MI模型建立与NR给药
建立心肌梗死诱导的急性肾损伤模型,并评估NR治疗的效果。
对2月龄雄性C57BL6/J小鼠进行左前降支冠状动脉结扎以诱导MI,术后30分钟开始腹腔注射NR(400 mg/kg/天)或PBS,持续4或7天。
Nicotinamide Riboside: A Promising Treatment for Type 1 Cardiorenal Syndrome in Myocardial Infarction-Induced Acute Kidney Injury by Upregulating Nicotinamide Phosphoribosyltransferase-Mediated Nicotinamide Dinucleotide Levels
包含动物模型(MI诱导)、组织学(PAS、Masson、TUNEL)、功能检测(尿量、cystatin C、KIM-1)及分子检测(NAD、NAMPT、NMRK-1),但缺少体外或细胞模型验证,主要依赖单一动物模型。
C57BL6/J小鼠心肌梗死模型 MI诱导的急性肾损伤模型
小鼠年龄和性别:2月龄雄性C57BL6/J小鼠 MI诱导方式:左前降支冠状动脉永久结扎 NR给药剂量和途径:400 mg/kg/天,腹腔注射,术后30分钟开始,每日一次直至处死 检测时间点:术后第4天和第7天 肾损伤标志物:尿cystatin C和KIM-1
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
建立心肌梗死诱导的急性肾损伤模型,并评估NR治疗的效果。
对2月龄雄性C57BL6/J小鼠进行左前降支冠状动脉结扎以诱导MI,术后30分钟开始腹腔注射NR(400 mg/kg/天)或PBS,持续4或7天。
验证MI模型并评估NR对心脏功能的影响。
通过超声心动图测量射血分数和心输出量。
评估NR对MI诱导的肾功能损伤的影响。
测量尿量,并通过ELISA检测尿液中的cystatin C和KIM-1水平。
评估NR对肾脏结构损伤、纤维化和细胞死亡的影响。
采用PAS染色观察肾小球和近端小管形态,Masson三色染色检测纤维化,TUNEL染色检测细胞凋亡。
检测NR治疗对肾脏NAD水平及NAD+合成酶表达的影响。
提取肾脏代谢物,测量总NAD水平;通过RT-qPCR检测NAMPT和NMRK-1 mRNA表达;通过免疫组化检测NAMPT蛋白定位。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 超声心动图 | Vevo 2100 | VisualSonics | -- |
| 组织学分析 | ImageJ | -- | -- |
| 免疫组织化学 | EnVision FLEX Mini Kit High pH (K8023) | Dako | K8023 |
| NanoZoomer 2.0-RS | Hamamatsu | -- | |
| TUNEL检测 | FragEL DNA碎片检测试剂盒,比色-TdT酶(QIA33) | Sigma-Aldrich | QIA33 |
| RT-qPCR | TriReagent | Thermo Fisher Scientific | -- |
| NanoDrop ND-1000紫外-可见分光光度计 | -- | -- | |
| ELISA | ELISA试剂盒(Abcam,编号201280和213477) | Abcam | 201280/213477 |
| NAD定量 | LB 942 多功能读板机 | -- | -- |
| 统计分析 | GraphPad Prism 7 | -- | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型 | 小鼠品系、年龄、性别;MI诱导方式(左前降支结扎);实验分组(SHAM+vehicle, SHAM+NR, MI+vehicle, MI+NR) 阅读提示:Methods: Experimental Design, Myocardial Infarction |
| NR给药 | NR剂量(400 mg/kg/天)、给药途径(腹腔注射)、给药时机(术后30分钟开始,每日一次直至处死) 阅读提示:Methods: NR Administration |
| 肾功能评估 | 尿液收集时间和量;ELISA试剂盒(Abcam 201280和213477)及样本处理 阅读提示:Methods: ELISA, Figure 2 legend |
| 组织学分析 | 肾组织固定(4%锌福尔马林)、切片厚度(4μm)、染色方案(PAS, Masson, TUNEL)、分析软件(ImageJ) 阅读提示:Methods: Histological Analysis, Figure 3 and 4 legends |
| 分子检测 | RNA提取方法(TriReagent)、定量方法(NanoDrop)、引物序列(Table S1)、NAD提取缓冲液和定量方法(酶循环法) 阅读提示:Methods: RNA Extraction and RT-qPCR, NAD Extraction and Quantification |