实验方法原理 | 该检测方法使用毫克级的纯化或半纯化抗原,能筛选抗血清和杂交瘤上清液中的特 异性抗体(图1.1. 1)。Img纯化抗原可用于80〜800个微量滴定板的筛选。
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实验步骤 |
一、实验材料:
二、实验方法
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实验方法原理 | 该检测方法是使用特异性抗体和毫克级纯化或半纯化抗原来定性或定量测定可溶性 抗原的最有效的方法(图1.1. 2)。用抗体替换特异性的酶标抗体,就可转为间接方法, 以种属特异性或同种型特异性酶结合物作为第三种试剂即可检测结合的特异性抗体 的量。
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试剂、试剂盒 | |
实验步骤 |
一、附加材料(其他材料见基本方案) 碱性磷酸酶标记的特异性抗体 标准抗原溶液
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实验方法原理 | 该检测方法比抗原直接结合到固相上的 ELISA 方法敏感性高 2〜5 倍(图 1. 1. 3)。
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实验步骤 |
一、附加材料(其他材料见基本方案)特异性抗体(单克隆或多克隆)或者来自抗血清、腹水或杂交瘤上清液(单元1.4) 中的免疫球蛋白(单元 1.5,单元 1.7)。 二、实验方法
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实验方法原理 | 在有少量酶标特异抗体但无法获得纯化抗原时,用该检测方法筛选特异性抗体最为有效(图1.1.4)。另外,这种方法也可利用那些结合同一抗原的不同单克隆抗体来绘制抗原表位图。
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实验步骤 |
一、附加材料(其他材料见基本方案)包被抗体溶液(特异性针对待测种属免疫球蛋白的抗体,不结合抗原或标记抗体) 碱性磷酸酶标记的针对抗原的特异性抗体 二、实验方法
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实验步骤 |
一、附加材料(其他材料见基本方案)
二、实验方法
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实验方法原理 | 在测定单一细胞群体的抗原表达水平时,该检测过程(图1.1.5)与流式细胞分析 一样灵敏(单元4.1、单元4. 2)。但在检测混合细胞时,敏感性不及流式细胞分析。用生物素化的抗体替代酶标抗体,就可转化为间接方法,而后加入亲和素标记的碱性磷酸 酶再次孵育可增加敏感性。
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实验步骤 |
一、附加材料(其他材料见基本方案)
二、实验方法
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实验方法原理 | 本检测方法可用来筛选细胞表面抗原的特异性抗体(图 1.1.6)。
注意:所有步骤必须在 4°C、含有 NaN3 的生理缓冲液中进行。 |
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实验步骤 |
一、附加材料(其他材料见基本方案)
二、实验方法
预试验中仅加入底物孵育,检测待测细胞本身是否表达碱性磷酸酶。如果表达 量较大,影响酶标抗体的检测敏感性,则用另一种酶标记复合物,如 P-半乳糖苷酶。
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