凝胶迁移实验（EMSA）实验方法

凝胶迁移实验有称凝胶阻滞实验或电泳迁移率实验（EMSA，electrophoretic mobility shift assay），是一种用于蛋白与核算相互作用的技术。最初是用于转录因子与启动子相互作用的验证性实验，也可应用与蛋白-DNA、蛋白-RNA互作研究。一、实验原理EMSA主要基于蛋白-探针复合物在在凝胶电泳过程中迁移较慢的原理。根据实验设计特异性和非特异性探针，当核酸探针与样本蛋白混合孵育时，样本中可以与核酸探针 ...

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GUS报告基因的定性和定量检测

一、GUS报告基因的定性检测GUS能与显色底物X-gluc 反应，显现蓝色，因而可以通过组织化学染色定性研究GUS的表达水平和表达模式。GUS 染色的稳定性好，组织定位精确，成为在植物中运用很广的报道基因。1. GUS染色底物的配制按下表1配制GUS染色的底物。表1. GUS染色底物的配制试剂名称母液浓度母 ...

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凝胶阻滞

原理电泳迁移率分析，也可称作迁移电泳，凝胶电泳分析，凝胶迁移率分析，条带移动分析或者凝胶阻滞分析，这种方法常用来研究蛋白质-DNA，蛋白质-RNA的相互作用，对照泳道（不含蛋白质的DNA/RNA探针）将出现单一的条带。如果蛋白质与片段结合，形成大的复合物，因此在凝胶上迁移的速度慢从来迁移率减低。材料和试剂1. DTT（Promega） ...

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自然染色质免疫沉淀实验设计（Native Chromatin Immunoprecipitation (N-ChIP)）

1. The preparation of native chromatin from cultured human cells1.1.Cultured cells (e.g. HL-60 or lymphoblastoids) are grown to a density of approximately 1 x 106 cells/ml until they are inlog phase.1.2.Harvest cells: centrifuge samples (7,000 g, 10 min, 4°C) and wash the cell pellet 3 x ice cold PBS (Pho ...

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