Southern 杂交操作步骤及注意事项

Southern 杂交是分子生物学的经典实验方法。其基本原理是将待检测的DNA样品固定在固相载体上，与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。通过Southern杂交可以判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。该项技术广泛被应用在遗传病检测、DNA指纹分析和PCR产物判断等研究中。但由于该技术的操作比较烦琐、费时，所以现在有一些其他的 ...

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原位杂交与荧光原位杂交

一、原位杂交( In Situ HybridizationISH) 是用标记的核酸探针，使用非放射检测系统或放射自显影系统，在组织切片、细胞涂片及染色体制片上等对核酸进行定性、定位和相对定量研究的一种分子生物学方法，具有灵敏、特异、直观等优点。已逐渐成为分子生物学和分子病理学的常见技术之一，广泛应用于肿瘤生物学、血液病理学、遗传、微生物学、细胞和分子生物学、神经内分泌学、免疫学等领域及治疗评估和 ...

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Southern印迹

【原理】 Southern 印迹是将电泳分离的 DNA 片段转移到一定的固相支持物上的过程。 DNA 分子经限制性核酸内切酶酶切，经琼脂糖凝胶电泳将得 DNA 片段按分子量大小分离，然后将含 DNA 片段的琼脂糖凝胶变性，并将单链 DNA 片段转移到硝酸纤维素膜或其它固相支持物上，而各 DNA 片段的相对位置保持不变，这种滤膜可用于杂交反应。利用 Southern 印迹法可进行克隆基因的酶切图 ...

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电泳、转膜

转膜是把DNA 从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物（一般是尼龙膜）上固定，是进行各种后续研究（如 RFLP 分析，阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究）的前提。 实验目的： 掌握 Southern blotting 的原理及操作步骤实验原理：1．转膜的方式：向上的毛细管转移向下的毛细管转移同时向两张膜转移电转移真空转移 ...

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