【求助】免疫共沉淀问题

关键词: 免疫共沉淀 2015-09-09 15:28 来源:丁香园论坛 点击次数:850

有郁闷问题想请教各位大侠:
我做免疫共沉淀,从细胞中提取内源性表达的蛋白,按照常规方法做,可是最后银染总是没有条带?
多谢多谢!
有几个问题需要确认一下:

1. 你做免疫共沉淀(IP)的抗体是否可以用。WEstern能识别的抗体不一定能用在IP。

2. 内源性蛋白的表达量。需要先确认一下这个蛋白的表达量,如果这个蛋白本来表达量就很低,那么做IP的难度就很大,这时候需要考虑过量表达这个蛋白了。或者需要收集大量的细胞来跑胶。

3. 银染的问题。我觉得你做IP首先要确认的是你的目的蛋白是否有被IP下来。最好用western检测一下IP沉淀中是否含有你要的内源性表达的蛋白,有的话再进一步做银染。银染的上样量可以大一些。当然我觉得可能你在IP的过程中出现问题的几率比较大。

祝好运。
同意!
分析的很好!学习了

woxingwosu wrote:
有几个问题需要确认一下:

1. 你做免疫共沉淀(IP)的抗体是否可以用。WEstern能识别的抗体不一定能用在IP。

2. 内源性蛋白的表达量。需要先确认一下这个蛋白的表达量,如果这个蛋白本来表达量就很低,那么做IP的难度就很大,这时候需要考虑过量表达这个蛋白了。或者需要收集大量的细胞来跑胶。

3. 银染的问题。我觉得你做IP首先要确认的是你的目的蛋白是否有被IP下来。最好用western检测一下IP沉淀中是否含有你要的内源性表达的蛋白,有的话再进一步做银染。银染的上样量可以大一些。当然我觉得可能你在IP的过程中出现问题的几率比较大。

祝好运。

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