Southern杂交一般操作
一 基因组酶切和电泳在200 μl 微量离心管中加入:25 μl DNA样品(约10μg),3μl 限制性内切酶(MBI,10 U/ μl)5 μl 相应的10×buffer,补水到50μl。然后加一滴矿物油覆盖 稍微离心后放于37℃水浴8-12小时。酶切完后,取5μl 酶切DNA样品于0.8%的琼脂糖凝胶上检测酶是否充分。如果酶切充分,灌制0.8%的agrose胶,加入上样buffer后,在25 ...
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【交流】Southern 杂交与Northern 杂交技术!
本人做的植物转基因技术方向,由于要做一些杂交技术来验证外源基因的整合与表达情况,故将自己在做实验中遇到的一些问题以及注意事项想告诉大家,同时希望和朋友们一起交流探讨。Southern Blot:1.首先是提取大量DNA,由于不同的材料的基因组大小不一样,故上样量也不同,但上样量还是要大一些为好,一般30-50微克左右,若你的DNA质量非常好,一般20微克左右就可以,有的材料如獐茅10微克就可以。注意,上样量与DNA质 ...
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Southern Blotting
主要介绍了Southern Blotting原理、研究方法以及应用。
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Southern blot实验方法与步骤
用于检测重组DNA,也可分析DNA样品中是否有与探针序列同源的DNA片段。用于基因诊断,也可验证检测片段的分子量大小。将基因组DNA经限制性内切酶酶切,进行琼脂糖电泳,把分离后定位在凝胶上的不同分子量的DNA经碱变性处理,将凝胶中变性的DNA转移至一固相支持滤膜。利用标记的某一DNA、RNA或寡核苷酸与固着于滤膜上的DNA发生同源性杂交,利用放射自显影(化学发光法或显色法)检测。(一) 器材: ...
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