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本制品是一种快速方便的总RNA提取试剂,可以从动物组织、植物材料、各种微生物、培养细胞等中提取总RNA。样品在RNAiso Reagent中能够充分被裂解,在加入氯仿离心后,溶液会形成上清层、中间层和有机层(下层),RNA分布在上清层中,收集上清层后,经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。
RNAiso Reagent具有很强的广谱性,可以适用于各种样品的总RNA提取,提取过程方便快速,整个操作在一小时内便可以完成。经本制品提取的总RNA纯度高,基本不含蛋白质及基因组 DNA,提取的RNA可以直接用于Northern杂交、斑点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RNA分解酶的保护分析、RT-PCR、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。
【试剂盒之外所需准备试剂】
氯仿、异丙醇、75% 乙醇( D E P C 处理水配制) 、RNase-free水(制备方法:使用RNase-free的玻璃瓶,向超纯水中加DEPC至终浓度0.01%(v/v),过夜搅拌后,高温高压灭菌。)
保存和运输
1. RNAiso Reagent在室温下可以保存12个月,为保证试剂质量,建议于2-8℃下避光保存。
2. 可以在常温下运输。
RNA提取实验前的准备
RNA制备的关键是要抑制细胞中的RNA分解酶和防止所用器具及试剂中的RNA分解酶的污染。因此,在实验中必须采取以下措施:戴一次性干净手套;使用RNA操作专用实验台;在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的RNA分解酶的污染。
【使用器具】
尽量使用一次性塑料器皿,若用玻璃器皿,应在使用前按下列方法进行处理。
1. 用0.1% DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃下处理12小时。
2. 然后在120℃下高压灭菌30分钟以除去残留的DEPC。RNA实验用的器具建议专门使用,不要用于其它实验。
【试剂配制】
用于RNA实验的试剂,须使用干热灭菌(180℃,60分钟)或使用上述方法进行DEPC水处理灭菌后的玻璃容器盛装(也可以使用RNA实验用的一次性塑料容器),使用的无菌水须用0.1%的DEPC处理后再进行高温高压灭菌。RNA实验用的试剂和无菌水都应专用,避免混用后交叉污染。
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RNA抽提后出现奇怪情况
按步骤用50mg的小鼠肝脏提取总RNA,用预冷的研钵和-70度保存的trizol共研磨组织,氯仿分层,异丙醇沉淀,75%乙醇洗一遍,风干后depc水溶解沉淀,1.5%的琼脂糖电泳220V,20min,结果图如下,各位大神能帮我看看是什么情况吗?
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siRNA转染后目的蛋白没有减低是为什么?
我想用siRNA抑制DMT1,在吉马公司买了三个siRNA,我用的是lipo2000转染,转染前饥饿2h,转染6小时,后换成完全培养基48小时,对照使用转染GAPDH做的,接下来WB检测DMT1,却没有观察到目的蛋白的下降,请问有人遇到过相似的情况吗?应该怎么解决。
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师兄师姐好,我第一次做提取RNA的实验,不知道最后用DEPC水溶解样品时,用多少的DEPC水呢?
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