标签: MSCs 人干细胞培养第九章
培养中的MSCs最好通过克隆形成试验和向成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞的三系分化能力进行评估。但是,细胞表面标记分析有利于分析造血细胞的污染程度。来源:《人干细胞培养》
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(a)进行MSCs收集和传代。对悬液中的剩余细胞重新计数以确保准确性。
(b)用CCM制备浓度为1000个细胞/ml的MSCs悬液。
(d准备3个15 cm培养皿,每个加人25 ml预热的新鲜CCM。
(d)向每个培养皿中加人100μL悬液(100个细胞),晃动培养皿使细胞分布均匀,在37℃,5% CO2环境下孵育3周。
(e)3周后,从CFU培养物中吸出培养基,用PBSA润洗培养皿3次。
(f)每个培养皿中加人10 ml结晶紫溶液,室温孵育5〜10 min。
(g)吸出染液,用蒸馏水润洗,直到背景被清除。
(h)计数每个培养皿中的集落数,取其平均值,计算贴壁率或“CFU潜能”(形成的CFU相对于接种个数的百分比)。培养良好的MSCs—般CFU潜能大于40%。
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