
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【实验技巧】丽春红染色
丽春红(Ponceau S)染色是 WB 实验中的一个重要环节,今天就来给大家详解丽春红染色的作用和操作方法。丽春红染色作用可用于 PVDF 膜,硝酸纤维素膜和和醋酸纤维素膜上的蛋白的检测。丽春红染色原理丽春红带负电荷,可以与带正电荷的氨基酸残基结合,同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合,从而形成红色的条带。丽春红特性丽春红对蛋白的染色是可逆的,染色后可以用蒸馏水,PBS 或其它适当溶液洗去。为什么要用丽春红染色?通过丽春红染色可验 ...
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