临床影像学评估颅骨免疫细胞富集
检测胶质母细胞瘤患者颅骨中是否有免疫细胞富集。
使用68Ga-Pentixafor PET-CT成像分析19例胶质母细胞瘤患者和6例对照患者的颅骨放射性标记。
Cranioencephalic functional lymphoid units in glioblastoma
整合临床样本、影像学、单细胞测序、流式细胞术、ELISpot、杀伤实验及生存分析等多个证据层级,并进行功能验证。
胶质母细胞瘤患者颅骨骨髓 胶质母细胞瘤肿瘤组织 外周血单个核细胞 远端髋骨骨髓
19例胶质母细胞瘤患者和6例Conn综合征对照的68Ga-Pentixafor PET-CT成像 颅骨、肿瘤、外周血和远端骨髓的CD45+免疫细胞单细胞RNA测序和V(D)J测序 CD8+ T细胞ELISpot检测MHC依赖性IFNγ释放,效应与靶细胞比例2:1 杀伤实验中对自体肿瘤细胞的杀伤能力,细胞比例4:1 CXCR4放射标记颅骨增强与无进展生存期的关联
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
检测胶质母细胞瘤患者颅骨中是否有免疫细胞富集。
使用68Ga-Pentixafor PET-CT成像分析19例胶质母细胞瘤患者和6例对照患者的颅骨放射性标记。
观察颅骨骨髓中免疫细胞的组织学分布。
对颅骨样本进行光片显微镜和免疫荧光染色,分析CD45+和CD34+细胞分布。
分析颅骨、肿瘤、外周血和远端骨髓中的免疫细胞组成和克隆型。
通过scRNA-seq和scVDJ测序分析CD45+细胞,鉴定免疫细胞类型和T细胞克隆共享。
验证颅骨来源CD8+ T细胞的肿瘤反应性和持久性。
通过流式细胞术表型分析、ELISpot检测IFNγ释放、杀伤实验和再刺激实验评估功能。
评估颅骨CXCR4放射标记增强与患者生存的关系。
基于临床影像数据,比较有无颅骨增强患者的无进展生存期。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 影像学 | 镓-68标记的Pentixafor | -- | -- |
| 组织处理 | Dulbecco改良Eagle培养基/F12 | Gibco | 11320033 |
| 抗生素-抗真菌剂 | Gibco | 15240062 | |
| 中性蛋白酶 | Nordmark Biochemicals | S3030112 | |
| 细胞分离 | Histopaque-1077 | Sigma-Aldrich | 10771 |
| REAlease CD45 (TIL) 磁珠试剂盒 | Miltenyi Biotec | 130-121-563 | |
| 细胞培养 | RPMI 1640培养基 | Gibco | 72400021 |
| 人AB血清 | Sigma-Aldrich | H5667 | |
| 白细胞介素-2 | Peprotech | 200-02 | |
| 白细胞介素-15 | Peprotech | 200-15 | |
| 白细胞介素-21 | Peprotech | 200-21 | |
| 人T细胞激活CD3/CD28/CD137 Dynabeads | Gibco | 11163D | |
| 细胞分离 | CD8+ T细胞分离试剂盒 | Miltenyi Biotec | 130-096-495 |
| ELISpot | IFNγ ELISpot试剂盒 | R&D Systems | EL285, |
| 抗HLA-DR抗体 | BioLegend | 307648 | |
| 抗HLA-A/B/C抗体 | BioLegend | 311428 | |
| 细胞培养 | 干扰素-γ | Peprotech | 300-02 |
| 杀伤实验 | CellTracker Red | Invitrogen | C34552 |
| Hoechst 33342 | Thermo Fisher Scientific | 62249 | |
| 流式细胞术 | Cytek 25色免疫分型检测 | Cytek Biosciences | R7-40002 |
| ViaDye Red可固定活力染料 | Cytek Biosciences | -- | |
| BV421-CD95抗体 | BioLegend | 305623 | |
| BV711-CD8抗体 | BioLegend | 344733 | |
| BV510-CCR7抗体 | BioLegend | 353231 | |
| APC-CD4抗体 | BioLegend | 317415 | |
| FITC-CD161抗体 | BioLegend | 339905 | |
| PE-Cy7-CD3抗体 | BioLegend | 344815 | |
| BV650-PD-1抗体 | BioLegend | 329949 | |
| BV786-CD45RA抗体 | BD Biosciences | 563870 | |
| PE-CD56抗体 | BD Biosciences | 555516 | |
| 7AAD | Invitrogen | 00-6993-50 | |
| eFluor660-S1PR1抗体 | Thermo Fisher Scientific | 50-3639-42 | |
| 同型对照 | Thermo Fisher Scientific | 50-4714-82 | |
| 组织学 | 抗CD45抗体 | BioLegend | 304052 |
| 抗CD34抗体 | BioLegend | 343508 | |
| 抗CD3抗体 | BioLegend | 300450 | |
| 抗CD20抗体 | Thermo Fisher Scientific | 53-0202-80 | |
| DAPI | Carl Roth | 6335.1 | |
| 抗CD146抗体 | R&D Systems | AF932 | |
| 抗CXCR4抗体 | Thermo Fisher Scientific | PA3-305 | |
| O.C.T.包埋剂 | Sakura | 4583 | |
| 肉桂酸乙酯 | Sigma-Aldrich | 112372 | |
| 仪器 | NovaSeq 6000测序仪 | Illumina | -- |
| Cytek Aurora流式细胞仪 | Cytek Biosciences | -- | |
| FACS Celesta流式细胞仪 | BD Biosciences | -- | |
| LaVision BioTec Ultramicroscope Blaze光片显微镜 | Miltenyi Biotec / LaVision BioTec | -- | |
| Leica TCS SP8共聚焦显微镜 | Leica | -- | |
| Leica Stellaris 8共聚焦显微镜 | Leica | -- | |
| 细胞培养 | β-巯基乙醇 | Gibco | 21985023 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 临床影像学 | 68Ga-Pentixafor注射活度、成像时间、患者数量 阅读提示:Methods: Clinical CXCR4 radiolabeling |
| 样本收集与处理 | 组织来源、处理时间、酶消化条件 阅读提示:Methods: Tumor tissue processing, Bone sample processing |
| 单细胞测序 | 10X Genomics试剂盒版本、测序平台、细胞活性阈值 阅读提示:Methods: scRNA-seq and analysis |
| 细胞功能检测 | ELISpot效应靶比例、T细胞扩增条件、IFNγ刺激浓度 阅读提示:Methods: ELISpot assays, T cell expansion |
| 流式细胞术 | 抗体克隆、稀释度、仪器设置 阅读提示:Methods: Flow cytometry |