1. 选择适当的 96 孔微量血凝板,如果使用鸡或火鸡红细胞,应选用 V 型微量血凝板;如果使用豚鼠或人"O"型红细胞,应选用 U 型微量血凝板。
2. 除第 1 列外,其它所有孔中均加入 50 µL 生理盐水或 PBS。
3. 在第 1 列的每孔中分别加入 100 µL 待检病毒标本。
4. 用多道加样器从第 1 列的每孔中吸出 50 µL 加至第 2 列相应的每孔,混匀。依次作倍比稀释至第 11 列,混匀后弃去 50 µL。
5. 第 12 列各孔作红细胞对照。
6. 用多道加样器在板中每孔中加入 50 µL 0.5% 的鸡红细胞悬液,注意从第 12 列开始依次加到第 1 列,并注意更换吸头。
7. 混匀后室温 (22℃~25℃) 静止。如使用鸡或火鸡红细胞,则需要 30 min; 如使用豚鼠或人"O"型红细胞,则需要 60 min 。
8. 标本血凝滴度的确定
(1) 血球凝集结果:以"++++,+++,++,+,±,-”来表示; 红细胞均匀地铺于孔底上者为"++++";
红细胞铺于孔底,面积稍小,边缘不整齐者为“+++” ;
红细胞形成一个环状,周围有小凝集块者为“++”;
红细胞形成一个小团,但边缘不整齐有小凝集块者为“+” ;
红细胞于孔底形成一个小团,边缘整齐光滑有立体感,或将血凝板倾斜片刻,可见红细胞滑动如泪滴状则为"-"。
(2) 血凝滴度计算:血凝试验的结果以出现++稀释度的倒数为判定终点,也就是一个血凝单位。它表明此浓度的病毒能引起等量的红细胞发生凝集,此稀释度的倒数为红细胞凝集滴度,简称血凝滴度。理论推算,出现血凝"++"的高一个稀释度应为“-”低一个稀释度应为“++++”(或"+++")。4 个血凝单位计算:将血凝单位除以 4, 例如某标本的血凝滴度为 1 : 640, 则它的四个血凝单位应为: 640/4=160, 即将标本进行 1 : 160 稀释时,其稀释液中含 4 个血凝单位。
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