浅谈一般的细胞传代方法
开始细胞传代前,仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全。细胞与试剂方面:1、细胞(单层细胞,镜检适合)2、培养液(MEM-0.2%LH 培养液或MEM 培养液或199 等适合细胞有要求的培养液)3、灭活小牛血清、庆大霉素溶液(1 万单位)4、7.5%NaHC03 溶液5、0.25%胰蛋白酶6、PBS 洗液。实验小用具方面:1、小方瓶(100m1)2、克氏瓶3、胶塞4、吸管(10ml、1m1)5、细胞吹打管(20 ml)(以上用具需经121℃至少15 分钟高压灭菌)6、 ...
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实验小窍门
对于经历了硕士、博士以及博士后磨练的前辈们,大家肯定都有自己的科研体会和实验技巧的窍门或者“绝活”,这些窍门有的可能是书本上学不到的。对于新入实验室的师弟师妹们来说,听听师兄师姐们的实验心得可以使自己更快进入科研角色,避免走很多弯路。形态学方法免疫组织化学实验对象:冰冻切片步骤1、室温下复温30min,0.01MPBS清洗5min×3;2、加入配好的0.3% Triton X100(30% Triton X100+0.01MPBS 100 ...
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启动子与转录因子/基因表达调控蛋白
生命活动丰富多彩、千变万化。但是万变不离其宗,不管如何变化都围绕着中心法则展开。核酸作为遗传物质指导蛋白质的表达,表达产生的一些特殊蛋白(如转录因子、调控蛋白)反过来又对DNA指导合成蛋白质的过程进行调控。对基因表达调控的研究一直是生物学研究热点,涉及到生命活动的各个过程,也是各类信号通路研究无法绕过的部分。当面对某个基因表达调控研究时,第一个想到的研究对象是什么?没错,就是基因的启动子。通过启动子区域对基因表达 ...
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质粒DNA提取常见问题分析
1.加入solution.III,经10分钟离心后细菌沉淀怎么不结实,有的漂浮在液面,有的贴在离心管壁上,一摇晃即破碎脱落下来?细菌的用量太少,导致产生的沉淀主要是盐分的沉淀,因为缺少变性的细菌蛋白和细菌基因组DNA的缠绕,沉淀就显得不结实。解决方法:将细菌的用量增加。2.加入soln.III,经10分钟离心后细菌沉淀怎么不结实,呈大块的水泡状,上清较少?(1)使用了过多的细菌,导致菌体未被有 ...
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