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体内筛选鉴定出通过瞬时UPR诱导β细胞增殖的SIK抑制剂
In vivo screen identifies a SIK inhibitor that induces β cell proliferation through a transient UPR
摘要
已知β细胞增殖在发育期间及成年期特定高血糖条件下可扩大β细胞总量，这一过程或可用于糖尿病中的β细胞再生。本研究通过使用斑马鱼发光泛素化细胞周期指示器（LUCCI）进行新型高通量筛选，鉴定出HG-9-91-01可作为增殖驱动因子，并在小鼠和人类β细胞中验证了该效应。HG-9-91-01是盐诱导激酶（SIKs）的抑制剂，特异性在β细胞中过表达Sik1可阻断HG-9-91-01对β细胞增殖的作用。小鼠β细胞的单细胞转录组分析表明，HG-9-91-01在细胞周期进入前会诱导一波激活转录因子（ATF）6依赖的未折叠蛋白反应（UPR）。重要的是，该UPR波并未伴随胰岛素表达的增加。进一步的机制研究显示，HG-9-91-01通过抑制SIK激活下游多个信号效应分子（包括CRTC1、CRTC2、ATF6、IRE1和mTOR），这些分子协同作用共同驱动β细胞增殖。
实验方法
产品清单
| 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|
| GloMax 96微孔板发光检测仪 | Promega | GM3000 |
| 96孔板 | -- | -- |
| Nano-Glo荧光素酶试剂 | Promega | N1110 |
| 微型渗透泵 | Alzet | model 2001D, model 2001 |
| LSM 710共聚焦显微镜 | Zeiss | -- |
| ImageXpress Pico显微镜 | Molecular Devices | -- |
| Leica SP8共聚焦显微镜 | Leica | -- |
| ImageXpress Micro XLS宽场系统 | Molecular Devices | -- |
| Nikon Eclipse Ti系列显微镜 | Nikon | -- |
| BD FACSAria III流式细胞分选仪 | BD Biosciences | -- |
| FrameStar 384孔板 | Saveen Werner | 4TI-0384/C |
| Mini-PROTEAN 3电泳系统 | Bio-Rad | -- |
| 预制4–20%梯度胶 | Bio-Rad | 4561094 |
| 预制4–15%梯度胶 | Bio-Rad | 4561086 |
| Trans-Blot Turbo转印系统 | Bio-Rad | -- |
| ChemiDoc成像系统 | Bio-Rad | -- |
| GelDoc凝胶成像系统 | Bio-Rad | -- |
| RealPlex 2 PCR仪 | Eppendorf | -- |
| Illumina HiSeq 2000测序仪 | Illumina | -- |