IL-9触发的lncRNA Gm13568通过与CBP/P300相互作用调节星形胶质细胞中的Notch1：参与实验性自身免疫性脑脊髓炎的发病机制

背景：白细胞介素9（IL-9），主要由辅助性T细胞9（Th9）产生，已被认为是多发性硬化症（MS）及其动物模型实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的重要调节因子。星形胶质细胞对IL-9作出反应，反应性星形胶质细胞常与MS和EAE中的血脑屏障损伤、免疫细胞浸润和脊髓损伤相关。在MS发病机制中已鉴定出多个异常表达的长链非编码RNA（lncRNA）。在此，我们研究了lncRNA Gm13568（一种在EAE小鼠和经IL-9激活的小鼠原代星形胶质细胞中均上调的lncRNA）对星形胶质细胞活化和EAE进程的影响。方法：在体外，使用携带胶质纤维酸性蛋白（GFAP）启动子的shRNA重组慢病毒，分别通过Western blot、实时PCR和Cytometric Bead Array检测IL-9处理的星形胶质细胞中的相对基因表达和促炎细胞因子的产生。通过RIP和ChIP实验分析lncRNA Gm13568调节基因表达的机制。通过免疫荧光实验检测星形胶质细胞中的蛋白表达。在体内，应用H&E染色和LFB染色检测感染重组慢病毒的EAE小鼠脊髓中的炎性细胞浸润和髓鞘损伤。结果根据情况采用单因素方差分析或Student's t检验进行分析。结果：敲低内源性lncRNA Gm13568显著抑制IL-9激活的星形胶质细胞中Notch1的表达、星形胶质细胞增生、信号转导与转录激活因子3的磷酸化（p-STAT3）以及炎性细胞因子和趋化因子（IL-6、TNF-α、IP-10）的产生，其中Gm13568与转录共激活因子CBP/P300结合，而CBP/P300富集于Notch1基因启动子。更重要的是，用慢病毒载体抑制星形胶质细胞中的Gm13568可显著改善EAE小鼠的炎症和脱髓鞘，从而延缓EAE进程。结论：这些发现揭示Gm13568调节活化星形胶质细胞中炎性细胞因子的产生，并通过Notch1/STAT3通路影响EAE的发病机制。LncRNA Gm13568可能是治疗MS和脱髓鞘疾病的一个有前景的靶点。