关键词: 哺乳动物 组织样品 RNA 抽提
来源: 互联网
13546 阅读
哺乳动物组织样品RNA的抽提最基本的要素是防止RNA在抽提过程中降解,以及尽可能得到最高的RNA抽提效率。以下介绍我们实验室认为最符合以上两个要素的抽提方法。
一、实验材料:
Trizol试剂(Invitrogen公司)
研钵,匀浆器,镊子,铝箔都高温灭菌即可;
二、具体过程:
1、样品在离体后应迅速冷冻在液氮中,若是比较大块的组织,要尽量把组织剪切成黄豆大小的块,使液氮迅速渗透到组织内部而防止组织内部的RNA降解。组织用铝箔包好或放入冻存管中,并做好记号,注意不要把记号写在纸上,以防纸被组织的血水渗透而导致记号模糊。可以把铝箔放入纱布袋并储存在液氮中。
2、在抽提RNA前,先把研钵预冷,往研钵内反复加入液氮,至少4-5次,使研钵充分预冷。从液氮罐中取出样本后,把组织块放入已预冷的研钵中进行研磨,边研磨边加液氮(图1),整个过程都不要使液氮挥干。一次研磨的组织块重量不要超过300mg。
图1 用研钵在液氮中把样品研成粉末
3、研磨到组织样品成粉末状后(一般需要8-10min的研磨过程),在液氮基本挥发完时,在每个研钵中加2-3ml Trizol试剂。由于此时研钵很冷,Trizol加入后会冻结成固体状(图2)。可以继续研磨此固体成粉末,随着研钵温度回升到室温,固体状的Trizol逐步回复到液体状态,此时,若发现液体很粘,研杵能牵起丝状物,说明Trizol的量太少,需在此步继续补加Trizol。若Trizol的量过少,会导致抽提的RNA中有较多的基因组DNA污染。由于Trizol试剂中含有强烈的RNA酶抑制剂,因此组织样品和Trizol充分研磨混匀后就不用担心RNA的降解了。
图2 在冰冷的研钵中加入Trizol试剂后 图3 继续把成固体状的Trizol进行研磨,Trizol试剂会冻结成固体
更有优质直播、研选好物、福利活动等你来!
RNA抽提后出现奇怪情况
按步骤用50mg的小鼠肝脏提取总RNA,用预冷的研钵和-70度保存的trizol共研磨组织,氯仿分层,异丙醇沉淀,75%乙醇洗一遍,风干后depc水溶解沉淀,1.5%的琼脂糖电泳220V,20min,结果图如下,各位大神能帮我看看是什么情况吗?
19 评论
siRNA转染后目的蛋白没有减低是为什么?
我想用siRNA抑制DMT1,在吉马公司买了三个siRNA,我用的是lipo2000转染,转染前饥饿2h,转染6小时,后换成完全培养基48小时,对照使用转染GAPDH做的,接下来WB检测DMT1,却没有观察到目的蛋白的下降,请问有人遇到过相似的情况吗?应该怎么解决。
3 评论
最后溶解样品用DEOC水的量
师兄师姐好,我第一次做提取RNA的实验,不知道最后用DEPC水溶解样品时,用多少的DEPC水呢?
本网站所有注明“来源:丁香园”的文字、图片和音视频资料,版权均属于丁香园所有,非经授权,任何媒体、网站或个人不得转载,授权转载时须注明“来源:丁香园”。本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的,且明确注明来源和作者,不希望被转载的媒体或个人可与我们联系,我们将立即进行删除处理。
组织样品RNA稳定液
苏州瑞诺德生物科技有限公司
钻石会员 入驻 7 年
上海研卉生物科技有限公司
金牌会员 入驻 14 年
RNAlater 组织样品RNA稳定液 (
北京兴怡雅创生物技术有限公司
金牌会员 入驻 11 年
Qiagen 76104组织样品RNA稳定液
北京云肽生物科技有限公司
金牌会员 入驻 3 年
皮克级总RNA构建Illumina链特性RNA-seq文库(哺乳动物)
上海百赛生物技术股份有限公司
钻石会员 入驻 14 年
GenElute™哺乳动物总RNA小量制备试剂盒
上海善然生物科技有限公司
金牌会员 入驻 10 年
我的询价
询价列表
暂时没有已询价产品
手机验证
科研好物关注研选号