单核苷酸多态性检测方法—SNapShot
SNP(Single Nucleotide Polymorphisms),即单核苷酸多态性,是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性,它是人类可遗传的变异中最常见的一种,并作为第三代遗传标志。人体许多表型差异、对药物或疾病的易感性等等都可能与SNP有关,因此被广泛用于群体遗传学研究和疾病相关基因研究。目前,SNP检测技术已经很成熟,主要有以下几种检测方法:TaqMan探针法、H ...
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做好 ChIP 的四个注意事项
染色质免疫沉淀 (ChIP) 用于检测细胞核中天然染色质内的蛋白质与 DNA 之间的相互作用。ChIP 实验首先需要将细胞固定,即将蛋白质与 DNA 相互作用交联固定到位。然后将染色质打断为片段,使用抗体对目的蛋白质以及与其结合的所有 DNA 进行免疫沉淀。最后,解交联,对沉淀 DNA 进行纯化。纯化的 DNA 可进行进一步的分析,如标准或实时 PCR、芯片或测序分析。这些实验对染色质的完整性、蛋白质表位的质量以及免疫沉淀抗体的特异性非常敏感。尤其当目标蛋白质与 DNA 相 ...
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自然染色质免疫沉淀实验设计(Native Chromatin Immunoprecipitation (N-ChIP))
1. The preparation of native chromatin from cultured human cells1.1.Cultured cells (e.g. HL-60 or lymphoblastoids) are grown to a density of approximately 1 x 106 cells/ml until they are inlog phase.1.2.Harvest cells: centrifuge samples (7,000 g, 10 min, 4°C) and wash the cell pellet 3 x ice cold PBS (Pho ...
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组织染色体免疫共沉淀(ChIP)方法心得
最近要做chip实验,不过是组织的。周围做chip的人不多,有几个做的也是做细胞的。于是到丁香园来搜索,结果只有提问的没有回答的。经过最近的摸索,终于找到了步骤。但进一步的实验还未摸索。在这儿把组织裂解成细胞的方法和步骤分享一下。本人英语水平有限,不保证完全准确。最后会给出原文的Protocol,供大家参考。因为做细胞chip的Protocol还是比较多的。组织裂解成细胞之后就可以按照细胞chip的Protoc ...
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